应用胎儿脐血阻断血友病A致病基因传递的方法技术

一种应用胎儿脐血阻断血友病Ａ致病基因传递的方法，由以下步骤组成：　　　　（１）样品制备：选择有血友病Ａ（ＨＡ）家族史的女性于妊娠２０周后，在超声引导下经皮抽取胎儿脐带静脉血０．９ｍｌ或１．８ｍｌ，立即与０．１ｍｌ或０．２ｍｌ３．８％枸橼酸钠抗凝剂混匀，同时以相同方法和用量抽取携带者及其丈夫和正常人外周静脉血作对照；　　　　（２）离心：将上述样品于４℃条件下，以２４００～２５００转／分钟离心２０～２５分钟，取上层１／３～２／３血浆进行凝血因子Ⅷ活性（ＦⅧ∶Ｃ）和血管性血友病因子（ｖＷＦ）血清学的生化测定；取白细胞层提取ＤＮＡ进行ＰＣＲ联合基因诊断；　　　　（３）筛选分型：依据上述测定的血浆凝血因子Ⅷ活性和血管性血友病因子浓度，确诊血友病Ａ患者及其携带者，并根据血浆ＦⅧ∶Ｃ浓度将血友病Ａ患者分为重型ＨＡ，其ＦⅧ∶Ｃ＜１％；中型ＨＡ，其ＦⅧ∶Ｃ１％～５％；轻型ＨＡ，其ＦⅧ∶Ｃ５％～２５％、亚临床型ＨＡ，其ＦⅧ∶Ｃ２５％～４５％；　　　　（４）直接基因诊断：应用长距离ＰＣＲ（ＬＤ－ＰＣＲ）技术对上述样品提取的ＤＮＡ进行产前基因诊断，根据电泳条带的大小和分子量的大小综合判定患者是否存在ＦⅧ基因内含子２２倒位；若只出现１２Ｋｂ带，判为野生型即非倒位；若只出现１１Ｋｂ带，判为倒位患者；若出现１２Ｋｂ和１１Ｋｂ两条带，判为倒位的携带者；　　　　（５）阻断ＨＡ致病基因传递：对于上述判为倒位的患者或判为倒位的携带者，应终止妊娠，切断ＨＡ致病基因的传递；　　　　（６）间接基因诊断：对上述非倒位的重型ＨＡ、中型ＨＡ和轻型ＨＡ家系，依次采用Ｂｃｌ－Ｉ　　ＰＣＲ／ＲＦＬＰ分析技术、基因内含子１３（ＣＡ）ｎ及内含子２２（ＧＴ）ｎ（ＡＧ）ｎ二核苷酸重复序列多态性分析技术及与ＦⅧ基因紧密连锁的可变串联重复序列多态性分析技术（Ｓｔ１４／ＶＮＴＲ）进行间接基因诊断；　　　　（７）阻断ＨＡ致病基因传递：步骤（６）依次进行的各步基因诊断中，当样品判为ＨＡ患者或携带者时，终止妊娠，切断ＨＡ致病基因的传递；未作的诊断步骤停止。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种临床血液学和围产医学的技术方法，具体涉及一种应用胎儿脐血阻断血友病A致病基因传递的方法。
技术介绍
血友病A(HA)是一种常见的X连锁隐性遗传性出血性疾病，女性为携带者，男性发病。HA患者的特征为自发性或轻微外伤后出血不止，患者终生需要输注凝血因子VIII制品治疗和预防出血，给家庭和社会带来沉重的负担。若得不到及时诊断和治疗，患者可发生残疾，极大地影响其生活质量，严重的出血可引起患者死亡。虽然目前HA不能根治，但该病是一种遗传性疾病，医学上可以通过遗传学咨询和产前诊断方法，起到预防作用，避免新的HA患者出现，从而达到从源头上控制HA的目的。我国是人口大国，约13亿人口，HA的发病率约为3-5人/10万人口，为此开展HA的基因诊断、携带者检测和产前诊断，阻断致病基因的传递，对提高人口素质和全民族健康水平具有重要的现实意义。致病基因的携带者检测与产前诊断无疑是减少发病及提高人口素质的一个有效手段，携带者及产前诊断的目的是区别携带者及正常女性，使后者可以正常婚育；对携带者的胎儿进行基因检测，主动阻断血友病A致病基因传递，避免新的HA患儿出生。九十年代初有学者应用Sout本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：丁培芳，王勤友，孙汶生，申法奎，王谢桐，张雪芹，滕彬，
申请(专利权)人：山东省血液中心，
类型：发明
国别省市：