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一种4‑羟基‑N,7‑二甲基苯邻二甲酰亚胺及其分离方法技术

技术编号:17587594 阅读:18 留言:0更新日期:2018-03-31 04:08
本方案公开了微生物天然产物化学领域的一种4‑羟基‑N,7‑二甲基苯邻二甲酰亚胺,结构式为:

A 4 N 7 hydroxy two methyl benzene, two adjacent phthalimide and its separation method

This scheme provides a 4 hydroxy N field of microbial natural products chemistry, 7 two o two methyl benzene methyl imide, structural formula:

【技术实现步骤摘要】
一种4-羟基-N,7-二甲基苯邻二甲酰亚胺及其分离方法
本专利技术属于微生物天然产物化学领域,特别涉及一种4-羟基-N,7-二甲基苯邻二甲酰亚胺及其分离方法。
技术介绍
苯邻二甲酰亚胺衍生物对于在抗菌等药物中得到广泛应用,但目前的苯邻二甲酰亚胺衍生物主要采用人工合成;利用链霉菌代谢产物分离出天然苯邻二甲酰亚胺衍生物的方法未见报道。而链霉菌种类繁多,如链霉菌Streptomycessp.QB-11,生长速度快,其许多的活性天然产物被用于临床治疗微生物感染的疾病。同时,通过改变其培养条件等措施,可激活或促进更多结构多样及复杂的新型活性天然产物的产生;再通过人工对这些活性天然产物进行分离鉴定,可广泛应用在医药行业中。另外,对链霉菌代谢产物的开发利用不会导致环境的污染和破坏。因此丰富分离链霉菌代谢产物的方法对于扩大药物来源供给具有重要作用。
技术实现思路
本专利技术意在提供一种4-羟基-N,7-二甲基苯邻二甲酰亚胺的分离方法,以实现从Streptomycessp.QB-11次级代谢产物中分离出天然活性的4-羟基-N,7-二甲基苯邻二甲酰亚胺。一种4-羟基-N,7-二甲基苯邻二甲酰亚胺,结构式如下:链霉菌Streptomycessp.QB-11分离4-羟基-N,7-二甲基苯邻二甲酰亚胺的方法,所述4-羟基-N,7-二甲基苯邻二甲酰亚胺从链霉菌Streptomycessp.QB-11的发酵培养物中分离得到;链霉菌Streptomycessp.QB-11保藏号为:CCTCCNO:M2014237。4-羟基-N,7-二甲基苯邻二甲酰亚胺的分离方法具体包括以下步骤:步骤一、菌株活化:将链霉菌Streptomycessp.QB-11取出活化培养;步骤二:发酵培养基的制作微量元素预混液的制作:将ZnSO4·7H2O2g、FeSO4·7H2O2g、MnCl2·4H2O2g、CuSO4·5H2O2g、Na2B4O4·10H2O2g和(NH4)6MO7·4H2O2g混合,然后用双蒸水定容至1L;发酵培养基制作:将甘露醇2g、燕麦粉1g、大豆粉1g、酵母粉0.4g、氯化钠0.4g、磷酸二氢钾0.1g、硫酸镁0.1g和微量元素预混液0.5mL混合,然后用去离子水定容至1L;步骤三、发酵培养:将活化后的链霉菌Streptomycessp.QB-11置于固体培养基中,在28℃,静置培养15d后,将菌体连同培养基捣碎,加入乙酸乙酯萃取两次,合并两次萃取液;再在40℃减压浓缩萃取液,得到发酵产物,所述固体培养基包括步骤二中的发酵培养基;步骤四、分离:使用溶剂将步骤三的发酵产物溶解,然后加入发酵产物1.5倍重量分数的硅胶粉,溶剂挥发后制得一次上柱样品;再使用氯仿-丙酮洗脱溶剂对一次上柱样品进行梯度洗脱,洗脱后减压回收得到多个组分的第一回收样品,对多个组分的第一回收样品进行TCL检测,选出同时含有254nm和365nm荧光且5~10%硫酸乙醇显色剂不显色,展开剂展开后,Rf值在0.5的组分,回收溶剂得到分离样品;步骤五、纯化:将步骤四的分离样品溶解于其1.5倍重量份数的丙酮溶剂中,溶剂挥发后得到二次上柱样品,使用石油醚-丙酮对二次上柱样品进行梯度洗脱,洗脱后回收得到多个组分的第二回收样品,对多个组分的第二回收样品进行TCL检测,选出同时含有254nm和365nm荧光且5~10%硫酸乙醇显色剂不显色,展开剂展开后,Rf值在0.5的组分,回收溶剂得到白色粉末单体化合物:4-羟基-N,7-二甲基苯邻二甲酰亚胺。