一种多肽－人乙酰半乳糖苷转移酶45和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种多肽—人乙酰半乳糖苷转移酶４５，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人乙酰半乳糖苷转移酶４５的多核苷酸的用途。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种多肽——人乙酰半乳糖苷转移酶45，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。
技术介绍
糖是一种重要的生物化合物。糖类是细胞结构的一种组成成分，调节粘稠度，储存能量，也是细胞表面的组成成分。几乎所有的位点专一性的细胞内反应都涉及细胞表面糖类。例如，精卵结合时精子和卵子都需要细胞表面的糖类介导。有些糖蛋白是与肿瘤相关的抗体，现在已经被用来检测许多种肿瘤的存在。甚至游离的寡糖也能起到生物学作用。寡糖对与之结合的蛋白或脂类也会产生影响。对蛋白来说，寡糖与之结合会影响其稳定性、蛋白水解速率、从血液中清除的速率、热稳定性和溶解度。细胞表面糖类的寡糖部分的改变可能会引起癌变。在细胞分化时也发现某些种类的寡糖的改变。糖蛋白常有O-连接的寡糖，这是寡糖共价连接到蛋白质的丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸残基侧链上的OH基团。涉及O连接的寡糖糖基化作用全部或主要的发生在高尔基体内，N-乙酰半乳糖胺从UDP-N-乙酰半乳糖胺转移到丝氨酸或苏氨酸上。催化此反应的酶是N-乙酰半乳糖胺转移酶家族。现在已经克隆并鉴定了四种人N-乙酰半乳糖胺转移酶，分别是GalNAc-T1/T2/T3/T4。它们催化不同的受体底物，但这些受体底物的结构是有联系的。相应的，这两种已知的糖胺转移酶的基因也有一段61个氨基酸序列的相似性为82％。现在，关于蛋白O-连接糖基化反应的了解都来自于上述的两种转移酶。但是已经发现并非所有的O-连接糖基化反应都由这两种转移酶所催化。例如，一种从HIV.sub.IIIB gp120(GRAFVTIGKIG<210>4)中提取的多肽是多种器官中提取出来的GalNAc-转移酶的有效的受体底物。但是纯化的GalNAc-T1/T2/T3/T4并不能催化这种多肽糖基化。这就提示了有另外的糖基转移酶的存在。寻找新的糖基转移酶可以对更深入的了解糖基化作用提供新的线索。新的糖基转移酶还可以用来治疗由于体内糖蛋白合成失常而导致的各种免疫疾病，内分泌系统分泌失常等；新的糖基转移酶可以用于人工合成糖基化的多肽，这些多肽可以应用于药用制品或其他商业应用中。本专利技术与猪N-乙酰半乳糖苷转移酶基因在蛋白水平上有40％的同源性，并且具有此类基因保守的几个氨基酸位点。基于以上各点，故认为本专利技术的新基因为编码人与猪N-乙酰半乳糖苷转移酶相似的基因，命名为人乙酰半乳糖苷转移酶45，并以此推断其蛋白与猪N-乙酰半乳糖苷转移酶相似，具有相似的生物学功能。由于如上所述人乙酰半乳糖苷转移酶45蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人乙酰半乳糖苷转移酶45蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人乙酰半乳糖苷转移酶45蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人乙酰半乳糖苷转移酶45以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人乙酰半乳糖苷转移酶45的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人乙酰半乳糖苷转移酶45的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人乙酰半乳糖苷转移酶45的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人乙酰半乳糖苷转移酶45的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人乙酰半乳糖苷转移酶45的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人乙酰半乳糖苷转移酶45异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有<210>2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有<210>2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有<210>2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有<210>1中51-1274位的序列；和(b)具有<210>1中1-2466位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人乙酰半乳糖苷转移酶45蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人乙酰半乳糖苷转移酶45蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人乙酰半乳糖苷转移酶45表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的结构、调控或生物化学功能的蛋白质。类似地，术语“免疫学活性”是指天然的、重组的或合成蛋白质及其片段在合适的动物或细胞中诱导特定免疫反应以及与特异性抗体结合的能力。“激动剂”是指当与人乙酰半乳糖苷转移本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人乙酰半乳糖苷转移酶４５，其特征在于它包含有：〈２１０〉２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]