多层脂质囊泡组合物及使用方法技术

本发明专利技术提供具有更高的载荷容量，同时螯合高水平的疏水性和亲水性两种试剂的能力，和更长的释放概况的新颖和创新的药物递送系统。这些递送系统的一些方面包括含有稳定的多层脂质囊泡的组合物，所述囊泡具有共价缀合到试剂(如，抗原)的交联的脂质双层(本文称为双层之间‑交联的多层囊泡或ICMV)。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多层脂质囊泡组合物及使用方法专利技术背景脂质体已被广泛用作小分子的递送介质；然而，它仍然难以实现许多大分子药物在脂质体内的高水平的封装，并且许多药物制剂从脂质体过快的泄漏，以致不能保持有用的药物递送动力学。虽然通过微米-和纳米粒子的药物递送可封装蛋白和小分子药物，这通常仍然产生非常低的总质量封装的药物/单位质量粒子，通常在约10μg药物/mg粒子的数量级。此外，用于聚合物粒子合成的有机溶剂和在这些粒子内的疏水性/酸性环境可导致治疗剂的破坏(见Zhuetal.Nat.Biotechnol.200018：52-57)。可从通过微米-和纳米粒子有效递送药物获益的一个领域是人乳头瘤病毒(HPV)-相关癌。HPV-相关癌是世界上最快成长的癌症之一。大体说来，世界范围所有癌症的5％可归因于HPV感染。HPV-相关癌是女性中癌-相关死亡的第二大原因，并且是数量不断增加的宫颈癌、口咽癌，和肛门癌的主要原因。特别是，估计HPV株16和18造成70％的子宫颈癌病例，导致每年全世界约500,000个新病例和270,000人死亡。有大约十二个其它高危HPV株，其一起占宫颈癌的其它30％。HPV通过皮肤-至-皮肤的性接触传播。疾病控制中心(CentersforDiseaseControl)估计至少一半的所有性活跃个体在其生命中的某些时间点会获得HPV，而至少80％的女性到50岁时会获得HPV感染。由于缺少症状，HPV感染的早期发现是极其罕见的。FDA-批准的HPV疫苗被推荐用于所有的男性和女性，尤其是对于11-12岁的女孩，而对于至多26岁的女性追加疫苗接种。然而，美国2010年的调查发现，完全HPV免疫率是极其低的，13-17岁年龄中只有11％已经接受完全3个系列的HPV疫苗注射，而仅有25％已经接受至少一个剂量。而且，可获得的预防性疫苗通常预防但不能治愈已存在的癌症，并且到目前为止的亚单位疫苗不能产生必要的细胞免疫力。现有的基于重组蛋白的癌症疫苗避免了与活疫苗(如，病毒)载体有关的毒性和抗-载体免疫力，但它们的免疫原性差，特别是对于CD8+T细胞(CD8T)反应。已开发携带抗原和佐剂分子的合成粒子以增强亚单位疫苗，但一般来说这些材料不能在临床前动物模型中引起与活载体可比较的CD8T反应。缺乏症状和低的完全HPV免疫率均造成极其广泛的HPV感染，其最终引起HPV-相关癌症。HPV感染的早期临床表现包括肛门-生殖器疣、复发性呼吸道乳头瘤样增生，和子宫颈癌先兆(子宫颈上皮内瘤变)，其中一些可通过例如，手术治疗。然而，到了HPV感染已显示出这些症状的一个或多个时，发生HPV-相关癌，例如子宫颈、肛门、阴道、外阴、阴茎，或口咽的癌症的风险会变得极其高。目前，对HPV-诱发的癌症的唯一治疗的是化-放疗(chemoradiation)。存在对针对HPV-诱发的癌症，例如宫颈癌的新颖和有效的免疫疗法的需求。专利技术简述本专利技术提供具有更高的载荷容量，同时螯合高水平的疏水性和亲水性两种试剂的能力，和更长的释放概况的新颖和创新的药物递送系统。这些递送系统的一些方面包括含有稳定的多层脂质囊泡的组合物，所述囊泡具有共价缀合到试剂例如抗原(如，突变体人乳头瘤病毒(HPV)肽)的交联的脂质双层(本文称为双层之间-交联的多层囊泡或ICMV)。