人类STR基因型检测试剂盒制造技术

一种人类ＳＴＲ基因型检测试剂盒，其特征在于该试剂盒主要由ＤＮＡ提取液、ＨＳ－Ｔａｑ、上样缓冲液、反应混合物、引物混合物、Ｌａｄｄｅｒ、对照模板组成。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种生物技术产品，特别是涉及一种人类STR基因型检测试剂盒。
技术介绍
人类基因组DNA有3×109bp，其中10％是串联重复序列，称为卫星DNA。按重复单位的长短，又可分为大卫星、中卫星、小卫星和微卫星。其中重复单位仅由2-7mer组成的叫微卫星，又称它为短串联重复序列(Short Tandem Repeat.STR)。不同人体基因组卫星DNA重复单位的数目是可变的，因此，形成了极其复杂的等位基因片段长度多态性。根据这一规律，近年来建立了一种崭新的STR基因分型技术，该技术可将不同个体进行鉴别，并可进行个体间的遗传学分析，从而给法医学、考古学、遗传学以及肿瘤学等领域的发展带耒了新的变革。到目前为止，只有美国的PE和Promega两家公司先后推出了一种STR基因型检测试剂盒，但该类STR基因型检测试剂盒重点是针对白种人群的STR位点设计的，其对黄种人的STR基因型检测的适用性比较差。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种快速、准确并且更适合黄种人的人类STR基因型检测试剂盒。本专利技术为解决上述问题的技术方案是该试剂盒主要由DNA提取液、HS-Taq、上样缓冲液、反应混合物、引物混合物、Ladder、对照模板组成。所述的DNA提取液、HS-Taq、上样缓冲液、反应混合物、引物混合物、Ladder组分为DNA提取液1.20ml×2支HS-Taq 200μl×1支11×上样缓冲液 900μl×1支5×反应混合物1.64ml×1支10×引物混合物A组D3S1358+TH01+D13S317 210μl×1支B组.TPOX+vWA+D7S820210μl×1支C组.XY+D8S1179+FGA 210μl×1支D组.D5S818+CSF1PO+D16S539 210μl×1支E组.D6S1043+D2S1772+D7S3048210μl×1支LadderA组.D3S1358+TH01+D13S317 110μl×1支 B组.TPOX+vWA+D7S820110μl×1支C组.XY+D8S1179+FGA 110μl×1支D组.D5S818+CSF1PO+D1 6S539 110μl×1支E组.D6S1043+D2S1772+D7S3048110μl×1支所述的试剂盒还包括内标，所述的DNA提取液、HS-Taq、上样缓冲液、反应混合物、引物混合物、Ladder组分为DNA提取液1.20ml×2支HS-Taq 50μl×1支11×上样缓冲液 220μl×1支5×反应混合物410μl×1支10×引物混合物 210μl×1支LadderA组.标记的荧光素为TAMRAD3S1358+TH01+D13S317+D16S539+D6S1043 110μl×1支B组.标记的荧光素为HEXTP0X+vWA+D7S820+D5S818+D2S1772 110μl×1支C组.标记的荧光素为FAMXY+D8S1179+CSF1PO+FGA+D7S3048 110μl×1支内标由100～400bp组成，每两个片段之间相差20bp，标记的荧光素为ROX 110μl×1支本专利技术对人类STR基因型的检测，特别是对黄种人的人类STR基因型的检测具有以下积极效果(1)所选用的STR位点大部分可在国际罪犯基因库中通用，同时增加三个更适合中国人群的位点(D6S1043，D2S1772，D7S3048)，从而更具有适用性；(2)DNA提取方法，简单、快速、价格便宜，而且对人体和环境无污染；(3)检测中国汉族的结果为PM＜10-18；RCP＞99.9999％。超过了国内外规定的标准(国际标准为PM＜10-11；RCP＞99.73％)。具体实施例方式实施例一在本实施例中，本专利技术是采用银染技术检测人类STR基因型的。本试剂盒主要由DNA提取液、HS-Taq、上样缓冲液、反应混合物、引物混合物、Ladder、对照模板组成，其组分为DNA提取液1.20ml×2支HS-Taq 200μl×1支11×上样缓冲液 900μl×1支5×反应混合物1.64ml×1支10×引物混合物A组.D3S1358+TH01+D13S317 210μl×1支 B组.TPOX+vWA+D7S820 210μl×1支C组.XY+D8S1179+FGA 210μl×1支D组.D5S818+CSF1PO+D16S539210μl×1支E组.D6S1043+D2S1772+D7S3048 210μl×1支LadderA组.D3S1358+TH01+D13S317 110μl×1支B组.TPOX+vWA+D7S820 110μl×1支C组.XY+D8S1179+FGA 110μl×1支D组.D5S818+CSF1PO+D16S539110μl×1支E组.D6S1043+D2S1772+D7S3048 110μl×1支HS-Taq的制备本专利中使用的DNA聚合酶(HS-Taq)是热启动酶，该酶是在制备普通Taq酶的基础上，用抗酶抗体将酶的活性基团封闭起来，使其在常规或稍高温度下不具有酶的活性，只有经过90多度的高温处理，抗体蛋白质变性后，酶的活性才得以恢复。11X上样缓冲液的配制55％溴酚兰、55％二甲苯兰、10mM NaOH、95％甲酰腰胺。5×反应混合物的配制反应混合物中各组份之间的塔配和PH值将直接影晌到扩增产物量的高低以及非特异扩增带的多少。特别是在复合扩增体系中，镁离子浓度最为最要。其调整程序如下1、调整复合体系中各引物对之间的最佳浓度。2、将调整好的引物混合物和镁离子浓度(一般设在1～5mM之间)进行棋盘滴定。3、根据滴定结果，在无非特异带出现的前提下，选择扩增产量最高的镁离子浓度和引物浓度为最后选定的浓度。各引物之间浓度的塔配为了确保在同一扩增体系中各位点的扩增产物量大致相等，而且无非特异带被扩增，所以各引物之间浓度的塔配至关重要。各引物间浓度的塔配程序如下1、先用超纯水或TE将合成的引物溶解成100～200PM。2、成对的引物等体积混合后，分别稀释成0.2；0.1；0.05；0.025PM/100μl反应体积，在相同体系中进行扩增。3、选择无非特异带、而且特异带较清楚的引物浓度为初筛浓度。4、在同一复合扩增体系中，用各位点引物的初筛浓度进行复合扩增。5、根据各位点之间扩增的产物量，以及非特异带出现的情况，在对相应位点的引物浓度进行增减。6、一直调到每组中所有位点的扩增产物量基本相等，而且无明显非特异带，方为合格。制备对照模板用基因克隆技术将某一个人在本专利技术中十五个位点的所有等位基因片段克隆出来，然后将各等位基因片段的重组质粒等量合并后分装，作为对照模板。循环参数的筛选1、本扩增体系中所用的DNA聚合酶为热启动酶(HS-Taq)，因此必须经过较高温度和较长时间之后，才能恢复酶的活性，所以本专利中选定的预变性条件为96℃，5分钟。这也是人类巨大而复杂的染色体彻底变性所需要的条件。2、根据本专利中所选择的各引物的TM值，确定60℃为退火温度。3、根据上述原则和常规程序，设定本专利的循环参数为96℃预变性5分钟，然后95℃变性44秒；60℃退火40秒；72℃延伸1分钟，循环5次。紧接着92℃变性30秒；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张兹钧，
申请(专利权)人：张兹钧，
类型：发明
国别省市：