猪PLIN2基因超表达的PK‑15细胞株及扩增PCV2病毒的方法技术
【技术实现步骤摘要】
猪PLIN2基因超表达的PK‐15细胞株及扩增PCV2病毒的方法专利技术所属领域本专利技术属于细胞工程与病毒培养
，具体地说，本专利技术涉及一种能大幅度提高猪圆环病毒2型(PCV2)培养效价的重组细胞株，制备方法及培养高效价PCV2病毒方法。技术背景目前国内正在使用的猪圆环病毒疫苗主要有2种----亚单位苗和全病毒疫苗，亚单位苗虽安全性较好，但生产成本高昂，免疫期短。因此国内绝大部分猪场仍以全病毒疫苗为主。但全病毒疫苗生产亦有其技术瓶颈：病毒培养效价很难上升到理想状态，为解决该难题，疫苗生产者都在其培养工艺中增加一个用D-氨基葡萄糖处理，使细胞停留于分裂Ⅱ期，保证病毒扩增的程序。但该程序不仅增加了原材料投入，而且增多了生产环节和人力投入，增加了废弃物排放量，使生产成本至少增加1倍以上。即便如此，国内许多厂家生产的圆环病毒疫苗，其病毒效价在104以下，免疫效果较差。欧美国家采取筛选对圆环病毒高度敏感细胞系，培养圆环病毒以及进行病毒浓缩，其病毒含量均在106以上，免疫效果较好，但其生产成本高昂，销售价格往往是国产疫苗的3-5倍。因此如何提高圆环病毒的培养效价而又降...
【技术保护点】
猪PLIN2基因超表达的PK‑15细胞株，其特征是：PK‑15细胞含有人工转染的外源猪PLIN2基因，且PLIN2基因具有SEQ ID NO：35所示的核苷酸序列，该细胞对PCV2病毒易感，且能产生效价达到10
【技术特征摘要】
1.猪PLIN2基因超表达的PK-15细胞株，其特征是：PK-15细胞含有人工转染的外源猪PLIN2基因，且PLIN2基因具有SEQIDNO：35所示的核苷酸序列，该细胞对PCV2病毒易感，且能产生效价达到10-7以上的病毒，该细胞是猪肾PK-15/PLIN2细胞株，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:C2017251。2.制备权利要求1中PK-15/PLIN2细胞株的方法，该方法包括如下步骤:1）PLIN2基因的克隆：根据PLIN2基因序列设计重叠PCR引物，共计34条，相邻引物之间有17bp反向互补重叠，中间有25bp未互补序列，34条引物拼接成PLIN2基因的全长,将34条引物混合后经过退火处理，相邻引物的17bp序列互补配对，中间未配对的25bp序列，在高保真酶的作用下序列被补齐，构成完整的双链PLIN2基因的全长序列,经过25个循环后，PLIN2基因得到扩增，然后将扩增获得的片段经电泳检测；2）利用胶回收试剂盒将扩增获得的PLN2基因片段回收，然后用将...
【专利技术属性】
技术研发人员：高其双，刘明，彭霞，程百炼，邓兵，谭隽珺，田晨雪，濮振宇，谭纤茹，
申请(专利权)人：武汉市农业科学院，武汉市工程科学技术研究院，
类型：发明
国别省市：湖北,42
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