II型糖尿病蛋白质制造技术

本发明专利技术涉及天然存在的化合物及其衍生物作为糖尿病相关疾病易感性的标记物的应用。本发明专利技术也涉及用于糖尿病相关疾病治疗的一种药物组合物。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于诊断和预测糖尿病相关疾病易感性的方法以及用于治疗这些疾病的药物组合物。
技术介绍
临床上糖尿病分为胰岛素依赖型和胰岛素非依赖型糖尿病。这两类疾病具有许多不同的特征。1型糖尿患者有很严重的胰岛素缺陷，以至于不能维持很低水平的胰岛素以正常防止脂肪分解和细胞生成。因此1型糖尿患者一般显示出高水平的葡萄糖和低水平的胰岛素。随着该疾病的发展，胰岛受损或被破坏，而胰岛素生成越来越少。2型糖尿病是一种常见并复杂的病症，其源于胰岛素分泌缺陷以及在周围组织，例如骨骼肌肉(1)中胰岛素敏感性受损(胰岛素抗性)的联合作用。2型糖尿病表现为在空腹和饱食后的高血糖症，不同程度的高血胰岛素症和肥胖症。尽管在过去的十年中对胰岛素信号传导通路上的蛋白质进行了彻底的研究，但是原代细胞的原因仍然不明。最近的研究报告显示2型糖尿患者肌肉具有降低的氧化酶活性(2)，线粒体DNA的突变通过损伤氧化磷酸化导致2型糖尿病(3，4)，加剧了该疾病在分子水平上的复杂性。现行的治疗方法包括食物控制、服用磺酰脲以提高胰岛素分泌、服用胰岛素本身以及服用缩二胍以降低胰岛素抗性。由于缩二胍有毒、而磺酰脲对那些胰岛功能严重受损的患者没有效果，而且治疗十年后50％的患者产生抗性，因此，有必要研制一种新型的抗糖尿病药物。为了确定糖尿病的易感性，已经采用许多策略。在专利WO 00/66762中(在此引为参考文献)，其中糖尿病可能涉及线粒体ATP合酶基因8/6序列中的特异性突变。另外，专利WO 00/66782和WO 98/17862描述了一种通过在ATP合酶基因序列中寻找突变来诊断糖尿病的方法。尽管已有人提出了几种策略来确定糖尿病的易感性，但是没有一种被证明是成功的。本专利技术旨在提供一种方法来确定糖尿病的易感性。专利技术概述本专利技术专利技术了一种通过测量样品中蛋白质的水平来诊断和确定至少一种与糖尿病相关的疾病的方法。本专利技术基于这样的意外的实验事实在2型糖尿病中有15种蛋白质被上调或下调。这些蛋白质中(作为2型糖尿病的标记)有11种已被质谱鉴定。在这11种蛋白质的表达中所观察到的变化与在胰岛素抗性个体中出现的细胞压力和骨骼肌线粒体的代谢中干扰的增长是一致的(2)。被鉴定的大部分蛋白质是磷蛋白或涉及细胞中磷酸代谢的蛋白质。最有趣的是，本专利技术人表明ATP合酶的β亚基是磷酸化的，并且发现β亚基的磷酸化同工型的表达量减少并同空腹糖尿患者肌肉血浆中的葡萄糖水平负相关。这些数据表明ATP合酶的β亚基的磷酸化在调节ATP的合成中起作用，该蛋白质以及细胞压力蛋白质的调节的变化可能有助于2型糖尿病的发病。关于治疗糖尿病的方法，单个蛋白质或一组蛋白质均可作为治疗的靶点。根据本专利技术可以改变作为靶点的蛋白质表达水平(如上升或下降)或干涉这些蛋白质本身而防止或延迟人的糖尿病相关疾病的发作。这可通过施用如，蛋白质标记物、编码标记蛋白质的核酸序列(或互补序列或其部分)、标记蛋白质的抗体、能与蛋白质标记物结合的核酸片段，和/或能与标记蛋白质结合的化合物而得以实现。影响标记物转录或影响标记物的转录后修饰的化合物，尤其是影响标记物活性(磷酸化状态)的化合物应该也是明显的药物备选物。本专利技术的详细公开本专利技术涉及基本纯的多肽，其包含至少一种选自下列的氨基酸序列(a)ATP合酶β亚基或磷酸化的ATP合酶β亚基的同工型；(b)磷酸葡萄糖变位酶1；(c)热休克蛋白90β；(d)肌酸激酶β亚基；(e)肌球蛋白调节轻链2；(f)胶原蛋白α1(VI)链；(g)78KDa葡萄糖调节蛋白；(h)由表3所公布的特性定义的标记蛋白质(匹配号199，303，391，或511)；(i)与(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)或(h)中的任何一种多肽或其部分有优选至少70％同源性(如至少80％、至少90％、至少95％)的类似物；和(j)(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)或(i)中的氨基酸序列的衍生物、前体、类似物或修饰物。ATP合酶β亚基是核编码蛋白质，该亚基位于ATP合酶的催化部分(在F1部分内)，与ATP合酶的6/8亚基相反，后者为线粒体编码蛋白质，位于ATP合酶无催化活性的跨膜部分(在F0部分内)。