用于微生物学实验室日常诊断中迅速检测和鉴别临床样品中普通细菌病原体和抗生素抗性基因之特异性和通用性**制造技术

本发明专利技术涉及基于ＤＮＡ的通用的细菌检测方法，用于直接从临床样品或者从细菌菌落特异性地检测肺炎克雷伯氏菌、铜绿假单胞菌、奇异变形菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌、腐生葡萄球菌、酿脓链球菌、流感嗜血菌和粘膜炎莫拉氏菌以及特异性地检测通常遇到的和与临床有关的细菌抗生素抗性基因。上述细菌物种总共可以占到常规微生物学实验室分离到的细菌病原体的８０％。本发明专利技术的核心内容主要包括得自所有物种特异性基因组ＤＮＡ片段的ＤＮＡ序列以及源于这些序列的任何寡核苷酸序列，所述的片段是经杂交从基因组文库选择的或从数据库选择的，所述的寡核苷酸序列可以用作ＰＣＲ或任何其它核苷酸扩增方法的探针或扩增引物。本发明专利技术也包括选择的临床相关抗生素抗性基因的ＤＮＡ序列。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

技术介绍
细菌的经典鉴别细菌的经典鉴别是通过使用生物化学方法(如API20ETM系统)测定它们利用不同的底物作为碳源和氮源的能力来鉴别的。革兰氏阴性杆菌的敏感性试验发展到微稀释试验。尽管API和微稀释系统费用可行，但由于必须进行连续两个过夜培养以从样品中分离和鉴别细菌，获得初步的结果至少需要两天。也开发了一些使用先进和昂贵仪器的更快速的检测方法。例如，最快的鉴别系统(autoSCAN-Walk-AwayTM系统)在2小时内可从分离的细菌菌落中鉴别出革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌，而且仅仅7小时内就能鉴别出对抗生素的敏感方式。然而，这个系统的出错幅度使人无法接受，尤其是鉴别非肠杆菌科的细菌物种时(York等，1992，临床微生物杂志，302903-2910)。但是，即使这种最快速的方法也需要首先把细菌分离为纯培养物，需纯培养物时这一过程要花费至少18小时，需混合培养物时这一过程要花费至少2至3天。尿样在常规诊断微生物实验室接受的用于细菌鉴别的大部分样品(40-50％)是尿样(Pezzlo，1988，临床微生物学回顾，1268-280)。尿道感染(UTI)是极其常见的，感染的妇女多达20％，在住本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在怀疑包含有细菌核酸的任何样品中使用探针（片段和／或寡核苷酸）和／或扩增引物的方法，所述探针和／或扩增引物对检测核酸的存在和／或其量而言是特异的、普遍的和敏感的，所述核酸得自选自下组的细菌物种：大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌、铜绿假单胞菌、奇异变形菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌、腐生葡萄球菌、酿脓链球菌、流感嗜血菌和粘膜炎莫拉氏菌，其中所说的细菌核酸或其变体或部分包含可与所说的探针或引物杂交的选择的靶区，该方法包括以下步骤：使所说的样品与所述的探针或引物接触，并检测指示所说的任何细菌物种的存在和／或其量的杂交探针或扩增产物的存在和／或其量。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：MG伯杰龙，M奎尔特，PH罗伊，
申请(专利权)人：感染诊断ICI公司，
类型：发明
国别省市：CA[加拿大]