一种蛋白质等电聚焦电泳方法及其配胶装置制造方法及图纸

本发明专利技术公开了一种蛋白质等电聚焦电泳方法及其配胶装置，属于生物分离检测技术领域。该方法包括配胶、灌胶、预电泳、电泳、以及凝胶固定、脱色、染色等步骤，本发明专利技术的方法通过改变样品的上样方式和预电泳与电泳的电压和电泳时间，使得得到的蛋白质电泳条带清晰、分离度好、不扩散不拖尾，有效解决了现有技术电泳时间长、蛋白扩散拖尾等问题，大大提高了配胶成功率。本发明专利技术的配胶装置包括配胶支架、固定架、配胶玻璃、垫片和防漏垫等部件，本发明专利技术通过改良配胶装置的结构，不仅使得试剂消耗量降低，而且灌胶迅速且不产生气泡，聚胶均匀，大大提高了配胶成功率的同时还降低了检验成本。

A protein isoelectric focusing electrophoretic method and its dispensing device

The invention discloses a protein isoelectric focusing electrophoresis method and a glue matching device, which belongs to the field of biological separation and detection technology. The method includes mixing, glue, electrophoresis, gel electrophoresis, and pre fixation, bleaching, dyeing process, the method of the invention by changing sample methods and pre electrophoresis and electrophoretic voltage and time, the protein electrophoresis obtained with clear separation of good, not spread tailing. To solve the problem of the existing technology of electrophoresis time, protein diffusion tailing is greatly improved, the success rate with glue. Mixing the device of the invention comprises a bracket, a fixed frame, with glue with glue, glass gasket and leak proof pad and other components, the present invention through improved structure with glue device, not only makes the consumption of reagents decreased, and glue quickly and without air bubbles, poly glue evenly, and greatly improves the success rate with glue reduce the cost of inspection.

