癌细胞存在与否的判断方法及其装置制造方法及图纸

本发明专利技术提供一种判断有无癌细胞的方法及用该方法判断有无癌细胞的装置。该方法包括以下步骤：测定步骤，测定含采自患者的细胞的试样中有关癌标志基因表达量的值和有关管家基因表达量的值；第一比较步骤，比较有关癌标志基因表达量的值和第一阈值；标准化步骤，根据有关管家基因表达量的值对有关癌标志基因表达量的值进行标准化处理；第二比较步骤，比较标准化步骤所得标准化值和第二阈值；及判断步骤，根据第一比较步骤和第二比较步骤所获得的比较结果，判断试样中有无癌细胞。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种判断含有采自患者特别是疑为癌转移患者的 细胞的试样中有无癌细胞的方法及仪器。
技术介绍
检查从患者身上采集的试样中有无癌细胞可以作为判断癌细 胞是否向该试样采集的组织和器官转移的指标。为了判断试样中 是否存在癌细胞，过去多采用巴氏染色法等组织细胞诊断法。然 而，这种方法存在诊断结果因作诊断者经验而各异、检査时间长 等问题。最近，使用 LAMP (loop-mediated isothermal amplification method)法禾口 PCR (聚合酶链反应，polymerase chain reaction)法等进行癌分子病理检查的研究日渐盛行。这种分子病理检查可以 通过检测组织和细胞等所含癌标志基因(比如可以在癌细胞特异 表达的蛋白质的mRNA等(以下也简称为癌标志物))进行。比 如，众所周知，作为诊断乳腺癌淋巴结转移的癌标志基因，细胞 角蛋白'19 (CK19)和癌胚抗原(CEA)的mRNA很有用。人们 都知道作为判断胃癌转移的癌标志物CEA非常有用。这些癌标志 物是公认在正常试样中的癌标志物表达量和在有转移癌细胞的试 样中的癌标志物表达量之间具有有效差异的分子。根据癌标志物表达量得出的有无癌细胞的判断结果可以作为比如医生诊断患者有无癌细胞向特定组织转移的指标。过去，进行这种分子检査时，由于每个试样所含细胞数量不 同，都将待分析癌标志物的表达量换算为平均每个细胞的表达量 (标准化)。然后，将试样中的癌标志物的标准化表达量与阈值比 较，来判断有无癌细胞。具体而言，比如用管家基因(据说在多 数组织和细胞中都有一定表达的基因)的表达量除癌标志基因的 表达量，换算为每个管家基因表达量的癌标志物数量，以此进行标准化处理(M.Inokuchi等著，英国癌症杂志(2003) 89, 1750-1756)。美国公报第2007264635号发表了 一个获得预测胃癌复发信息 的方法，即进行一定基因的PCR扩增反应，测定其扩增产物。更 具体地公开了各不相同的实施例用P-肌动蛋白对测定结果进行 标准化处理判断胃癌复发的实施例4和未进行标准化处理进行复 发判断的实施例5。
技术实现思路
本专利技术的范围只由后附权利要求书所规定，在任何程度上都 不受这一节
技术实现思路
的陈述所限。然而，根据进行标准化处理的结果作出判断的方法是以细胞 为均一系细胞(作为分析对象的标本中所有细胞实质上为同一种 细胞)为前提考虑的。比如，当试样中既有正常细胞又有癌细胞 时，用管家基因表达量除癌标志物表达量进行标准化处理的值因 正常细胞和癌细胞的比率而变化。因此，判断结果会被试样中的 正常细胞和癌细胞的比率而左右。艮P，基于标准化结果的判断方法当在研究级别使用诸如培养细胞等均质化细胞为试样时，是有效的方法。但是，在临床标本 那种从患者采集的试样中往往混入正常细胞。因此，在采自患者 的试样中，运用基于标准化结果的判断方法出现了问题。特别是 为判断癌转移所采集的试样是尚不知道是否存在癌细胞的试样， 很难运用基于标准化结果的判断方法。与此相反，采用不进行标准化而根据癌标志物表达量判断的 方法，只要从患者采集的试样中癌标志物表达量达到一定水平， 就可以检测出癌细胞。因此，可以解决在上述标准化中的问题。 另一方面，用此方法要求用于癌标志物表达量测定的试样数量达 到一定量以上。然而，实际上从患者采集的试样往往并不是以良 好的状态供测定癌标志物表达量之用。比如，在腹腔冲洗液中， 有时无法取得足够量的细胞。还会出现腹腔冲洗液中的细胞损伤 或被破坏的情况。因此，即使细胞量本身可以采集到一定量，也会有细胞所含DNA和RNA等核酸分解，待测癌标志基因的绝对 量减少的情况。