染色体21基因标记,组合物及其使用方法技术

本发明专利技术提供了编码人ＥＨＯＣ－１蛋白的分离的核酸以及其所编码的分离的受体蛋白。另外还提供了含有本发明专利技术核酸的载体，与核酸进行杂交的探针，用其转化的宿主细胞，其反义寡核苷酸及含其的组合物，特异连接于本发明专利技术多肽的抗体及含抗体组合物，以及表达本发明专利技术蛋白的转基因非人哺乳动物。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术
技术介绍
在分子遗传学上人们一项主要的工作是作人基因组的图谱。人基因组图谱化一般包括使用一些方法，例如原位荧光杂交(FISH)，体细胞杂交分析或随机克隆指纹法，对基因组的DNA片断在它们的染色体上进行排序。相应于标记的多态位点的DNA片断可通过基因连锁分析进行排序。多态位点之间的距离可用减数分裂的重组频率进行估算。但是，由于在分子水平分辨率低并且重组频率与物理距离并不线性相关，使用这些方法并不能轻易地得到基于估算距离的高分辨率的图谱。各种障碍，例如难以获得高信息量的标记以及缺乏平均分布于染色体上的识别标志，因而是当前已知基因图谱的主要缺陷。大多数的图谱标记是由DNA杂交法分析的限制片断长度多态(RFLPs)。虽然基于这些标记的图谱已在一些疾病的主要图谱描绘中起到了很大作用，但它们在一些应用中仍显不足，这些应用包括罕见单因子疾病的图谱描述，精确适于基因识别的连锁图距，对于导致复杂性状的位点的图谱描绘。基因连锁图谱是应用于人体生物学研究的一项重要技术，尤其是对于疾病分子基础的描述。实际上，研究人遗传疾病的最常用的方法之一是克隆基于染色体位置的相应基因。因此，基因连锁图谱可以加速对于与单基因疾病有关的基因及与多因子病症有关的基因的识别及图谱制作，并且基因连锁图谱对于载体探测及遗传病症的产前诊断也有用。详细的连锁图谱也是作基于克隆的物理图谱及对整个染色体的DNA排序的先决条件。人染色体21是作大规模人基因组图谱尝试的一个范例。作为最小的人染色体，染色体21具有大约50兆(Mb)的DNA。在估计存在于染色体21上的2000个基因中人们已知的不足1％。由于其对家族的阿耳茨海默氏病(FAD)、Doun氏综合症(DS)，肌肉萎缩性侧索硬化(ALS)及Finnish进行性肌阵挛性癫痫的明显作用，染色体的高分辨图谱有着特别的吸引力。基于与外围着丝粒的遗传连锁，导致FAD的基因缺陷已在染色体21上定位。编码与阿耳茨海默氏相关的淀粉样β蛋白(APP)的前体的基因也已图谱定位于染色体21上，所述淀粉样β蛋白是阿耳茨海默氏病(AD)的老年噬斑和脑血管的淀粉样沉淀的主要成分。作出这样一个大跨度图谱需要对克隆基因片断中的界标进行识别和定位。当对于克隆片断的尺寸有足够的界标时，就形成了相邻单位图谱(contigs)，并且同时界标被排序。目前，YAC，或酵母人工染色体，被用于作大部分人基因组图谱。YAC允许克隆的片断≥约500Kb。于是，在YAC文库的运用中已遇到了一些困难。例如，在各种YAC文库中，一部分克隆由共克隆事件形成，即将不相关的DNA片断包含到一个单克隆中。高百分比的YAC克隆，特别是具有高分子量插人片断的克隆，是嵌合的。嵌合克隆图谱定位于染色体的多个位点并且因此妨碍了作图谱及分析的过程。另一个YAC克隆所特有的问题是由不能克隆或不稳定因而容易重排和缺失的DNA链段造成的。细菌人工染色体(BAC)为YAC系统提供了一个选择。BAC减轻了YAC的最困难的方面，例如高比率嵌合和克隆不稳定性。BAC基于E.Coli单拷贝质粒F因子并能够对尺寸大于300Kb的DNA片断进行可靠增殖。BAC具有一些物理性能，这些性能使得BAC适于作物理图谱，包括易于操纵和无嵌合。无嵌合和增殖大的外来插入DNA的能力使得BAC成为染色体漫步和产生相邻物理图谱的最佳候选者。对染色体21进行分子描述的需要直接来自于与几种人遗传疾病的联系。包含此染色体的相邻单位图谱(contigs)可以加速关于这些疾病原因的识别。