用于微生物检测分析系统、套组及方法，对于因结核分枝杆菌所引起的感染，能够提供一种简单、灵敏又经济有效的诊断法。本方法检验的高灵敏度和准确度，可提供对结核分枝杆菌的迅速侦测与鉴定能力，可在临床检体中有效分辨结核分枝杆菌与鸟型分枝杆菌、堪萨斯结核分枝杆菌和其他ＮＴＭ（间的差异性。此外，ＲＡＰＩＤ↑［ＴＭ］ＢＡＰ－ＭＴＢ检验试剂也能侦测最低达１０微微克肺结核杆菌的核酸，或相当于１到２０套的结核分枝杆菌基因组ＤＮＡ。本发明专利技术的分子检验装置－ＲＡＰＩＤ↑［ＴＭ］ＢＡＰ技术，由测量化学冷光或可见光，提供了高灵敏度与极具特异性的方法来检测结核分枝杆菌。是一种极具价值与多功能的平台技术，能侦测多种传染性疾病。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术是有关一种可用来检测疑似病例检体中的微生物(特别是肺结核菌)的分析系统、套组及方法。本专利技术亦有关一种可在同一仪器中同时进行温度及磁性控制的仪器装置，以大幅减少杂合反应的时间。
技术介绍
肺结核(Tuberculosis，TB)是儿童与成年人的主要感染杀手之一，且为世界上最常见的传染性疾病。目前世界上有三分之一人口感染肺结核，其中两千万人为已登录的病例；据估计肺结核在未来十年内将使三千万人致死。另目前可能已有超过五千万人感染多重抗药性(multidrug-resistant，MDR)的肺结核菌。抗药性的出现是来自公卫系统的自满以及缺乏适当管理肺结核的治疗所致。在多重抗药性的肺结核菌出现之前，多重药物治疗肺结核的治愈率在同时感染爱滋病的病患中仍可超过90％。如今多重抗药性的肺结核菌不但具高度传染性，亦无法完全治愈，死亡率将近50％。现今，在人类免疫力不全病毒(Human，Immunodeficiency Virus，HIV)呈阳性的患者群中，肺结核为引起死亡的主因，且死亡率高达80％。肺结核是由肺结核分枝杆菌(一种杆菌)所传染，它是由空气悬浮微粒散播并会造成不可逆的肺部损害。若病菌自肺部释出将可能造成全身性的疾病，影响器官包括骨、关节、肺、脾、肠胃道及脑部等。凡接触肺结核菌患者，50％会受感染，而15％受感染者会发病。贫穷、营养不良以及人口过剩，皆会增加肺结核菌的扩散与蔓延。过去控制肺结核的方法涉及使用不同抗生素的组合。最近由于多重抗药性菌株的出现，投用抗生素的种类与组合方式，都必须视病患感染的菌株而定。在极端的情况下，得以手术方式取出肺部感染的区域。依据传统作法，肺结核诊断是奠基于临床症状发现与肺部放射线检查，再以痰液或组织抹片中有无肺结核菌来进一步确认。这些方法仍然是诊断的金科玉律，但新近发展出的DNA探针、聚合酵素链锁反应(PCR)分析，以及液态培养法使得诊断更加灵敏与快速。但是，快速技术所增加的灵敏度，并不能确保精确度也随之增加。皮肤试验应该并同其他临床发现一起运用，惟当病患已接受BCG疫苗注射或被非肺结核分枝杆菌感染时，皮肤试验无法成为确定诊断的灵敏性或特异性的测试方法。检测感染至肺外的结核病患时，常需提供特定位置组织或体液的检体用作抹片、组织培养或组织学的分析。典型的肺结核损害包括肝酪化(caseating)或是未肝酪的肉芽瘤与巨细胞。能够快速检验出病患所感染的肺结核菌及其对抗药物的方法，对于诊断、治疗与社区的肺结核控制具有莫大帮助。适切的诊断对于控制肺结核的扩散极为重要。一般先以显微镜检验痰液检体，再以易于观察的快速酸性萤光染料(acid-fast fluorochromedye)auramine O，或较具专一性的Zeehl-Neelsen染色法进行检验。检体若不是在固态的基质上培养(如Lowenstein-Jensen slant)，就是存放在组织培养液中生长，如BACTEC自动放射计数系统(automated radiometricsystem)。然后再以生化技术或核糖核酸探针来鉴定不同菌株。以常用的几种抗生素测试，在新型的液态培养而非传统的洋菜稀释法测试分离出的菌株的易受性。运用Ziehl-Neelzsen石碳酸品红(carbolfuchSsn)或Kinyoun石碳酸品红染剂来检测肺结核已有百年历史，虽然没有组织培养那么敏锐，但此种快速酸性的抹片，属于快速而又价廉的测试方法，仅须基本设备即可执行测试工作，并可以高度专一性来辨识、分析杆菌。依据细菌量的不同，一个痰液抹片的敏锐度可在22％到80％之间，辨别率亦可由联合多个抹片的检查而提升。大多数美国的实验室均采用萤光染料染剂，如auramine-rhodamine染料。