共价缀合于本专利技术的ICMV的试剂不是如在美国专利公布号US2012/0177724，如8页，[0091]，8-30行中定义的、携带末端-半胱氨酸的抗原。本专利技术的囊泡意外地提高封装效率，并且它们能够通过缓慢而持续的动力学释放封装的(或以其它方式捕获的)药物，即使在血清的存在下，使得它们作为在体内的持续递送介质是高度需要的。此外，如在本文更详细描述的，本专利技术的囊泡可在水性环境中合成，从而避免在各种现有技术方法(包括使用有机溶剂和/或酸性环境)很常见的苛刻条件。因此，这些合成方法更适合各种各样的试剂，包括那些使用这样的现有技术方法通常将在结构上和/或功能上造成损伤的试剂。生成的囊泡因而不含有机溶剂，并且可以仅包含脂质(包括可生物降解的脂质)和任何封装在其中或由此通过的试剂。本专利技术部分基于本专利技术囊泡的这些和其它令人惊讶和意外的特征，如在本文更详细描述的。因此，本专利技术提供这些稳定的囊泡，包含这些囊泡的组合物，制备这些囊泡的方法，及其使用方法。在第一个方面，本专利技术的特征是组合物，其包含：(a)具有脂质双层之间的交联的多层脂质囊泡；和(b)一种或多种突变体人乳头瘤病毒(HPV)肽；其中一种或多种突变体HPV肽的至少一种缀合于多层脂质囊泡的脂质。在一些实施方案中，突变体HPV肽具有相对野生型HPV肽序列的至少一个氨基酸取代。在一些实施方案中，突变体HPV肽具有相对野生型HPV肽序列的2-6个氨基酸取代。在一些实施方案中，突变体HPV肽衍生自HPV基因型16(HPV-16)或18(HPV-18)。在一些实施方案中，突变体HPV肽衍生自HPVE6蛋白或HPVE7蛋白。在一些实施方案中，突变体HPV肽衍生自HPV-16E6蛋白。在一些实施方案中，突变体HPV肽衍生自HPV-16E7蛋白。在一些实施方案中，突变体HPV肽衍生自HPV-18E6蛋白。在一些实施方案中，突变体HPV肽衍生自HPV-18E7蛋白。在一些实施方案中，突变体HPV肽包括第一种HPV肽和第二种HPV肽的融合蛋白。在一些实施方案中，第一种HPV肽和第二种HPV肽具有相同的基因型。在一些实施方案中，第一种HPV肽和第二种HPV肽具有不同的基因型。在一些实施方案中，第一种HPV肽和第二种HPV肽都是HPV-16肽。在一些实施方案中，HPV-16肽是HPV-16E6肽或HPV-16E7肽。在一些实施方案中，第一种HPV肽和第二种HPV肽都是HPV-18肽。在一些实施方案中，HPV-18肽是HPV-18E6肽或HPV-18E7肽。在一些实施方案中，第一种HPV肽是HPV-16肽和第二种HPV肽是HPV-18肽。在一些实施方案中，HPV-16肽是HPV-16E6或HPV-16E7肽。在一些实施方案中，HPV-18肽是HPV-18E6或HPV-18E7肽。在一些实施方案中，HPV-16E6肽衍生自HPV-16E6蛋白。在一些实施方案中，HPV-18E6肽衍生自HPV-18E6蛋白。在一些实施方案中，HPV-16E7肽衍生自HPV-16E7蛋白。在一些实施方案中，HPV-18E7肽衍生自HPV-18E7蛋白。HPVE6肽和HPVE7肽。在一些实施方案中，在融合蛋白中的HPVE6肽衍生自HPV-16E6蛋白或HPV-18E6蛋白。在一些实施方案中，在融合蛋白中的HPVE7肽衍生自HPV-16E7蛋白或HPV-18E7蛋白。在第二个方面，本专利技术的特征是组合物，其包含：具有脂质双层之间的交联的多层脂质囊泡，所述囊泡包括一种或多种第一突变体HPV肽，和一种或多种第二突变体HPV肽，其中第一突变体HPV肽的至少一个缀合于多层脂质囊泡的第一个脂质，其中第二突变体HPV肽的至少一个缀合于多层脂质囊泡的第二个脂质，且其中第一和第二突变体HPV肽是不同的。