低密度脂蛋白受体检测试剂及方法技术

一种低密度脂蛋白受体检测试剂及方法，它的试剂的组份有：低密度脂蛋白；两性粘合剂；细胞分离液；细胞固定及防止结合物内移复合剂；反映体系终止及反应显色剂；体系定量标准参照物。检测步骤：取标准反应池；取细胞两性粘合剂放置２小时；用细胞分离液严格分离血液中的细胞，取一定的细胞放置于反应池中，加入复合剂；设置反应池和空白反应池；加入低密度脂蛋白；加入酶标记的抗低密度脂蛋白抗体；加入反应体系终止及反应显色液。本方法可直接对细胞表面有生物功能的低密度脂蛋白受体进行定量分析，是诊断家族高脂血症的理想检测方法。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种，特别是诊断家族性高胆固醇血症对细胞LDL-R的检测试剂及方法。低密度脂蛋白代谢是借助细胞表面有功能的低密度脂蛋白受体，使循环的LDL与细胞表面的LDL-R相互结合，被细胞吞噬进行分解代谢，载脂蛋白分解成氨基酸，脂质参加脂类代谢，防止循环血液中LDL水平增高，过多的LDL被吞噬细胞和动脉基底平滑肌细胞吞噬，形成泡沫细胞聚集而导致动脉粥样硬化。家族性高胆固醇血症是由于LDL-R基因和其它因素导致细胞表面LDL-R功能障碍，不能与循环的LDL结合或结合后不能将LDL吞入细胞而造成LDL增高，青年时期就形成动脉硬化、黄色瘤，除此而外其它因素也可以使LDL增高，如何诊断患者是否有细胞表面LDL-R蛋白的缺陷，最早是从血浆中LDL水平是否增高来间接评价，其不足之处是这种方法不能确定血浆高水平的LDL是由于LDL-R功能障碍而引起。而后国外研究利用放射性同位素标记抗LDL抗体的方法来检查血浆中的游离的LDL-R，但游离的LDL-R与细胞表面的LDL-R并非完全成直线相关，因此检测血浆中的游离的LDL-R不能完全评价细胞表面的LDL-R蛋白质功能。经中国医学科学院医学信息研究所对1994-1999年国内外230万篇文献检索，未见有相关文献报道。为此检测行业渴望有能够诊断家族性高胆固醇血症的细胞LDL-R检测方法。本专利技术的目的在于提供一种检测试剂，用用这种试剂按一定的操作步骤直接对细胞表面有生物功能的低密度脂蛋白受体LDL-R进行定量分析，来诊断检测家族性高胆固醇血症的。本专利技术的目的是这样实现的制备试剂试剂的组份有，低密度脂蛋白；辣根过氧化物酶标记的抗低密度脂蛋白两性粘合剂；细胞分离液；细胞固定及防止受体-配体结合物内移复合剂；反映体系终止及反应显色剂；体系定量标准参照物。检测步骤取反应池底面积相同，底层吸光度相同的标准反应池；取细胞两性粘合剂，在20℃-50℃的温度下放置2小时；用细胞分离液严格分离血液中的细胞，取一定的细胞放置于反应池中20-60分钟，加入细胞固定受体内移复合剂，2-18分钟；设置体系定量标准参照物反应池和空白反应池；加入低密度脂蛋白，20-50℃反应一个小时；加入酶标记的抗低密度脂蛋白抗体，反应5-50分钟；加入反应体系终止及反应显色液，稳定5-40分钟；用酶标分析仪进行检测。本专利技术的优点是1、直接对细胞表面有生物功能的低密度脂蛋白受体(LDL-R)进行定量分析，解决了目前不能对细胞表面LDL-R进行直接定量分析，只能测定循环血液中的低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)或检查游离LDL-R蛋白水平的多少的问题。2、使疾病诊断由目前单纯测定大分子物质转化到测定有生物活性的大生物大分子，可更直接的检查分析机体的生物功能物质。3、可有效的检测家族性高胆固醇症。下面结合实施例详述本专利技术。