本方案的有益效果:1、链霉菌Streptomycessp.QB-11,原料选取容易且对环境没有任何污染,也不会造成资源不可逆破坏。2、4-羟基-N,7-二甲基苯邻二甲酰亚胺的获得,可以为后续活性的研究提供物质基础,也为其他有生物活性化合物的合成提供先导物。进一步,步骤三中,固体培养基是将2.7g的琼脂粉与150ml的发酵培养基混合,经115~125℃的温度灭菌25~35min制得。通过琼脂粉制备固体培养基,并高温杀菌,有利于链霉菌Streptomycessp.QB-11的生长。进一步,步骤四中,溶解发酵产物的溶剂为氯仿-丙酮=1:1的溶剂。采用氯仿-丙酮=1:1的溶剂溶解发酵产物,溶解更充分。进一步,步骤四中,使用氯仿-丙酮洗脱溶剂对一次上柱样品进行梯度洗脱前,先将100~200目硅胶粉600g与氯仿-丙酮=15:1混合均匀装入分离柱中,让硅胶粉缓缓下沉直至不再下沉时加入一次上柱样品,然后再使用氯仿-丙酮洗脱溶剂对一次上柱样品进行梯度洗脱;将硅胶粉和氯仿-丙酮装入分离柱的过程中,不能产生气泡。通过此步骤,有利于对一次上柱样品进行更高效的梯度洗脱。进一步,步骤五中,使用石油醚-丙酮洗脱溶剂对二次上柱样品进行梯度洗脱前,将100~200目硅胶粉30g与石油醚:丙酮=4:1混合均匀装入分离柱中,让硅胶粉缓缓下沉直至不再下沉时加入二次上柱样品;然后再使用石油醚-丙酮洗脱溶剂对二次上柱样品进行梯度洗脱;将硅胶粉与石油醚-丙酮装入分离柱的过程中,不能产生气泡。通过此步骤,有利于对一次上柱样品进行更高效的梯度洗脱。附图说明图1为本专利技术一种4-羟基-N,7-二甲基苯邻二甲酰亚胺的分离纯化流程图;图2为本专利技术中4-羟基-N,7-二甲基苯邻二甲酰亚胺的红外光谱图;图3为本专利技术中4-羟基-N,7-二甲基苯邻二甲酰亚胺在Acetone-d6中的1H-NMR谱图;图4为本专利技术中4-羟基-N,7-二甲基苯邻二甲酰亚胺在Acetone-d6中的13C-NMR谱图;图5为本专利技术中4-羟基-N,7-二甲基苯邻二甲酰亚胺在Acetone-d6中的HSQC谱图;图6为本专利技术中4-羟基-N,7-二甲基苯邻二甲酰亚胺在Acetone-d6中的HMBC谱图;图7为本专利技术中4-羟基-N,7-二甲基苯邻二甲酰亚胺在Acetone-d6中的ROESY谱图。具体实施方式下面通过具体实施方式对本专利技术作进一步详细的说明:一、4-羟基-N,7-二甲基苯邻二甲酰亚胺的分离纯化流程基本如图1所示,具体包括以下步骤:步骤一、链霉菌Streptomycessp.QB-11菌株活化从-80℃冰箱中取出甘油斜面保存的菌种,以无菌接种环挖取1环链霉菌Streptomycessp.QB-11的孢子,十字划线接种于直径11cm的基础培养基平板,28℃静置培养3d,挑取单菌落传代至第三代放大培养。步骤二、发酵培养基的制作微量元素预混液的制作:将ZnSO4·7H2O2g、FeSO4·7H2O2g、MnCl2·4H2O2g、CuSO4·5H2O2g、Na2B4O4·10H2O2g和(NH4)6MO7·4H2O2g混合,然后用双蒸水定容至1L;发酵培养基制作:将甘露醇2g、燕麦粉1g、大豆粉1g、酵母粉0.4g、氯化钠0.4g、磷酸二氢钾0.1g、硫酸镁0.1g和微量元素预混液0.5mL混合,然后用去离子水定容至1L。步骤三、链霉菌Streptomycessp.QB-11的发酵培养链霉菌Streptomycessp.QB-11选用改良GYD固体培养基,称取2.7g琼脂粉加入规格为500mL三角烧瓶中,在有琼脂粉的三角烧瓶中装150mL发酵培养基,121℃高温灭菌30min,每瓶接种量为步骤一培养基平板上面积1×1cm2的活化本文档来自技高网...
一种<a href="http://www.xjishu.com/zhuanli/27/201710894059.html" title="一种4‑羟基‑N,7‑二甲基苯邻二甲酰亚胺及其分离方法原文来自X技术">4‑羟基‑N,7‑二甲基苯邻二甲酰亚胺及其分离方法</a>