实际上，一旦被遗传连锁和细胞遗传分析所定位，详细的图谱为基因组区段提供了及时的信息，包括任何病理位点。因此，有必要对染色体21位点上的大量基因进行识别，定性和作图谱，这样可促进将高分辨染色体图谱尽快转换成生物学上，医学上和诊断上的应用。本专利技术满足了这种需求并且还提供了有关的方便。本专利技术概述本专利技术提供了编码人EHOC-1蛋白的分离核酸及其所编码的分离的受体蛋白。另外还提供了含有本专利技术核酸的载体，与核酸进行杂交的探针，用其转化的宿主细胞，其反义寡核苷酸及含其组合物，特异连接于本专利技术多肽的抗体及含抗体组合物以及表达本专利技术蛋白的转基因的非人哺乳动物。附图简述附图说明图1显示了HPE1的共有区的物理图谱。图2显示了与HPE1共有区相关的EPM1共有区的物理图谱。YAC克隆，BAC克隆和EHOC-1的位置由密集的条纹块指明。图3A显示的区域中，EHOC-1与转膜蛋白具有同源性。区域1代表与大鼠钠通道蛋白III相重叠的34个氨基酸中29.4％的同一性。区域2代表与沙门氏菌typhimurin的磷酸甘油酸传递系统调节蛋白相重叠的103个氨基酸中20.4％的同一性。图3代表与Arabidopsis thaliana的由焦磷酸提供能量的液泡膜质子泵相重叠的55个氨基酸中29.1％的同一性。区域4代表与Saccharanyces cerevisiae的类肌球蛋白相重叠的30个氨基酸中24.0％的同一性。区域5代表与兔心肌ryanodine受体相重叠的39个氨基酸中17.9％的同一性。区域6代表与大鼠心肌钠通道蛋白α亚基相重叠的62个氨基酸中21.0％的同一性。区域7代表与大鼠肾架肌钠通道蛋白α亚基相重叠的27个氨基酸中40.7％的同一性。区域8代表与营养不良素(dystrophin)富含半胱氨酸区相重叠的33个氨基酸中30.3％的同一性。图3B表示通过连锁不平衡研究计算出的距EPM1座位的遗传距离的比较(Lehesjoki等人，Hum.Mol.Genet.)，21229-1234(1993))。图4表示剪切变异体的推断位置及编码EHOC-1多肽的cDNA的不同同型的Poly(A)+附着位点。本专利技术详述进行性肌阵挛癫痫(PMEs)是一个不均一的疾病群，其特征为肌阵挛，癫痫发作进行性神经病学上的衰退包括共济失调和痴呆，Berkovic等人，New Engl.J.Med.，315296-305(1986)。Unverricht-Lundborg型的PME(EPM1)在芬兰和地中海地区是惯常具有血亲关系的常染色体退化病症，在芬兰它的发病率至少为1∶20,000。遗传连锁分析表明EPM1的座位在染色体21q22.3上，Malafosse等人，Lancet，3391080-1080(1992)，并且将也是PME的一个成员的拉福拉病排除出该地区，Lehesjoki等人，神经学(Neurology)，321545-1150(1992)。连锁不平衡分析使之可能将代表区域缩小为300kb，跨距PFKL，D21S25和D21S154的位点，Lehesjoki等人，人类分子遗传学(Hum.Mol.Genet.)，21229-1234(1993)；Lehesjoki等人，人类遗传学(Human Genetics)，93668-674(1994)。通过连锁不稳定分析将自动免疫的多腺疾病型I(APECED)图谱定位于染色体21q22.3，Aaltonen，J.等人，自然遗传学(Nature Genet.)883-87(1994)。APECED是一种常染色体退化病症，它会引起各种组合的甲状腺旁腺体、肾上腺皮层、性腺胰脏β细胞、甲状腺以及胃壁细胞衰竭。APECED的附带病症本文档来自技高网...

【技术保护点】
编码入ＥＨＯＣ－１多肽的分离的核酸。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：朱利R考伦伯格，山川和弘，
申请(专利权)人：塞达斯西奈医疗中心，
类型：发明
国别省市：US[美国]