于是，本专利技术者发现，将试样中所含癌标志基因表达量与阈 值的比较结果同用管家基因表达量对癌标志基因表达量进行标准 化处理所得标准化值与阈值的比较结果组合起来，可以更准确地 判断有无癌细胞，进而判断癌的转移。从而完成了本项专利技术。艮口，本专利技术提供一种判断含采自患者的细胞的试样中有无癌细胞的方法，包括测定步骤，测定试样中有关癌标志基因表达量的值和有关管家基因表达量的值；第一比较步骤，比较有关癌标志基因表达量的值和第一阈值；标准化步骤，根据有关管家基因表达量的值对有关癌标志基 因表达量的值进行标准化处理；第二比较步骤，比较在标准化步骤所得标准化值和第二阈 值；及.判断步骤，根据第一比较步骤和第二比较步骤所获得的比较 结果，判断试样中有无癌细胞。所述方法中判断步骤，用于当癌标志基因表达量的值大于第 一阈值时、及/或标准化值大于第二阈值时，判断试样中存在癌细 胞。所述判断步骤包括根据第一比较步骤中所得比较结果判断试样中有无癌细胞的 第一判銜步骤；根据第二比较步骤中所得比较结果判断试样中有无癌细胞的 第二判断步骤。所述方法中第一判断步骤当癌标志基因表达量的值大于第一 阈值时，判断试样中存在癌细胞。所述方法中第二判断步骤当标准化值大于第二阈值时，判断 试样中存在癌细胞。所述方法中判断步骤，用于当第一判断步骤和第二判断步骤 中至少一个步骤判断试样中存在癌细胞时，作出试样中存在癌细 胞的判断。所述方法中从患者身上采集的细胞是淋巴结组织、血液或体腔清洗液中所含细胞。所述方法中有关癌标志基因表达量的值为测定以癌标志基因的mRNA为铸模进行核酸扩增所产生的扩增产物所获得的值；有关管家基因表达量的值是测定以管家基因的mRNA为铸模 进行核酸扩增所产生的扩增产物所获得的值。所述方法中癌标志基因是细胞角蛋白、癌胚抗原、MUC1粘 蛋白或乳腺球蛋白基因。所述方法中管家基因是3-磷酸甘油醛脱氢酶、亲环蛋白、p-肌动蛋白或a-微管蛋白基因。本专利技术还提供一种判断含采自患者的细胞的试样中有无癌细 胞的方法，包括测定步骤，测定试样中有关癌标志基因表达量的值和有关管 家基因表达量的值；第一比较步骤，比较有关癌标志基因表达量的值和第一阈值；标准化步骤，当在第一比较步骤中，有关癌标志基因表达量 的值小于第一阈值时，根据有关管家基因表达量的值对有关癌标 志基因表达量的值进行标准化处理；第二比较步骤，比较在标准化步骤所得标准化值和第二阈 值；及判断步骤，根据第一比较步骤或第二比较步骤所获得的比较 结果，判断试样中有无癌细胞。前述方法中从患者身上采集的细胞是淋巴结组织、血液或体 腔清洗液中所含细胞。有关癌标志基因表达量的值为测定以癌标志基因的mRNA为 铸模进行核酸扩增所产生的扩增产物所获得的值；有关管家基因表达量的值是测定以管家基因的mRNA为铸模 进行核酸扩增所产生的扩增产物所获得的值。癌标志基因是细胞角蛋白、癌胚抗原、MUCl粘蛋白或乳腺 球蛋白的基因。管家基因是3-磷酸甘油醛脱氢酶、亲环蛋白、P-肌动蛋白或 tx-微管蛋白的基因。本专利技术另提供一种判断含采自患者的细胞的试样中有无癌细 胞的仪器，包括测定装置，用于测定试样中有关癌标志基因表达量的值和有 关管家基因表达量的值；及计算机系统，用于根据测定装置获得的测定结果判断试样中 有无癌细胞；其'中，计算机系统含有在处理器控制下的存储器，存储器储 存有可使处理器进行以下处理的命令第一比较步骤，比较有关癌标志基因表达量的值和第一阈值；标准化步骤，根据有关管家基因表达量的值对有关癌标本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种判断含采自患者的细胞的试样中有无癌细胞的方法，包括：　测定步骤，测定试样中有关癌标志基因表达量的值和有关管家基因表达量的值；　第一比较步骤，比较有关癌标志基因表达量的值和第一阈值；　标准化步骤，根据有关管家基因表达量的值对有关癌标志基因表达量的值进行标准化处理；　第二比较步骤，比较在标准化步骤所得标准化值和第二阈值；及　判断步骤，根据第一比较步骤和第二比较步骤所获得的比较结果，判断试样中有无癌细胞。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：大友泰裕，中林一树，庄司佳代，高田英基，
申请(专利权)人：希森美康株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]