【技术实现步骤摘要】
一种蛋白质等电聚焦电泳方法及其配胶装置
本专利技术涉及生物分离检测
，具体涉及一种蛋白质等电聚焦电泳方法及其配胶装置。
技术介绍
等电聚焦电泳(IEF)是两性电解质在电泳场中(常用聚丙烯酰胺凝胶)形成一个pH梯度，由于蛋白质为两性物质，其所带电荷与介质的pH值有关，带电的蛋白质在电泳中向极性相反的方向迁移，当迁移到达其等电点(PI)的pH处，此时，该蛋白质不再带有净的正或负的电荷，电流达到最小，不再移动，形成一个很窄的区带，从而达到检测蛋白质类和肽类供试品等电点的电泳方法。目前，常规的等电聚焦电泳方法存在以下问题：1、IEF电泳常出现蛋白扩散、拖尾、烧胶等不良现象，需增加检验次数，耗时长，造成人力财力物力浪费；2、现有的IEF配胶装置配胶面积大，灌胶易产生气泡，聚胶不均，胶薄易裂，操作难度大，成功率低，多次配胶造成耗材严重浪费；3、目前IEF的配胶装置胶垫仅为0.3mm，配胶操作难度大，难以一次性成功，导致每次检验至少有50％的胶面积被浪费，加上配胶试剂昂贵，由此造成IEF检验成本居高不下。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种蛋白质等电聚焦电泳方法及其配胶装置，通过该方法得到的蛋白质电泳条带清晰、分离度好、不扩散不拖尾，有效解决了现有技术电泳时间长、蛋白扩散拖尾等问题，大大提高了配胶成功率。为解决上述问题，本专利技术所采用的技术方案如下：一种蛋白质等电聚焦电泳方法，其包括以下步骤：A、配胶、灌胶：将30％丙烯酰胺溶液、两性电解质溶液和纯化水混合后，用超声波脱气5～10min；灌胶前加入10％过硫酸铵和TEMED，混匀后向配胶装置的配胶玻璃灌胶；B、预电泳：凝胶聚合后清除玻璃板上的残胶，将胶贴在薄玻璃片上，胶与玻璃片之间不能有气泡，将贴有凝胶的薄玻璃片放在温度为8～12℃的冷却板上，当凝胶的温度到达8～12℃时，在凝胶左边放上用负极液润湿的电极条，右边放上用正极液润湿的电极条，将电极对准电极条的中心，正极与负极分别与电泳槽的正、负极连接，盖上安全罩，将正、负极与电源连接，进行预电泳，预电泳电压为100V，预电泳时间为10min；C、电泳：预电泳结束后，取下电极板，用微量移液器直接加供试品溶液2～3μl，标准品上样量为2～3μl，加供试品后按预电泳步骤操作，电泳电压为900～1000V，电泳时间为40min；当标准品有色条带移至电极条边时，停止电泳；D、固定：取出凝胶，先将凝胶固定至少20min，然后滴加脱色液脱色20～30min，再滴加染色液染色40～60min，再滴加脱色液脱色直至背景无色后，将凝胶浸泡在保存液中，采用凝胶扫描仪分析等电点，做成干胶永久保存。作为本专利技术优选的实施方式，所述步骤B中的负极液为0.2mol/L氢氧化钠溶液，正极液为0.5mol/L磷酸溶液。作为本专利技术优选的实施方式，所述步骤D中的固定液为三氯醋酸、磺基水杨酸与纯化水的混合溶液，脱色液为乙醇、冰醋酸和纯化水的混合溶液，染色液为考马斯亮蓝G250与脱色液的混合溶液。作为本专利技术优选的实施方式，所述步骤D中的保存液是由甘油和脱色液组成混合溶液。本专利技术还提供了一种蛋白质等电聚焦电泳的配胶装置，其包括固定架、配胶支架、配胶玻璃、防漏垫和两个垫片；所述配胶支架包括连接板、第一固定块和第二固定块，所述第一固定块和第二固定块分别设置在所述连接板的左侧和右侧，所述第一固定块和第二固定块在同一侧上分别设置有用于所述配胶玻璃的卡槽；所述配胶玻璃插接在所述卡槽内，所述配胶玻璃包括第一玻璃片和第二玻璃片，所述第一玻璃片与第二玻璃片相互叠合，两个所述垫片设置在所述第一玻璃片与第二玻璃片之间，使得第一玻璃片与第二玻璃片之间形成用于灌胶的间隙；所述固定架上设置有至少一个与所述配胶支架相匹配的卡位，所述配胶支架卡接于所述卡位上；所述卡位上设置有凹槽，所述防漏垫设置在所述凹槽上。优选地，所述第一玻璃片的长度等于第二玻璃片的长度；所述第一玻璃片的宽度小于所述第二玻璃片的宽度。进一步优选地，所述第一玻璃片的长度为8～12cm、宽度为4.5～7.5cm；所述第二玻璃片的长度为8～12cm、长度为5～8.5cm。优选地，所述垫片的厚度为0.1～0.6mm。优选地，所述垫片由软质材料制成的；所述软质材料选自硅胶、聚氨酯、聚氯乙烯、聚四氯乙烯、聚偏氯乙烯中的一种。优选地，所述固定架包括底座和基座，所述基座固定设置在所述底座的中间位置上，所述基座的左右两侧分别向外延伸有固定片，所述基座的前后两侧上设置有倾斜凸片；所述卡位设置在底座上且位于所述基座的前侧或后侧上。相比现有技术，本专利技术的有益效果在于：本专利技术所述的蛋白质等电聚焦电泳方法通过改变现有技术中样品的上样方式，将采用滤纸的上样方式改为由微量移液器直接点样，同时改变了预电泳与电泳的电压和电泳时间，使得得到的蛋白质电泳条带清晰、分离度好、不扩散不拖尾；有效解决了现有技术电泳时间长、蛋白扩散拖尾等问题，大大提高了配胶成功率。本专利技术的配胶装置结构简单，操作简易，不仅使得试剂消耗量降低，而且灌胶方便、迅速且不产生气泡，聚胶均匀，大大提高了配胶成功率的同时还降低了检验成本。附图说明图1为本专利技术所述的方法的工艺流程图；图2为本专利技术所述的配胶装置的正视图；图3为本专利技术所述的配胶装置的左侧视图；图4为本专利技术所述的配胶装置的俯视图；图5为本专利技术所述的配胶玻璃的结构示意图；图6为本专利技术所述的配胶玻璃的剖面示意图；图7为采用现有技术的配胶装置和检验方法所制得的蛋白质电泳条带图谱；图8为采用本专利技术的配胶装置和检验方法所制得的蛋白质电泳条带图谱；附图标号说明：1、固定架；11、底座；12、基座；13、固定片；14、倾斜凸片；2、配胶支架；21、连接板；22、第一固定块；23、第二固定块；3、配胶玻璃；31、第一玻璃片；32、第二玻璃片；4、防漏垫；5、垫片。具体实施方式下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步详细说明。参照图1，为本专利技术所述的一种蛋白质等电聚焦电泳方法的工艺流程图，该方法包括以下步骤：A、配胶、灌胶：将30％丙烯酰胺溶液、两性电解质溶液和纯化水混合后，用超声波脱气5～10min；灌胶前加入10％过硫酸铵和TEMED(N,N,N’,N’-四甲基乙二胺)，混匀后向配胶装置的配胶玻璃灌胶；B、预电泳：凝胶聚合后清除玻璃板上的残胶，将凝胶贴在薄玻璃片上，凝胶与玻璃片之间不能有气泡，将贴有凝胶的薄玻璃片放在温度为8～12℃的冷却板上，当凝胶的温度到达8～12℃时，在凝胶左边放上用负极液润湿的电极条，右边放上用正极液润湿的电极条，将电极对准电极条的中心，正极与负极分别与电泳槽的正、负极连接，盖上安全罩，将正、负极与电源连接，进行预电泳，预电泳电压为100V，预电泳时间为10min；C、电泳：预电泳结束后，取下电极板，用微量移液器直接加供试品溶液2～3μl，标准品上样量为2～3μl，加供试品后按预电泳步骤操作，电泳电压为900～1000V，电泳时间为40min；当标准品有色条带移至电极条边时，停止电泳；D、固定：取出凝胶，先将凝胶固定至少20min，然后滴加脱色液脱色20～30min，再滴加染色液染色40～60min，再滴加脱色液脱色直至背景无色后，将凝胶浸泡在保存液中，采用凝胶扫描仪分析等电点，做成干胶永久保本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蛋白质等电聚焦电泳方法，其特征在于：包括以下步骤：A、配胶、灌胶：将30％丙烯酰胺溶液、两性电解质溶液和纯化水混合后，用超声波脱气5～10min；灌胶前加入10％过硫酸铵和TEMED，混匀后向配胶装置的配胶玻璃灌胶；B、预电泳：凝胶聚合后清除配胶玻璃上的残胶，将胶贴在薄玻璃片上，胶与玻璃片之间不能有气泡，将贴有凝胶的薄玻璃片放在温度为8～12℃的冷却板上，当凝胶的温度到达8～12℃时，在凝胶左边放上用负极液润湿的电极条，右边放上用正极液润湿的电极条，将电极对准电极条的中心，正极与负极分别与电泳槽的正、负极连接，盖上安全罩，将正、负极与电源连接，进行预电泳，预电泳电压为100V，预电泳时间为10min；C、电泳：预电泳结束后，取下电极板，用微量移液器直接加供试品溶液2～3μl，标准品上样量为2～3μl，加供试品后按预电泳步骤操作，电泳电压为900～1000V，电泳时间为40min；当标准品有色条带移至电极条边时，停止电泳；D、固定：取出凝胶，先将凝胶固定至少20min，然后滴加脱色液脱色20～30min，再滴加染色液染色40～60min，再滴加脱色液脱色直至背景无色后，将凝胶浸泡在保存液中，采用凝胶扫描仪分析等电点，做成干胶永久保存。...