本专利技术的技术方案是诊断家族性高胆固醇血症所使用的试剂及检测方法。它包括两大步骤，一是制备试剂，二是操作步骤。试剂是检测过程中使用的产品，它的组份是1、低密度脂蛋白，含量0.8-10.0mmol/L；2、辣根过氧化物酶标记的抗低密度脂蛋白两性粘合剂20-30W/V；3、细胞分离液10-40W/V，NaHCO30.1-1.5g；4、细胞固定及防止受体-配体结合物内移复合剂；反映体系终止及反应显色剂；体系定量标准参照物。检测方法按下述步骤进行1、取反应池底面积相同，底层吸光度相同的标准反应池；2、取配体中的细胞两性粘合剂20-25ul，20℃-50℃放置2小时；3、用配体中的细胞分离液(FICOLL)10-40w/v，NaHCO30.1-1.5g严格分离血液中的细胞，取一定的细胞放置于反应池中，20℃-80℃，20-60分钟；4、加入配体中的细胞固定受体内移复合剂4-30UL，2-18分钟；5、设置体系定量标准参照物反应池和空白反应池；6、加入低密度脂蛋白5-150ul，20-50℃反应一个小时；7、加入酶标记的抗低密度脂蛋白抗体，一定温度(根据实际情况定温度)反应5-50分钟；8、加入反应体系终止及反应显色液5-30ul，稳定5-40分钟；用酶标分析仪进行检测。9、根据检测结果确定是否为高胆固醇血症。权利要求1.一种低密度脂蛋白受体检测试剂，其特征在于试剂的组份有，低密度脂蛋白；辣根过氧化物酶标记的抗低密度脂蛋白两性粘合剂；细胞分离液；细胞固定及防止受体-配体结合物内移复合剂；反映体系终止及反应显色剂；体系定量标准参照物。2.一种用权利要求1对低密度脂蛋白受体的检测方法，其特征在于它按下述检测步骤检测a、取反应池底面积相同，底层吸光度相同的标准反应池；b、取细胞两性粘合剂，在20℃-50℃的温度下放置2小时；c、用细胞分离液严格分离血液中的细胞，取一定的细胞放置于反应池中20-60分钟，加入细胞固定受体内移复合剂，2-18分钟；d、设置体系定量标准参照物反应池和空白反应池；加入低密度脂蛋白，20-50℃反应一个小时；e、加入酶标记的抗低密度脂蛋白抗体，反应5-50分钟；f、加入反应体系终止及反应显色液，稳定5-40分钟；g、用酶标分析仪进行检测。全文摘要一种,它的试剂的组份有:低密度脂蛋白;两性粘合剂;细胞分离液;细胞固定及防止结合物内移复合剂;反映体系终止及反应显色剂;体系定量标准参照物。检测步骤:取标准反应池;取细胞两性粘合剂放置2小时;用细胞分离液严格分离血液中的细胞,取一定的细胞放置于反应池中,加入复合剂;设置反应池和空白反应池;加入低密度脂蛋白;加入酶标记的抗低密度脂蛋白抗体;加入反应体系终止及反应显色液。本方法可直接对细胞表面有生物功能的低密度脂蛋白受体进行定量分析,是诊断家族高脂血症的理想检测方法。文档编号C12Q1/28GK1295132SQ9912127公开日2001年5月16日 申请日期1999年11月4日 优先权日1999年11月4日专利技术者孙续国 申请人:孙续国本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种低密度脂蛋白受体检测试剂，其特征在于：试剂的组份有，低密度脂蛋白；辣根过氧化物酶标记的抗低密度脂蛋白两性粘合剂；细胞分离液；细胞固定及防止受体－配体结合物内移复合剂；反映体系终止及反应显色剂；体系定量标准参照物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孙续国，
申请(专利权)人：孙续国，
类型：发明
国别省市：13[中国|河北]