在一些实施方案中，除了第一和第二突变体HPV肽外，具有脂质双层之间的交联的多层脂质囊泡包含第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物，其包含：(a) 具有在脂质双层之间的交联的多层脂质囊泡；和(b) 一种或多种突变体人乳头瘤病毒(HPV)肽；其中所述一种或多种突变体HPV肽的至少一种缀合于所述多层脂质囊泡的脂质。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.09.11 US 62/049,239;2014.09.11 US 62/049,286;1.一种组合物，其包含：(a)具有在脂质双层之间的交联的多层脂质囊泡；和(b)一种或多种突变体人乳头瘤病毒(HPV)肽；其中所述一种或多种突变体HPV肽的至少一种缀合于所述多层脂质囊泡的脂质。2.权利要求1的组合物，其中所述突变体HPV肽具有相对野生型HPV肽序列的至少一个氨基酸取代。3.权利要求1或2的组合物，其中所述突变体HPV肽具有相对野生型HPV肽序列的2-6个氨基酸取代。4.权利要求1-3的任一项的组合物，其中所述突变体HPV肽衍生自基因型16(HPV-16)或18(HPV-18)的HPV。5.权利要求1-4的任一项的组合物，其中所述突变体HPV肽衍生自HPVE6蛋白或HPVE7蛋白。6.权利要求1-5的任一项的组合物，其中所述突变体HPV肽衍生自HPV-16E6蛋白。7.权利要求1-5的任一项的组合物，其中所述突变体HPV肽衍生自HPV-16E7蛋白。8.权利要求1-5的任一项的组合物，其中所述突变体HPV肽衍生自HPV-18E6蛋白。9.权利要求1-5的任一项的组合物，其中所述突变体HPV肽衍生自HPV-18E7蛋白。10.权利要求1-4的任一项的组合物，其中所述突变体HPV肽包含第一种HPV肽和第二种HPV肽的融合蛋白。11.权利要求10的组合物，其中所述第一种HPV肽和所述第二种HPV肽具有相同的基因型。12.权利要求10的组合物，其中所述第一种HPV肽和所述第二种HPV肽具有不同的基因型。13.权利要求10或11的组合物，其中所述第一种HPV肽和所述第二种HPV肽都是HPV-16肽。14.权利要求13的组合物，其中所述HPV-16肽是HPV-16E6肽或HPV-16E7肽。15.权利要求10或11的组合物，其中所述第一种HPV肽和所述第二种HPV肽都是HPV-18肽。16.权利要求15的组合物，其中所述HPV-18肽是HPV-18E6肽或HPV-18E7肽。17.权利要求10或12的组合物，其中所述第一种HPV肽是HPV-16肽和所述第二种HPV肽是HPV-18肽。18.权利要求17的组合物，其中所述HPV-16肽是HPV-16E6或HPV-16E7肽和其中所述HPV-18肽是HPV-18E6或HPV-18E7肽。19.权利要求10-18的任一项的组合物，其中所述HPV-16E6肽衍生自HPV-16E6蛋白和其中所述HPV-18E6肽衍生自HPV-18E6蛋白。20.权利要求10-18的任一项的组合物，其中所述HPV-16E7肽衍生自HPV-16E7蛋白和其中所述HPV-18E7肽衍生自HPV-18E7蛋白。21.一种组合物，其包含：具有脂质双层之间的交联的多层脂质囊泡，所述囊泡包含一种或多种第一突变体HPV肽，和一种或多种第二突变体HPV肽，其中至少一种所述第一突变体HPV肽缀合于所述多层脂质囊泡的第一脂质，其中至少一种所述第二突变体HPV肽缀合于所述多层脂质囊泡的第二脂质，和其中所述第一和第二突变体HPV肽是不同的。22.权利要求21的组合物，其中所述第一和/或第二种突变体HPV肽衍生自HPV-16E6蛋白、HPV-16E7蛋白、HPV-18E6蛋白，或HPV-18E7蛋白。