这些多肽(包括它们的磷酸化同工型)可用作药物治疗如至少一种糖尿病相关疾病，优选2型糖尿病。本专利技术还涉及用于治疗至少一种糖尿病相关疾病(优选为2型糖尿病)的药物组合物，其含有至少一种根据本专利技术的多肽或其模拟物(mimetic)或抗模拟物(antimimetic)。根据本专利技术，其它的药物组合物含有(a)至少一种物质，其能够调节编码至少部分根据本专利技术的多肽的核酸片段的表达；和/或(b)至少一种所述多肽；和/或(c)所述多肽或其修饰产物的至少一种抗体；和/或(d)至少一种核酸序列，能杂交编码所述多肽的核苷酸序列(包括其调节元件)或其互补链；和/或(e)至少一种化合物，如，核酸片段，能与所述多肽结合的；和/或(f)至少一种化合物，能修饰与该疾病相关的蛋白质的形式而使得其相对表达、活性和/或浓度向健康人的方向改变；和/或(g)至少一种能够标记至少一种所述蛋白质的化合物，这些蛋白质在该疾病中对于更快的更新或降解表达量相对太高；和/或(h)至少一种能够标记至少一种所述蛋白质的化合物，这些蛋白质在该疾病中相对表达量太低使得它们更新或降解得更慢。(i)一种适体(aptamer)，能与所述蛋白质或其结合位点结合；和/或(j)一种适体，能够优先与所述蛋白质的结合位点或活性位点结合。该药物组合物至少含有一种活性化合物，如1，2，3，4，5，6，7，8，9，10或更多的不同的化合物。在另一实施方案中，本专利技术涉及治疗糖尿病相关疾病的方法，防止所述疾病和/或延迟其在人体中的发作，该方法包含施用至少一种化合物，其选自(a)根据本专利技术的多肽；(b)编码(a)中多肽的核苷酸序列；(c)能与(a)中多肽结合的抗体；(d)能与编码至少部分(a)中多肽的核酸或其互补链(包括其调节元件)杂交的核酸片段；(e)能与(a)中多肽结合的化合物；(f)能上调、下调根据本专利技术的至少一种多肽的表达、活性和/或浓度的化合物；(g)一种能修饰与该疾病相关的蛋白质的形式的化合物，使得其相对表达、活性和/或浓度向健康人中可见的方向改变；(h)至少一种能够标记(如用泛醌)至少一种所述蛋白质的化合物，这些蛋白质在该疾病中对于更快的更新或降解其表达量相对太高；(i)至少一种能够标记至少一种所述蛋白质的化合物，这些蛋白质在该疾病中对于更慢的更新或降解其表达量相对太低；对于所述人群，该治疗应优选具有将标记蛋白质的水平恢复到在健康人群中可见的水平的效果。在目前优选的方案中，ATP合酶β亚基的磷酸化可调，如上调，因为人们相信ATP合酶β亚基的磷酸化可改变该酶的此种功能。这种磷酸化也可通过调节该激酶或调节使ATP合酶β亚基磷酸化或去磷酸化的磷酸酶而得以调节。ATP合酶β亚基的表达由称作PPARγ共活化物-1(PGC-1)的转录功能的“PPARγ的共活化因子”所调节。该活化因子因此可用作一种手段来上调ATP合酶β亚基。在另一种实施方案中，本专利技术涉及一种方法，来诊断或确定人的至少一种糖尿病相关疾病(优选2型糖尿病)的易感性，该方法包括确定取自于该人的生物学本文档来自技高网...

【技术保护点】
诊断或确定人对至少一种糖尿病相关疾病，优选２型糖尿病，的易感性的方法，该方法包括确定取自于该人生物学样品中至少一种标记蛋白质的存在、活性、浓度和／或表达水平，而该标记蛋白质选自：（ａ）ＡＴＰ合酶β亚基或磷酸化的ＡＴＰ合酶β亚基的同工 型；（ｂ）磷酸葡萄糖变位酶１；（ｃ）热休克蛋白９０β；（ｄ）肌酸激酶β亚基；（ｅ）肌球蛋白调节轻链２；（ｆ）胶原蛋白α１（Ⅵ）链；（ｇ）７８ＫＤａ葡萄糖调节蛋白；（ｈ）由表３所公布的特 性定义的标记蛋白质（匹配号：１９９，３０３，３９１，或５１１）；（ｉ）与（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）或（ｈ）中任一多肽或其部分优选有至少７０％同源性的类似物；和（ｊ）（ａ）到（ｉ）中任一多肽的衍生物 、前体、类似物或修饰物；并且可选将所述蛋白质的存在、活性、浓度和／或表达水平同取自至少一个正常人的生物学样品中所述蛋白质的存在、活性、浓度和／或表达水平进行比较。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：K霍吉伦德，SJ菲，PM拉森，H贝克尼尔森，K沃泽辛斯基，
申请(专利权)人：普赖德普罗特奥米克斯公司，
类型：发明
国别省市：DK[丹麦]