检查龋齿危险性的方法技术

一种检测龋齿危险性的方法，其特征在于鉴定Ⅱ型ＨＬＡ基因组中ＤＲＢⅠ＊的基因型。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

技术介绍
专利
本专利技术涉及通过利用人基因诊断。因为如果在人唾液中存在大量致龋变链球菌，那么未来将进一步产生新的龋齿，所以为了容易地检测唾液中致龋变链球菌含量，已经进行了很多尝试。例如，在公开号为No.02177898的日本专利和公开号为No.10036400的日本专利中就提出了方法，其中致龋变链球菌的量根据和变形链球菌特异性反应的单克隆抗体来确定，以及美国专利No.5374538公开的方法，其中自身生长在简化培养试剂盒的细菌细胞量根据目测观察进行确定。但是，为了通过检测唾液中存在的致龋变链球菌的含量来检查龋齿危险性，存在的问题就是在判断具有高龋齿危险性时，很多情况下致龋变链球菌实际上应该存在于口腔中，而且龋齿已经发生。另一方面，已知致龋变链球菌含量的增加过程在不同个体之间是不同的，而且如果上述增加过程的区别能够事先检测到，那么不论致龋变链球菌的实际增加或者含量，就可得知龋齿危险性。因此，作为能够在被上述致龋变链球菌感染之前测定致龋变链球菌含量的检测龋齿危险性的方法，注意力已经被吸引到这样一个过程，其中为了判断一个人是否被特定感染所感染而检测存在于人体内的特定感染源产生的抗体。在一种致龋变链球菌S.Mutans的细菌细胞表层物质中，鉴定到一种称作PAc(蛋白抗原血清型C)、分子量为大约190000的蛋白抗原，其和致龋变链球菌和牙齿表面的最初吸附相关，该研究利用单克隆抗体，其中所述蛋白抗原用作抗原。此外，一项为了明确PAc中特定部分的研究已经取得进展，所述Pac特定部分仅仅相关于致龋变链球菌和牙齿表面的最初吸附，而且已经鉴定到在PAc中具有α螺旋结构的A区(部分氨基酸序列216-464)显著影响S.mutans在牙齿表面的移殖和吸附，Takahashi I等人，“链球菌表面蛋白抗原合成肽对S.mutans口腔移殖的免疫原性和保护效果”，J.Immunol，(USA)，1991，146，第332-6页，Takahashi I.Infect Immun(USA)，Baltimore Md.美国免疫学家协会，1992，60，第623-629页或者Okahashi N等人，Mol.Microbiol.(USA)，Blackwell Scientific Publications，1993，3，第221-228页。另外，作为本专利技术专利技术者之一的Senpuku解决了在PAc的A区什么是最重要的序列的问题(参考非专利文献1，Senpuku H等人，“诱导交叉反应抗体的抗源肽抑制S.Mutans PAc和人唾液组分的相互作用”Infect Immun(USA)，Baltimore Md.美国免疫学家协会，1995，63，第4695-4703页)。下文，鉴定到显著作用人免疫系统、作为PAc的A区域抗原的序列为人B-细胞表位的Y---L--Y，以及和多种人HLA-DR分子反应的部分和L--V-K--A。从这个结果，推测出PAc中的特异性氨基酸序列，即。详细的氨基酸序列显示在下式中。Asn Ala Lys Ala Thr Tyr Glu Ala Ala Leu Lys Gln Tyr Glu Ala AspLeu Ala Ala Val Lys Lys Ala Asn Ala Ala结果，本专利技术的专利技术者研究发现龋齿危险性的检查可以通过利用PAc(361-386)，并测定由人口腔粘膜分泌的分泌型免疫球蛋白抗体A(sIgA)的抗体滴度来准确地进行，所述PAc(361-386)是作为抗原的氨基酸序列，所述sIgA用来抑制致龋变链球菌和牙齿表面的附着。