23.权利要求6、19和22的任一项的组合物，其中所述HPV-16E6蛋白具有SEQIDNO:1的序列。24.权利要求7、20和22的任一项的组合物，其中所述HPV-16E7蛋白具有SEQIDNO:2的序列。25.权利要求8、19和22的任一项的组合物，其中所述HPV-18E6蛋白具有SEQIDNO:3的序列。26.权利要求9、20和22的任一项的组合物，其中所述HPV-18E7蛋白具有SEQIDNO:4的序列。27.权利要求1-26的任一项的组合物，其中所述一种或多种突变体HPV肽包含一种或多种官能化突变体HPV肽。28.权利要求27的组合物，其中所述一种或多种官能化突变体HPV肽包含硫醇官能化、马来酰亚胺官能化、肼官能化、叠氮化物官能化、炔烃官能化、胺官能化、羧酸官能化、烯烃官能化，和/或四嗪官能化突变体HPV肽。29.权利要求28的组合物，其中所述一种或多种官能化突变体HPV肽是马来酰亚胺官能化和/或肼官能化的。30.权利要求1-29的任一项的组合物，其中所述缀合的突变体HPV肽被封装在囊泡内。31.权利要求1-29的任一项的组合物，其中所述缀合的突变体HPV肽被封装在所述囊泡的脂质双层之间。32.权利要求1-29的任一项的组合物，其中所述缀合的突变体HPV肽存在于囊泡的外表面上。33.权利要求1-32的任一项的组合物，其中所述组合物包含所述一种或多种突变体HPV肽的至少一个分子，该分子不缀合于所述多层脂质囊泡的脂质。34.权利要求1-33的任一项的组合物，其还包含免疫调节剂。35.权利要求1-34的任一项的组合物，其还包含佐剂。36.一种组合物，其包含：(a)具有脂质双层之间的交联的多层脂质囊泡；和(b)一种或多种试剂；其中所述一种或多种试剂不是携带末端-半胱氨酸的抗原；和其中所述一种或多种试剂的至少一个分子缀合于所述多层脂质囊泡的脂质。37.权利要求36的组合物，其中所述试剂包含内部的半胱氨酸。38.一种组合物，其包含：(a)具有脂质双层之间的交联的多层脂质囊泡；和(b)一种或多种试剂；其中所述一种或多种试剂的至少一个分子缀合于所述多层脂质囊泡的脂质，和其中所述缀合不包括半胱氨酸。39.一种组合物，其包含：(a)具有脂质双层之间的交联的多层脂质囊泡；和(b)一种或多种试剂；其中所述一种或多种试剂的至少一个分子缀合于亲脂性部分。40.权利要求39的组合物，其中所述亲脂性部分包含酰基。41.权利要求36-40的任一项的组合物，其还包含佐剂。42.权利要求36-41的任一项的组合物，其还包含免疫调节剂。43.权利要求36-42的任一项的组合物，其中所述试剂是佐剂。44.权利要求36-42的任一项的组合物，其中所述一种或多种试剂包含一种或多种抗原。45.权利要求36-42和44的任一项的组合物，其中所述一种或多种试剂包含两种或更多种抗原。46.权利要求44或45的组合物，其中所述抗原是全长蛋白抗原。47.权利要求44或45的组合物，其中所述抗原是肽抗原。48.权利要求44-47的任一项的组合物，其中所述抗原是癌抗原。49.权利要求48的组合物，其中所述癌抗原是gp100。50.权利要求48的组合物，其中所述癌抗原是NY-ESO-1。51.权利要求48的组合物，其中所述癌抗原是粘蛋白(MUC)家族的成员。52.权利要求48的组合物，其中所述癌抗原是MUC1。53.