冬虫夏草的全人工培养方法技术

本发明专利技术提供了冬虫夏草的全人工培养方法，它包括取样、菌种分离、寄主昆虫采集、繁殖和饲养、侵染、继续饲养，在人工条件下，大量的培养中国被毛孢菌；低海拔环境下规模化室内饲养寄主昆虫，完成中国被毛孢侵染寄主昆虫完成冬虫夏草的有性型。通过人工培养，寄主幼虫个体大，质量好，侵染成功率高，时间短，质量稳定、可控，通过药效试验充分说明，本发明专利技术方法生产冬虫夏草与天然冬虫夏草相比，药效相当，且能克服天然冬虫夏草生长时间长，自然侵染率低的缺点，满足市场需求，实现了冬虫夏草的工厂化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术提供了，属生物领域。
技术介绍
冬虫夏草是一种名贵的菌类中药材，是中国被毛孢侵染只生长在3500-5000公尺高寒灌丛草甸的蝙蝠蛾幼虫产生的有性型。夏初子座出土、孢子未发散时挖取，除去包裹在虫体外的似纤维状菌丝体，晒干或低温干燥。冬虫夏草的寄主蝠蛾幼虫居于土中，中国被毛孢菌侵入虫体后随体液的循环并不断的在幼虫体内生长繁殖、充满整个幼虫体形成菌核，最后从幼虫头部抽生出子座。冬虫夏草主要分布于我国西南、西北3500公尺以上的高原，主要产区是四川、青海、西藏及云贵高原。由于产区局限，产量稀少，国内外的需求量日益增大，刺激藏民乱采滥挖，生态破坏严重，致使冬虫夏草产量急剧下降，价格直线上升，供求矛盾突出，因此全人工培植冬虫夏草的研究是恢复草原生态和对人类健康事业的一大贡献。在自然界寄主昆虫完成一个世代需4年以上的时间，这表明形成冬虫夏草有性型的时间很长；而且在自然界菌、虫接触的机率很小，自然侵染率也很低，冬虫夏草菌侵染寄主蝠蛾幼虫并形成冬虫夏草的有性型的百分率自然就很低。一些生物学专家采用液体深层发酵的方式解决对冬虫夏草的市场需求，由于应用液体深层发酵生产的只能是冬虫夏草的菌丝体，只能加工成冬虫夏草菌丝体的制剂，无法获得和天然同样外形的冬虫夏草，且人们多认可如同天然外形的冬虫夏草，而全人工培养冬虫夏草目前尚无相关报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术方案是，提供，大量的培养中国被毛孢菌；低海拔环境下规模化室内饲养寄主昆虫；人工条件下中国被毛孢侵染寄主昆虫完成冬虫夏草的有性型。本专利技术提供了冬虫夏草的人工培养方法，它包括下列步骤a、取样采冬虫夏草Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.样本；b、菌种分离分别取冬虫夏草的菌核(虫体)部份、子座部份及子囊孢子进行分离、培养得中国被毛孢(Hirsutella Sinensis Liu，Guo，Yu et Zeng.)，保藏号为CCTCC No.M87101；c、寄主昆虫采集、繁殖和饲养首次寄主蝠蛾幼虫采自海拔3500～5000公尺的草原，在人工规模化条件下经过化蛹、羽化、成虫、交尾、产卵、孵化、幼虫饲养，循环进行。d、侵染取b步骤所得中国被毛孢的菌丝体、分生孢子制成混悬液，侵染c步骤人工繁殖的幼虫；e、继续饲养将d步骤经浸染后的幼虫继续饲养至呆滞状态，经低温4～8℃、光照处理，长出子实体，即得人工培养的冬虫夏草。其中步骤a取样采自四川省甘孜州3500～5000公尺的高寒灌丛草甸的冬虫夏草Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.样本。其中步骤b中菌种分离、培养是将菌核(虫体)及子座部分经表面消毒、多次无菌水冲洗后，挑取子囊孢子置有培养基的培养装置中，在8℃～20℃下培养。具体地，可用0.1％升汞液进行表面消毒，无菌水冲洗后切片或切段置培养基培养。步骤b中所述的分离培养基的物料为含马铃薯、葡萄糖、琼脂、蛋白胨的混合液或含马铃薯、葡萄糖、琼脂、蚕蛹汁的混合液，其中含马铃薯、葡萄糖、琼脂、蛋白胨的混合液的重量配比马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、蛋白胨10g，水1000ml。