但是，为了测定抗唾液中所分泌PAc(361-386)的分泌型免疫球蛋白抗体A的抗体滴度，不能检查没有完整免疫功能小于约6岁的儿童，而且因为唾液分泌量个体之间不同，所以不能准确反应具有大量唾液和具有少量唾液人之间测定的分泌型免疫球蛋白抗体A抗体滴度。另外，也存在上述测定方法不能实施给感染有干燥症的患者和唾液分泌能力低的老年人的问题，干燥症患者具有明显少的唾液分泌量。因此，本专利技术的目的就是提供，所述方法能够制备所有人的样品，而不管年龄和唾液分泌量。专利技术概述为了解决上述问题，本专利技术的专利技术者进行了深入详细的研究，结果，他们将注意力集中到了主要组织相容性复合体(下文，有时只称作MHC)用于检查龋齿危险性，不用考虑年龄和唾液量。虽然，MHC存在于所有高等脊椎动物的细胞中，但是因为MHC首先是在人白细胞中被证实的，因此MHC被称作人组织相容性白细胞抗原或者人白细胞抗原(下文，称作HLA)。已知，HLA基因组在免疫系统中有很重要的作用并作为抗原识别非自身组分。因为分泌抗所述PAc(361-386)抗体的机理自然相关于免疫系统基因，因此分泌在唾液中的分泌型免疫球蛋白抗体A的抗体滴度的区别通过用和人分泌型免疫球蛋白抗体A分泌相关的特异性基因型进行确定。因此，本专利技术者发现通过个体基因型的分类有可能检查龋齿危险性，而且如果一个人的基因型预先被确定成高或者低龋齿危险性，也就是分泌在唾液中的高或者低的分泌型免疫球蛋白抗体A的抗体滴度，仅仅通过鉴定基因就有可能进行针对所有人。本专利技术为，特征在于鉴定II型HLA基因组DR座位的DRB1*基因型。尤其是，本专利技术为，特征在于鉴定II型HLA基因组中的DRB1*基因型，其中鉴定的基因型和龋齿危险性相比较，所述龋齿危险性事先进行鉴定，源于在人唾液中针对抗原的分泌型免疫球蛋白A的抗体滴度，其中具有下式氨基酸序列的合成蛋白用作抗原。Asn Ala Lys Ala Thr Tyr Glu Ala Ala Leu Lys Gln Tyr Glu Ala AspLeu Ala Ala Val Lys Lys Ala Asn Ala Ala在HLA基因组中，有I型和II型，这些分子的整体结构非常相似。在上述两种类型中，呈递在T细胞上的抗原和氨基酸的末端结构域相结合，所述末端结构域具有膜穿透型异源二聚体，并来自细胞。II型存在于有限的细胞中，诸如B细胞或者抗原呈递细胞，并且具有通过T细胞促进B细胞产生抗体的机制。在本专利技术中，HLA基因组的II型基因被优选采用。作为II型HLA，多种HLA-DR，DQ，DP等等已经众所周知，而且进一步，所述HLA由4个结构域α1，α2，β1和β2组成。HLA由在第六条染色体单臂上的HLA基因分型，并具有高度多态性。尤其是，已知II型DR基因的β链(DRB1，DRB3，DRB4，DRB5)在多态性中更突出，并且近来已知这些多态性基因和多种疾病相关。根据本专利技术，首先，收集受试者的细胞，然后提取上述细胞的DNA将位于第六条染色体单臂上的HLA基因组分型。通过将分型的HLA基因组和另一种HLA基因组进行比较评价龋齿的危险性，后者通过研究已事先知晓，在唾液中分泌针对PAc(361-386)的分泌型免疫球蛋白抗体A具有高(或低)的抗体滴度。因为HLA基因组存在于人的所有细胞中，人体任何部位的细胞都可作为样品。在所述细胞中，为了在牙科诊室简单检查龋齿的危险性，最容易收集的人口腔粘膜细胞被优选采用。作为收集口腔粘膜细胞的方法，可以通过用药勺刮取口腔粘膜收集细胞。作为从收集细胞提取DNA的方法，可以利用从动物细胞提取DNA的通用方法。例如，优选酚氯仿法，而且也可采本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：泉福英信，鳟沢谕美子，
申请(专利权)人：株式会社GC，
类型：发明
国别省市：