权利要求48的组合物，其中所述癌抗原选自MAGE-A1、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A5、MAGE-A6、MAGE-A7、MAGE-A8、MAGE-A9、MAGE-A10、MAGE-A11、MAGE-A12、MAGE-Xp2(MAGE-B2)、MAGE-Xp3(MAGE-B3)、MAGE-Xp4(MAGE-B4)、MAGE-C1、MAGE-C2、MAGE-C3、MAGE-C4、MAGE-05、WT1(威尔姆氏瘤抗原1)、MUC1、LMP2(来自厄泼斯坦-巴尔病毒的潜伏膜蛋白2)、EGFRvIII、Her2/neu、独特型抗原、非-突变体p53、NY-ESO-1、PSMA(前列腺特异性膜抗原)、GD2、CEA(癌胚抗原)、MelanA/MART1、Ras突变体、gp100、突变体p53、蛋白酶3(PR1)、BCR-Abl断裂点、酪氨酸酶、存活蛋白、PSA(前列腺-特异性抗原)、hTERT(人端粒酶)、肉瘤易位断裂点、EphA2、PAP(前列腺酸性磷酸酶)、ML-IAP(ML-细胞凋亡抑制剂)、AFP(甲胎蛋白)、EpCAM(上皮细胞粘附分子)、ERG(TMPRSS2ETS融合基因)、NA17、PAX3(配对框3)、雄激素受体、细胞周期蛋白B1、多聚唾液酸、MYCN(N-myc)、RhoC、TRP-2(酪氨酸酶-相关蛋白2)、GD3、岩藻糖基GM1、间皮素、PSCA(前列腺干细胞抗原)、CYP1B1(细胞色素P4501B1)、PLAC1(胎盘-特异性1)、GM3、BORIS(印记位点调节因子样蛋白)、Tn(通过糖苷键连接于丝氨酸或苏氨酸的N-乙酰半乳糖胺)、GloboH、ETV6-AML、NY-BR-1、RGS5(G蛋白信号转导调节因子5)、SART3(T细胞3识别的鳞状上皮细胞癌抗原)、STn(唾液酸化Tn抗原)、碳酸酐酶IX、PAX5(配对框5)、OY-TES1、精子蛋白17、LCK(p56形式)、HMWMAA(高分子量黑素瘤相关抗原)、AKAP-4(A-激酶锚定蛋白4)、SSX2(滑膜肉瘤断裂点基因2)、XAGE1(x抗原1)、B7H3、Legumain、Tie2、Page4、VEGFR2(血管内皮生长因子受体2)、MAD-CT-1(黑素瘤癌睾丸抗原-1)、FAP(成纤维细胞活化蛋白)、PDGFR-b(血小板-衍生生长因子受体-b)、MAD-CT-2(黑素瘤癌睾丸抗原-2)，和Fos-相关抗原1。54.权利要求36-40的任一项的组合物，其中所述试剂是HPV肽。55.权利要求54的组合物，其中所述HPV肽衍生自HPV-16E6蛋白、HPV-16E7蛋白、HPV-18E6蛋白，或HPV-18E7蛋白。56.权利要求54的组合物，其中所述HPV肽包含第一种HPV肽和第二种HPV肽的融合蛋白。57.权利要求56的组合物，其中所述第一种HPV肽和所述第二种HPV肽具有相同的基因型。58.权利要求56的组合物，其中所述第一种HPV肽和所述第二种HPV肽具有不同的基因型。59.权利要求56或57的组合物，其中所述第一种HPV肽和所述第二种HPV肽都是HPV-16肽。60.权利要求59的组合物，其中所述HPV-16肽是HPV-16E6肽或HPV-16E7肽。61.权利要求56或57的组合物，其中所述第一种HPV肽和所述第二种HPV肽都是HPV-18肽。62.权利要求61的组合物，其中所述HPV-18肽是HPV-18E6肽或HPV-18E7肽。63.权利要求56或58的组合物，其中所述第一种HPV肽是HPV-16肽和所述第二种HPV肽是HPV-18肽。64.权利要求63的组合物，其中所述HPV-16肽是HPV-16E6或HPV-16E7肽和其中所述HPV-18肽是HPV-18E6或HPV-18E7肽。65.权利要求56-64的任一项的组合物，其中所述HPV-16E6肽衍生自HPV-16E6蛋白和其中所述HPV-18E6肽衍生自HPV-18E6蛋白。66.权利要求56-64的任...

【专利技术属性】
技术研发人员：李赛君，J埃比，PC德穆思，
申请(专利权)人：威登卓制药公司，
类型：发明
国别省市：美国,US