一种用于癌细胞中Zn2+监测的荧光探针方法技术
【技术实现步骤摘要】
一种用于癌细胞中Zn2+监测的荧光探针方法
本专利技术属分析化学领域，具体地说是一种用于活体癌细胞中Zn2+检测的荧光探针方法。
技术介绍
细胞是生命活动的基本单位，是一切有机生命体构成的基础单元，细胞研究是所有基于生命科学研究的出发点，其生长、衰老等周期现象将直接影响生物体的生命活动。一些重金属和过渡金属元素因参与细胞生长发育、基因转录、神经传递等过程而具有非常重要的生理作用和功能，但当含量超过其相应的阈值时，它们对生物体的生长发育、生理代谢甚至于形态结构等会造成明显损伤。因此要研究各种离子对生物体的影响，非常必要的一步就是活体细胞内离子的在线可视化实时监测。活细胞成像技术是生命科学
中重要的研究手段，与固定细胞研究结合起来，可以解释活细胞中的多种生命现象。近年来，随着生命科学的不断发展，人们对细胞内的活性物种、细胞信号传导及细胞凋亡等方面的研究越来越深入。荧光显微成像技术是一种可以实现在线可视化实时检测细胞内离子的方法，此种方法较之其他手段不仅具有方法简便、灵敏度高、选择性好以及响应速度快等优点，更主要的是可以在不杀死细胞的情况下观察活体细胞，保持了细胞...
【技术保护点】
一种用于癌细胞中Zn2+监测的荧光探针方法，其特征是以化合物双‑(7‑羟基‑香豆素‑8‑醛)缩乙二胺为监测细胞内微量Zn2+的荧光探针，利用探针与Zn2+选择性形成配合物而发射强烈荧光的特性，探针、Zn2+能分别渗透到活癌细胞内，与细胞相容，通过探针与细胞内Zn2+结合发射荧光，用荧光倒置显微镜检测出清晰的蓝色荧光细胞图像，探针用作活体癌细胞中Zn2+的荧光成像试剂。
【技术特征摘要】
1.一种用于癌细胞中Zn2+监测的荧光探针方法，其特征是以化合物双-(7-羟基-香豆素-8-醛)缩乙二胺为监测细胞内微量Zn2+的荧光探针，利用探针与Zn2+选择性形成配合物而发射强烈荧光的特性，探针、Zn2+能分别渗透到活癌细胞内，与细胞相容，通过探针与细胞内Zn2+结合发射荧光，用荧光倒置显微镜检测出清晰的蓝色荧光细胞图像，探针用作活体癌细胞中Zn2+的荧光成像试剂。2.根据权利要求1所述的一种用于癌细胞中Zn2+监测的荧光探针方法，其特征是用探针对细胞内Zn2+进行染色，用显微镜观测细胞的荧光影像，具体方法为：1)细胞培养：PC3活性前列腺癌细胞，简称PC3细胞，经复苏接种于含10％胎牛血清和含1％双抗RPMI1640的培养基中，在温度为37℃，5％CO2及饱和湿度为100％的培养箱中培养，每隔2-3天传代1次，选择生长饱满的细胞接种于12孔板中培养，密度为2×104个/ml；2)探针与细胞孵化：次日用新鲜培养基清洗细胞两次，将细胞浸入浓度为10μmol·L-1探针溶液中，其组成由900μL培养基+100μL用体积比为1/4的N，N-二甲基甲酰胺/H2O配制的浓度为100μmol·L-1探针混合而成，在37℃的5％CO2、饱和湿度100％的培养箱中孵育30min，吸出含探针的培养液，用新鲜培养基清洗细胞三次，荧光倒置显微镜下观察并进行亮场和暗场拍照；3)Zn2+对细胞染色：在上述经探针孵化过的细胞中再浸入含50μmol·L-1Zn2+溶液，其组成由900μL培养基+100μL浓度为500μmol·L-1的Zn2+溶液混合而成，在37℃的5％CO2、饱和湿度100％的培养箱中孵育30min，进行细胞内探针对Zn2+染色，吸出含Zn2+溶液的培养液，染色后的细胞再用新鲜培...
【专利技术属性】
技术研发人员：袁剑英，李丽，沈韵，曾晞，牟兰，
申请(专利权)人：贵州大学，
类型：发明
国别省市：贵州;52
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