利用这种科技分枝杆菌可在低倍率的显微镜下显示明亮的桔色，以增加抹片灵敏度。Gen-Probe公司的Amplified Mycobacterium Tuberculosis Direct Test是针对分枝杆菌的核糖体RNA检测进行转录放大。这个测验使用对肺结核菌专一性极高的DNA探针。此种测验最适于(也仅限于)酸性快速杆菌抹片呈阳性反应，且组织培养仍在进行中的病患。由于专一性低于100％，即使对于抹片呈阳性反应的病患，仍偶有伪阳性出现，通常出现在非肺结核型的分枝感菌感染中。这个技术会放大，即使是目标肺结核菌DNA复合体非常小的一部份。这个测验使用一自动化的系统，可以快速侦测到小至在检体，支气管肺泡lavage(bronchoalveolar lavage)，胸腔液(pleural fluid)，或其他体液或组织检体中的单一生物体，并且在肺部疾病中有90％的灵敏度与专一性。Mantoux测验是检验肺结核较佳与较标准的皮肤诊断法。包括皮下注射5单位结核菌素(tuberculin unit，TU)的纯化蛋白质衍生物(purified proteinderivative，PPD，结核菌素tuberculin)，通常为0.1mL。硬化(Induration)程度则在注射后48到72小时量测。硬化程度(而非红肿)应量测两个垂直的直径后再平均。若欲减少观察期间的变异性，可以圆珠笔自硬化区外缘小心的移到中心。当愈靠近硬化区，阻力会愈高，应在硬化区的外缘作记号。然而，约20％的肺结核病患的皮肤测试可能出现阴性反应，有些族群有更高的伪阳性出现率。例如明显被人类免疫不全病毒(HIV)感染者，其伪阳性出现率可能提高50％以上。伪阳性也可能出现在感染非肺结核分枝杆菌的病患中(例如，Mycobacterium avium复合体)。因此，一个阴性的皮肤测试结果，将永远无法剔除肺结核的可能性，只有一个阳性的皮肤测试结果，也无法确定必须接受诊疗。有鉴于全球抗药性结核菌有日益蔓延的趋势，美国疾病管制与预防中心(Centers for Disease Control and Prevention)以及世界卫生组织(WorldHealth Organization)均建议对所有分离出的肺结核菌，进行灵敏度测试。此项专利技术分析是利用萤火虫的冷光性质，以基因体学方式引入肺结核菌检测中。此方法可在数小时内测试分枝杆菌的药物灵敏度。虽然目前仍在发展阶段，但在未来数年内可能被广泛利用。由以上可知，目前已知的试验皆无法快速且完全的侦测肺结核菌。因此，需要一种快速且有高灵敏度与专一性的分析法，期能从检体中检测肺结核菌。
技术实现思路
本专利技术是针对疑似病例检体中微生物(特别是肺结核菌)的一种分析系统、套组及方法。本专利技术亦有关能在一种仪器内进行双股核酸的分离、杂交、洗涤程序，并能分离磁珠与温度控制。本专利技术的一种侦测疑似病人样本中微生物DNA的方法，包含(a)将微生物的cDNA与微生物专一探针于杂交管中进行杂交，且探针与磁珠相连；(b)将杂交试管移到磁性槽中进行清洗；(c)将阻断液加入试管中；(d)加入卵白素酵素复合物或链霉抗生物素酵素复合物至试管中；(e)进行清洗反应，利用磁性去除干扰物质；(f)使磁珠悬浮；(g)在加入酵素受质后侦测冷光或颜色的变化。其中该微生物为肺结核杆菌。其中该微生物cDNA由引子所执行的PCR放大而来。其中该链霉抗生物素酵素复合物为链霉抗生物素山葵过氧化氢酵素。其中磁珠悬浮是利用涡漩震荡本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种侦测疑似病人样本中微生物ＤＮＡ的方法，包含： （ａ）将微生物的ｃＤＮＡ与微生物专一探针于杂交管中进行杂交，且探针与磁珠相连； （ｂ）将杂交试管移到磁性槽中进行清洗； （ｃ）将阻断液加入试管中； （ｄ）加入卵白素酵素复合物或链霉抗生物素酵素复合物至试管中； （ｅ）进行清洗反应，利用磁性去除干扰物质； （ｆ）使磁珠悬浮； （ｇ）在加入酵素受质后侦测冷光或颜色的变化。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：周锦生，黄长义，
申请(专利权)人：亚洲基因科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：71[中国|台湾]
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