其中步骤c所述的寄主昆虫采集、繁殖和饲养的具体步骤为①寄主昆虫的采集寄主蝠蛾幼虫首次采自海拔3500～5000公尺的草原；②化蛹化蛹期温度为10℃～18℃，湿度45％～60％，蛹的历期20～50天，湿度太低，成虫羽化时，无法展翅；③羽化蛹的羽化温度10～18℃，羽化的空气相对湿度为80～100％； ④成虫、交尾羽化后的成虫即可交尾，并人为的提高交尾率；交尾时间最短时间为10多分钟，最多可达2小时以上，一般在1小时左右；⑤产卵交尾后的雌成虫即行产卵，当天产完大部份卵，第2天还可产少量的卵，收集卵粒置容器养护；产的卵初时为白色，以后变黑色，有时也可不变色；⑥孵化在10～18℃，相对湿度60～90％，经20～55天即孵化；⑦幼虫饲养幼虫饲养温度8～18℃；湿度40％～50％，幼虫的饲养温度高于18℃幼虫表现出多动、焦躁不安的状态，不能正常生长发育；低于8℃取食活动减少，生长缓慢，蝠蛾幼虫比较耐低温；适当提高生长环境的温度，能加快幼虫生长速率，缩短历期；环境湿度过大容易发病致死；过干则造成幼虫大量吐丝，虫体缩小，逐渐死亡，过干过湿均不宜脱皮。整个寄主昆虫的培育时间共需1年。冬虫夏草的寄主有斜脉蝠蛾Hepialus oblifurcus Chu et Wang还有虫草蝙蝠蛾Hepialus armoricanus oberthür，康定蝠蛾Hepialuskangdingensis Chu et Wang，康姬蝠蛾Hepialus kangdingroides Chuet Wang。中国被毛孢菌的寄主蝠蛾种类较多，已鉴定的有19种(朱弘复、王林瑶，冬虫夏草与蝙蝠蛾，动物学集刊，1985(3)121-134)，这些种类均可被侵染形成冬虫夏草有性型。步骤d所述的侵染方法为将所得的菌丝体、分生孢子制成混悬液，直接置于饲养幼虫的饲料中或将幼虫体表皮沾有混悬液中的菌丝及分生孢子，则中国被毛孢菌丝体和分生孢子侵染幼虫体，并随幼虫体液的循环蔓延至幼虫整体，虫体消耗贻尽成为幼虫表皮包裹的菌核，最后从幼虫头壳抽生出子座，完成冬虫夏草的有性型。浸染率在60％以上，而在自然界侵染率仅为15％以下。幼虫的致病菌主要有粉状拟青霉Paecilomyces farinose(Holm exS.F.Gray)Brown & Amith及绿僵菌Metarrhizium sp.，还有一种细菌所致的软腐病。为了提高幼虫的成活率，对幼虫生长空间和幼虫体需进行定期消毒杀菌处理。本专利技术还提供了一种药物组合物，它是由有效量的培养的冬虫夏草为原料与药学上可接受的辅料或食品中的添加剂制成的药剂或食品。其中所述的原料冬虫夏草中每单位原料中含有甘露醇0.3％～0.4％、腺苷含量为0.03-0.036％，通过对上述成分的控制，达到控制本专利技术人工培养方法的培养产品质量的目的。其中所述的药剂为散剂、胶囊剂、片剂、丸剂、口服液。采用本专利技术冬虫夏草的人工培养方法，低海拔环境下室内规模化饲养寄主昆虫，从卵孵化到完成冬虫夏草有性阶段只需1年时间，而冬虫夏草寄主昆虫在自然界从1龄到8龄老熟幼虫的历期在4年以上；人工条件下饲养幼虫个体大，侵染成功率高，对全人工培养的冬虫夏草成分检测表明，本专利技术方法培养的冬虫夏草与天然冬虫夏草成分类同一些成分略高于天然冬虫夏草，另一些成分基本相同，达到成品质量稳定、可控；人工条件下饲养的寄主幼虫个体大，质量好，通过药效试验充分说明，本专利技术方法生产冬虫夏草与天然冬虫夏草相比，药效相当，且能克服天然冬虫夏草生长时间长，自然侵染率低的缺点，满足市场需求，实现了冬虫夏草的工厂化生产。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1人工饲养寄主昆虫的成虫图2人工饲养寄主昆虫的成虫交尾图3人工饲养寄本文档来自技高网...

【技术保护点】
冬虫夏草的全人工培养方法，它包括下列步骤：ａ、取样：取冬虫夏草样本Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓｓｉｎｅｎｓｉｓ（Ｂｅｒｋ．）Ｓａｃｃ．；ｂ、菌种分离：分别取冬虫夏草的菌核部份、子座部份及子囊孢子进行分离、培养得中国被毛孢Ｈｉｒ ｓｕｔｅｌｌａＳｉｎｅｎｓｉｓＬｉｕ，Ｇｕｏ，ＹｕｅｔＺｅｎｇ．，保藏号为ＣＣＴＣＣＮｏ．Ｍ８７１０１；ｃ、寄主昆虫采集、繁殖和饲养：寄主蝠蛾幼虫首次采自海拔３５００～５０００公尺的草原，在人工条件下经过化蛹、羽 化、成虫、交尾、产卵，孵化、幼虫饲养循环进行；ｄ、侵染：将ｂ步骤所得的菌丝体、分生孢子步骤制成混悬液，侵染ｃ步骤繁殖的幼虫；ｅ、继续饲养：将ｄ步骤经浸染后的幼虫继续饲养至呆滞状态，经低温４～８℃，光照处理，至长出子实体，即得 人工培养的冬虫夏草。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：俞永信，
申请(专利权)人：俞永信，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]