【技术特征摘要】
1.一种蛋白质等电聚焦电泳方法，其特征在于：包括以下步骤：A、配胶、灌胶：将30％丙烯酰胺溶液、两性电解质溶液和纯化水混合后，用超声波脱气5～10min；灌胶前加入10％过硫酸铵和TEMED，混匀后向配胶装置的配胶玻璃灌胶；B、预电泳：凝胶聚合后清除配胶玻璃上的残胶，将胶贴在薄玻璃片上，胶与玻璃片之间不能有气泡，将贴有凝胶的薄玻璃片放在温度为8～12℃的冷却板上，当凝胶的温度到达8～12℃时，在凝胶左边放上用负极液润湿的电极条，右边放上用正极液润湿的电极条，将电极对准电极条的中心，正极与负极分别与电泳槽的正、负极连接，盖上安全罩，将正、负极与电源连接，进行预电泳，预电泳电压为100V，预电泳时间为10min；C、电泳：预电泳结束后，取下电极板，用微量移液器直接加供试品溶液2～3μl，标准品上样量为2～3μl，加供试品后按预电泳步骤操作，电泳电压为900～1000V，电泳时间为40min；当标准品有色条带移至电极条边时，停止电泳；D、固定：取出凝胶，先将凝胶固定至少20min，然后滴加脱色液脱色20～30min，再滴加染色液染色40～60min，再滴加脱色液脱色直至背景无色后，将凝胶浸泡在保存液中，采用凝胶扫描仪分析等电点，做成干胶永久保存。2.根据权利要求1所述的蛋白质等电聚焦电泳方法，其特征在于：所述步骤B中的负极液为0.2mol/L氢氧化钠溶液，正极液为0.5mol/L磷酸溶液。3.根据权利要求1所述的蛋白质等电聚焦电泳方法，其特征在于：所述步骤D中的固定液为三氯醋酸、磺基水杨酸与纯化水的混合溶液，脱色液为乙醇、冰醋酸和纯化水的混合溶液，染色液为考马斯亮蓝G250与脱色液的混合溶液。4.根据权利要求1所述的蛋白质等电聚焦电泳...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾娟梅，孙朗，扈会平，陈清华，徐晓，吴菊莲，孙莉，钟贞，曹珺，
申请(专利权)人：丽珠集团丽珠制药厂，
类型：发明
国别省市：广东,44