一种烟草对南方根结线虫抗性的鉴定方法技术

本发明专利技术属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种鉴定烟草对南方根结线虫是否存在抗性的鉴定方法的专利申请。该方法包括：制备PVY‑NIB基因，并构建瞬时表达载体PVX:pND108‑NIB；转化农杆菌菌株，制备转染用菌液；浸染烟草叶片，鉴定烟草对南方根结线虫的抗性等步骤。本发明专利技术利用烟草抗南方根结线虫基因与PVY‑MSNR基因紧密连锁的特征，通过利用特定的基因，进而转化烟草后，通过抗病与易感品种的表型差别准确和快速的鉴别判定待检品种的抗病性。与现有技术相比，本发明专利技术具有鉴定周期短、可批量应用、鉴定效率高、可为抗病新品培育和筛选奠定技术基础等积极有益效果。

A method for identification of tobacco resistance to the root knot nematode in the South

The invention belongs to the field of plant genetic engineering technology, and specifically relates to a patent application for identifying whether tobacco is resistant to southern root knot nematode. The method includes: preparation of PVY NIB gene, and constructed the transient expression vector PVX:pND108 NIB transformation; Agrobacterium strains, preparation of bacteria liquid transfection; tobacco leaf dip, identification of tobacco root knot nematode resistance. The invention uses tobacco Southern root knot nematode resistance gene and PVY MSNR gene closely linked, through the use of specific genes, and then transformed into tobacco, by identifying resistant and susceptible cultivars of different phenotypes of accurate and rapid determination of resistance of tested cultivars. Compared with the existing technology, the invention has the advantages of short identification cycle, batch application, high identification efficiency, and laying a technological foundation for the cultivation and screening of new disease resistant products.

【技术实现步骤摘要】
一种烟草对南方根结线虫抗性的鉴定方法
本专利技术属于植物基因工程
，具体涉及一种鉴定烟草对南方根结线虫是否存在抗性的鉴定方法的专利申请。
技术介绍
烟草根结线虫病是世界各国烟草生产中的常见病害之一，在我国发生范围最广、危害重、防治难度较大，严重制约了我国烟草行业的发展。根结线虫与其他植物病原物（真菌、细菌、病毒）相比，其能够主动侵袭寄生和自行转移，同时还能与有些病原物形成互作，引起复合病害，也就是说，根结线虫具有双重性病原的特点。研究人员在2005年调查了全国烟草病虫害发生情况，统计结果表明：我国15个主要烟叶生产省中，烟草根结线虫病共发生面积17.981万亩，相当于每亩减产大约30%~50%左右。因此，如何有效地防治根结线虫病已成为当前我国烟叶生产中急需解决的问题。受种植环境和生产成本等因素的限制，大部分缺水旱作烟区无法开展防治效果较好的水旱轮作，从而多采用化学手段防治根结线虫病。虽然取得一些较好的效果，但也造成了农药高残留、高毒性、烟叶品质的下降和环境污染的结果。同时较长时间采用化学防治使得根结线虫产生抗药性。选育和推广抗病品种是防治烟草根结线虫病最经济有效的方法之一，种植本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种烟草对南方根结线虫抗性的鉴定方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：（一）制备PVY‑NIB基因，并构建瞬时表达载体PVX:pND108‑NIB；具体而言：首先，制备PVY‑NIB基因，所述PVY‑NIB基因的碱基序列如SEQ ID NO.1所示；其次，对pND108空载体进行双SalI、Notl双酶切，并回收酶切产物；最后，将pND108空载体的双酶切产物与PVY‑NIB基因进行连接，转化并筛选鉴定后，构建获得瞬时表达载体PVX:pND108‑NIB；（二）转化农杆菌菌株，制备转染用菌液，具体而言：将步骤（一）中所制备瞬时表达载体PVX:pND108‑NIB转化农杆菌菌株，所述农杆菌菌株采...

【技术特征摘要】
1.一种烟草对南方根结线虫抗性的鉴定方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：（一）制备PVY-NIB基因，并构建瞬时表达载体PVX:pND108-NIB；具体而言：首先，制备PVY-NIB基因，所述PVY-NIB基因的碱基序列如SEQIDNO.1所示；其次，对pND108空载体进行双SalI、Notl双酶切，并回收酶切产物；最后，将pND108空载体的双酶切产物与PVY-NIB基因进行连接，转化并筛选鉴定后，构建获得瞬时表达载体PVX:pND108-NIB；（二）转化农杆菌菌株，制备转染用菌液，具体而言：将步骤（一）中所制备瞬时表达载体PVX:pND108-NIB转化农杆菌菌株，所述农杆菌菌株采用农杆菌LBA4404菌株或农杆菌GV3101菌株；转化完成后，筛选阳性转化菌株并鉴定，对鉴定正确菌株进一步培养制备浸染用菌液；（三）浸染烟草叶片，鉴定烟草对南方根结线虫的抗性，具体而言：将待鉴定烟草品种种子播种后，选取生长6~8周的烟草叶片作为鉴定材料；吸取步骤（二）中所制备浸染用菌液，对鉴定材料进行浸润处理，继续培养并观察叶片的生长情况；若烟草叶片上表现出过敏性坏死反应，表明该烟草品种对南方根结线虫具有抗性；若烟草叶片上未表现出任何异常状况，表明该烟草品种...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭玉富，徐世晓，杨铁钊，朱智志，杨永锋，王根发，杨宗灿，程向红，张展，薛刚，
申请(专利权)人：河南中烟工业有限责任公司，河南农业大学，
类型：发明
国别省市：河南,41