癌细胞的检测方法技术

一种癌细胞的检测方法，包括如下步骤：使含有被检细胞的含末梢血试样与标记用物质在体外接触，使所述标记用物质摄入到所述被检细胞内而对所述被检细胞进行标记、以及从所述被检细胞中检测出由所述标记用物质标记的程度强于含末梢血试样中的正常细胞的标记程度的细胞作为癌细胞。

【技术实现步骤摘要】
癌细胞的检测方法本申请是申请日为2011年12月22日、申请号为201180061918.1(国际申请号为PCT/JP2011/079912)、专利技术名称为“癌细胞的检测方法”的专利技术专利申请的分案申请。
本专利技术涉及癌细胞的检测方法。
技术介绍
日本专利第3834326号公报中公开了使用免疫微珠回收癌细胞后用抗体进行免疫染色等来检测的方法。日本特开2001-41959号公报中公开了通过使固定有特异性地结合癌细胞的配体的载体与含有癌细胞的液体接触而对载体上结合的癌细胞进行标记来检测癌细胞的方法。此外，还有利用细胞的大小与正常细胞分离后通过免疫染色进行检测的方法、通过密度梯度离心分离后进行免疫染色的方法等。另外，作为血液中含有的癌细胞的检测方法，例如，日本专利第3867968号公报中公开了使用腺病毒感染癌细胞使其表达荧光蛋白质而进行检测的方法。
技术实现思路
专利技术所要解决的问题但是，对于日本专利第3834326号公报中记载的技术和其他使用免疫染色的方法而言，如果不表达抗原则无法进行检测，即使是检测时也需要预先确定靶抗原，并且只能检测带有该标靶的细胞。对于日本特开2001-41959号公报中公开的技术那样利用固定有特异性地结合癌细胞的配体的载体的方法而言，需要预先制备这样的载体。另外，对于日本专利第3867968号公报中记载的技术而言，为了感染病毒而需要进行培养，在荧光测定之前需要约24小时的时间。因此，本专利技术的目的在于提供能够在短时间内简便地检测末梢血中的癌细胞的癌细胞检测方法。用于解决问题的手段本专利技术如下所述。[1]一种癌细胞的检测方法，包括如下步骤：使含有被检细胞的含末梢血试样与标记用物质在体外接触，使所述标记用物质摄入到所述被检细胞内而对所述被检细胞进行标记、以及从所述被检细胞中检测出由所述标记用物质标记的程度强于含末梢血试样中的正常细胞的标记程度的细胞作为癌细胞。[2]如[1]所述的检测方法，其中，所述标记用物质为用荧光物质标记的物质或荧光物质的前体物质，所述检测得到由所述荧光物质标记的所述被检细胞的荧光强度。[3]如[1]或[2]所述的检测方法，其中，所述标记用物质为用荧光物质标记的物质或荧光物质的前体物质，所述检测得到选自由由所述荧光物质标记的所述被检细胞的平均荧光强度和总荧光强度组成的组中的至少一种荧光强度。[4]如[1]～[3]中任一项所述的检测方法，其中，所述检测还基于由所述荧光物质标记的所述被检细胞的大小来进行。[5]如[1]～[4]中任一项所述的检测方法，其中，所述标记用物质为选自由标记化的糖、标记化的氨基酸和摄入到细胞内后代谢成原卟啉9的物质组成的组中的至少一种物质。[6]如[1]～[5]中任一项所述的检测方法，其中，所述标记用物质为标记化的糖和标记化的氨基酸。[7]如[1]～[6]中任一项所述的检测方法，其中，所述标记用物质为所述标记化的糖，所述标记化的糖为标记化的单糖。[8]如[1]～[7]中任一项所述的检测方法，其中，所述标记用物质为所述标记化的糖，所述标记化的糖为荧光标记的葡萄糖衍生物。[9]如[1]～[8]中任一项所述的检测方法，其中，所述标记用物质为标记化的氨基酸，所述氨基酸为选自由天然氨基酸和非天然氨基酸组成的组中的至少一种氨基酸。[10]如[1]～[9]中任一项所述的检测方法，其中，所述标记用物质为标记化的氨基酸，所述氨基酸为选自由中性氨基酸和酸性氨基酸组成的组中的至少一种氨基酸。[11]如[1]～[10]中任一项所述的检测方法，其中，所述标记用物质为摄入到细胞内后代谢成原卟啉9的物质，所述物质为选自由氨基乙酰丙酸及其衍生物组成的组中的至少一种物质。[12]如[1]～[11]中任一项所述的检测方法，其中，所述标记用物质为摄入到细胞内后代谢成原卟啉9的物质，所述物质为氨基乙酰丙酸及其衍生物，所述氨基乙酰丙酸及其衍生物为选自由它们的盐、它们的酯和它们的酯的盐组成的组中的至少一种物质。[13]如[1]～[12]中任一项所述的检测方法，其中，含有所述被检细胞的所述含末梢血试样进行了溶血处理。[14]如[1]～[13]中任一项所述的检测方法，其中，包括使细胞种类识别用抗体与含有所述被检细胞的所述含末梢血试样在体外接触的步骤。[15]如[14]所述的检测方法，其中，所述细胞种类识别用抗体为选自由抗CD45抗体和抗CD34抗体组成的组中的至少一种抗体。[16]如[1]～[15]中任一项所述的检测方法，其中，在铁离子和还原剂存在下使含有所述被检细胞的所述含末梢血试样与所述标记用物质在体外接触。[17]如[1]～[16]中任一项所述的检测方法，其中，在选自由诱导胞吞作用的物质和具有细胞膜蛋白质稳定化作用的离子组成的组中的至少一种物质存在下使含有所述被检细胞的所述含末梢血试样与所述标记用物质在体外接触。[18]如[1]～[17]中任一项所述的检测方法，其中，使用浓度为0.1μM～100mM的所述标记用物质使含有所述被检细胞的所述含末梢血试样与所述标记用物质在体外接触。[19]如[1]～[18]中任一项所述的检测方法，其中，在1℃～42℃的条件下使所述标记用物质摄入到所述被检细胞内而进行标记。[20]如[1]～[19]中任一项所述的检测方法，其中，用1分钟～5小时使所述标记用物质摄入到所述被检细胞内而进行标记。[21]一种癌细胞检测用试剂盒，其含有标记用物质以及选自由细胞种类识别用抗体和清洗液组成的组中的至少一种物质。专利技术效果根据本专利技术，能够提供能在短时间内简便地检测末梢血中的癌细胞的癌细胞检测方法。附图说明图1是表示本专利技术的图像处理的内容的流程图。图2是表示本专利技术的图像处理的另一例的内容的流程图。图3是表示本专利技术的图像处理的另一例的内容的流程图。图4是本专利技术的实施例的癌细胞系与血细胞的混合液(试样1)的荧光显微镜照片图像(相位差观察)。图5是本专利技术的实施例的摄入2-NBDG后的试样1的荧光显微镜照片图像(荧光观察)。图6是本专利技术的实施例的抗EpCAM抗体染色后的试样1的荧光显微镜照片图像(荧光观察)。图7是表示本专利技术的实施例的氨基乙酰丙酸的反应性的图。图8是表示本专利技术的实施例的氨基乙酰丙酸的反应性的图。图9是表示本专利技术的实施例的氨基乙酰丙酸的反应性的图。具体实施方式本专利技术的癌细胞检测方法包括如下步骤：使含有被检细胞的含末梢血试样与标记用物质在体外接触、使上述标记用物质摄入到上述被检细胞内而对上述被检细胞进行标记、以及从上述被检细胞中检测出由上述标记用物质标记的程度强于含末梢血试样中的正常细胞的标记程度的细胞作为癌细胞。本专利技术的癌细胞检测方法中，在体外使标记用物质摄入到末梢血细胞中的被检细胞内，并检测出标记程度强于正常细胞的标记程度的细胞作为癌细胞。一般而言，癌细胞的代谢速度比正常细胞的代谢速度快，因此标记用物质的摄入量比正常细胞的摄入量多。另外，癌细胞具有不同于正常细胞的代谢途径，因此标记程度在癌细胞与正常细胞之间存在差异。因此，根据本专利技术，无论有无癌细胞的表面抗原，并且不需要准备特殊的载体，能够基于由标记用物质标记的程度在短时间内简便地判断末梢血细胞中的被检细胞是癌细胞还是正常细胞。本说明书中，“步骤”这一术语不仅包含独立的步骤，而且即使在无法与其他步骤明确区别的情况下，如果能本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种癌细胞的检测方法，包括如下步骤：使含有被检细胞的含末梢血试样与标记用物质在体外接触，使所述标记用物质摄入到所述被检细胞内而对所述被检细胞进行标记，以及从所述被检细胞中检测出由所述标记用物质标记的程度强于含末梢血试样中的正常细胞的标记程度的细胞作为癌细胞，所述标记用物质为选自由标记化的糖和标记化的氨基酸组成的组中的至少一种物质。