【技术保护点】
一种4‑羟基‑N,7‑二甲基苯邻二甲酰亚胺,其特征在于,结构式为:

【技术特征摘要】
1.一种4-羟基-N,7-二甲基苯邻二甲酰亚胺,其特征在于,结构式为:2.根据权利要求1所述的4-羟基-N,7-二甲基苯邻二甲酰亚胺的分离方法,其特征在于:所述4-羟基-N,7-二甲基苯邻二甲酰亚胺从链霉菌Streptomycessp.QB-11的发酵培养物中分离得到;链霉菌Streptomycessp.QB-11保藏号为:CCTCCNO:M2014237。3.根据权利要求2所述的4-羟基-N,7-二甲基苯邻二甲酰亚胺的分离方法,其特征在于:包括以下步骤:步骤一、菌株活化:将链霉菌Streptomycessp.QB-11取出活化培养;步骤二:发酵培养基的制作:微量元素预混液的制作:将ZnSO4·7H2O2g、FeSO4·7H2O2g、MnCl2·4H2O2g、CuSO4·5H2O2g、Na2B4O4·10H2O2g和(NH4)6MO7·4H2O2g混合,然后用双蒸水定容至1L;发酵培养基制作:将甘露醇2g、燕麦粉1g、大豆粉1g、酵母粉0.4g、氯化钠0.4g、磷酸二氢钾0.1g、硫酸镁0.1g和微量元素预混液0.5mL混合,然后用去离子水定容至1L;步骤三、发酵培养:将活化后的链霉菌Streptomycessp.QB-11置于固体培养基中,在28℃,静置培养15d后,将菌体连同培养基捣碎,加入乙酸乙酯萃取两次,合并两次萃取液;再在40℃减压浓缩萃取液,得到发酵产物,所述固体培养基包括步骤二中的发酵培养基;步骤四、分离:使用溶剂将步骤三的发酵产物溶解,然后加入发酵产物1.5倍重量分数的硅胶粉,溶剂挥发后制得一次上柱样品;再使用氯仿-丙酮洗脱溶剂对一次上柱样品进行梯度洗脱,洗脱后减压回收得到多个组分的第一回收样品,对多个组分的第一回收样品进行TCL检测,选出同时含有254nm和365nm荧光且5~10%硫酸乙醇显色剂不显色,展开剂展开后,R...

【专利技术属性】
技术研发人员:钱声艳宋长伟张权王苗王倩刘建国
申请(专利权)人:遵义医学院
类型:发明
国别省市:贵州,52

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