【技术特征摘要】
2010.12.24 JP 2010-2889361.标记用物质在制备通过包括如下步骤的方法对癌细胞进行检测的癌细胞检测用试剂盒中的应用：使含有被检细胞的含末梢血试样与标记用物质在体外接触，使所述标记用物质摄入到所述被检细胞内而对所述被检细胞进行标记，以及从所述被检细胞中，将由所述标记用物质标记的程度强于含末梢血试样中的正常细胞的标记程度的细胞与正常细胞识别开而检测为癌细胞，所述标记用物质组合使用标记化的糖和标记化的氨基酸，所述标记化的糖为荧光标记化的单糖，所述标记化的氨基酸为荧光标记化的中性氨基酸，所述检测还基于由所述荧光物质标记的所述被检细胞的大小来进行，用于所述标记化的糖的标记的荧光标记物质与用于所述标记化的氨基酸的标记的荧光标记物质是最大吸收波长之差为75nm以内且最大荧光波长之差为150nm以内的组合。2.如权利要求1所述的应用，其中，所述检测得到由所述荧光物质标记的所述被检细胞的荧光强度。3.如权利要求1所述的应用，其中，所述检测得到选自由由所述荧光物质标记的所述被检细胞的平均荧光强度和总荧光强度组成的组中的至少一种荧光强度。4.如权利要求1所述的应用，其中，所述标记化的糖为荧光标记的葡萄糖衍生物。5.如权利要求1所述的应用，其中，所述氨基酸为选自由天然氨基酸和非天然氨基酸组成的组中的至少一种氨基酸。6.如权利要求1所述的应用，其中，含有所述被检细胞的所述含末梢血试样进行了溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：高木英纪，伊藤博史，小塚昌弘，
申请(专利权)人：爱科来株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP