将速效内控建立于二阶段聚合酶链锁反应中的方法技术

本发明专利技术为一种将速效内控建立于二阶段聚合酶链锁反应中的方法，于取得核酸样品后，将内控核酸序列、第一阶段引子对及内控核酸引子对加入核酸样品并进行第一阶段聚合酶链锁反应，生成第一阶段反应样品，随后由第一阶段反应样品取出部份作为内控测试样品，并以内控测试试纸测试内控测试样品中的内控核酸序列，以检验内控核酸序列是否在第一阶段聚合酶链锁反应中成功扩增，若内控测试试纸可测得扩增内控核酸序列，则将第二阶段引子对加至第一阶段反应样品以进行第二阶段聚合酶链锁反应，生成第二阶段反应样品。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术是有关于一种将速效内控建立于二阶段聚合酶链锁反应中的方法，尤其是指一种于第一阶段聚合酶链锁反应中加入内控核酸序列，并于第二阶段聚合酶链锁反应前以试纸确认内控核酸序列是否成功扩增，而可提早检出核酸样品中含有聚合酶链锁反应抑制物质造成聚合酶链锁反应失败的状况，以避免产生伪阴性结果及进行非必要的第二阶段聚合酶链锁反应者。
技术介绍
为降低结核病造成的感染与死亡，2005年美国疾病管制局与美国胸腔医学会于其共同遵循的「潜隐性结核病感染的特定目标结核菌素试验与治療」规范中列出的主要推行工作为：潜隐性结核病感染检验、潜隐性结核病感染治療以及臨床及实验监测等三项目标。美国结核病个案自1985年至1992年增加20％，而自1993至2003年结核病新个案下降约44％，至2004年降为14,571位结核病个案通报，新个案通报数在1993年至2004年的11年间連续下降，可以归功于有效地运用资源及早发现、治療开放性结核病病患与潜隐性结核病感染者。潜隐性结核病感染者指感染结核分枝杆菌后无症候与症狀、X光片及细菌学检查皆未显示为结核分枝杆菌阳性者。潜隐性结核感染者并不会感染他人，但若未加以治療，日后可能会病发成开放性结核病患者，虽开放性结核病患者在适当的医療照护下亦可被治愈，然而结核病患若未妥善治療，可能导致其死亡并造成扩大传染。国际上许多地区对于潜伏感染个案的诊断都依赖结核菌素皮肤试验，然而在中国台湾，因为长期实施卡介苗施打政策，加上过去高结核盛行率，使得利用结核菌素皮肤试验诊断潜伏结核感染在中国台湾窒碍难行。因此，运用分子检验技术如聚合酶链锁反应(polymerasechainreaction，PCR)等方法已被证明是为大量筛检潜伏结核感染病患的有效工具，尤其巢式聚合酶链锁反应(nestedPCR)可进一步增加检测结核分枝杆菌感染的准确性。然而，利用聚合酶链锁反应技术可能会受到痰液检体中蛋白质抑制物或其它聚合酶抑制物质的干扰，导致伪阴性的检测结果，影响整体检测方法的阳性检体检出率，是故应于检测方法中建立内控才能确保其效能。因此，本专利技术提出一种将速效内控建立于二阶段聚合酶链锁反应中的方法，将内控核酸序列加入核酸样品内，并于第一阶段聚合酶链锁反应中一并扩增第一阶段目标基因核酸序列(若为阴性则不存在亦不会被扩增)与内控核酸序列，并于第一阶段聚合酶链锁反应后、第二阶段聚合酶链锁反应前以试纸确认内控核酸序列是否成功扩增，而可提早于两阶段聚合酶链锁反应之间检出核酸样品中含有聚合酶链锁反应抑制物质造成聚合酶链锁反应失败的状况，以避免产生伪阴性结果及进行非必要的第二阶段聚合酶链锁反应者，对于未开发或开发中的国家地区而言，可有效减轻其利用二阶段聚合酶链锁反应检验疾病的人力物力负担。
技术实现思路
本专利技术的主要目的，在于提供一种将速效内控建立于二阶段聚合酶链锁反应中的方法，其于第一阶段聚合酶链锁反应中同时扩增第一阶段目标基因核酸序列与内控核酸序列，并于第一阶段聚合酶链锁反应后确认内控核酸序列是否成功扩增，故可于第二阶段聚合酶链锁反应前提早筛选含有聚合酶链锁反应抑制物质而可能造成伪阴性结果的核酸样品，而避免进行非必要的第二阶段聚合酶链锁反应。本专利技术的次要目的，在于提供一种将速效内控建立于二阶段聚合酶链锁反应中的方法，其利用内控测试试纸测试内控核酸序列是否于第一阶段聚合酶链锁反应中扩增，以内控测试试纸检验内控核酸序列的方法其操作简单、短时间内即可得到测试的结果，故可达成速效内控的效果。为了达到上述所指称的目的与功效，本专利技术揭示了一种将速效内控建立于二阶段聚合酶链锁反应中的方法，其步骤包含：取得一核酸样品；将一内控核酸序列、一第一阶段引子对及一内控核酸引子对加至该核酸样品，进行一第一阶段聚合酶链锁反应，生成一第一阶段反应样品；由该第一阶段反应样品取出部份作为一内控测试样品，并利用一内控测试试纸测试该内控测试样品以检验该第一阶段反应样品是否包含一扩增内控核酸序列；以及若该内控测试试纸测得该扩增内控核酸序列，将一第二阶段引子对加至该第一阶段反应样品，进行一第二阶段聚合酶链锁反应，生成一第二阶段反应样品。附图说明图1：其为本专利技术第一实施例的步骤流程图；图2：其为本专利技术第一实施例的内控测试试纸结构示意图；图3A：其为本专利技术第一实施例的内控测试试纸测试结果示意图(一)；图3B：其为本专利技术第一实施例的内控测试试纸测试结果示意图(二)；图3C：其为本专利技术第一实施例的内控测试试纸测试结果示意图(三)；图3D：其为本专利技术第一实施例的内控测试试纸测试结果示意图(四)；图4：其为本专利技术第二实施例的内控测试试纸测试结果图；及图5：其为本专利技术第二实施例的冷光读值结果图。【图号对照说明】1内控测试试纸10支撑体12检体层14复合体释放层16检验层160测试线162控制线18吸水层具体实施方式为了使本专利技术的结构特征及所达成的功效有更进一步的了解与认识，特用较佳的实施例及配合详细的说明，说明如下：本专利技术揭示的一种将速效内控建立于二阶段聚合酶链锁反应中的方法，其特色在于：于二阶段聚合酶链锁反应的第一阶段聚合酶链锁反应中一并扩增内控核酸序列，并于第一阶段聚合酶链锁反应完成后，利用内控测试试纸检测内控核酸序列是否于第一阶段聚合酶链锁反应中成功扩增，以决定是否进行第二阶段聚合酶链锁反应，若内控核酸序列未能成功扩增，显示核酸样品中可能有聚合酶抑制物质存在而造成第一阶段聚合酶链锁反应失败，故不应进行第二阶段聚合酶链锁反应，以避免第二阶段聚合酶链锁反应失败而产生伪阴性的结果，同时可省下进行无效的第二阶段聚合酶链锁反应的成本。首先请一并参阅图1，其为本专利技术第一实施例的步骤流程图；如图1所示，本专利技术的将速效内控建立于二阶段聚合酶链锁反应中的方法包含以下步骤：步骤S10：取得核酸样品；步骤S20：将内控核酸序列、第一阶段引子对及内控核酸引子对加至核酸样品；步骤S30：进行第一阶段聚合酶链锁反应，生成第一阶段反应样品；步骤S40：由第一阶段反应样品取出部份作为内控测试样品，并利用内控测试试纸测试内控测试样品；步骤S50：内控测试试纸是否可测得扩增内控核酸序列；步骤S60：将第二阶段引子对加至第一阶段反应样品；步骤S62：不进行第二阶段聚合酶链锁反应；及步骤S70：进行第二阶段聚合酶链锁反应，生成第二阶段反应样品。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种将速效内控建立于二阶段聚合酶链锁反应中的方法，其特征在于，其包含：取得一核酸样品；将一内控核酸序列、一第一阶段引子对及一内控核酸引子对加至该核酸样品，进行一第一阶段聚合酶链锁反应，生成一第一阶段反应样品；由该第一阶段反应样品取出部份作为一内控测试样品，并利用一内控测试试纸测试该内控测试样品以检验该第一阶段反应样品是否包含一扩增内控核酸序列；以及若该内控测试试纸测得该扩增内控核酸序列，将一第二阶段引子对加至该第一阶段反应样品，进行一第二阶段聚合酶链锁反应，生成一第二阶段反应样品。

【技术特征摘要】
1.一种将速效内控建立于二阶段聚合酶链锁反应中的方法，其特征在于，其包含：
取得一核酸样品；
将一内控核酸序列、一第一阶段引子对及一内控核酸引子对加至该核酸样品，进行一第一阶段聚合酶链锁反应，生成一第一阶段反应样品；
由该第一阶段反应样品取出部份作为一内控测试样品，并利用一内控测试试纸测试该内控测试样品以检验该第一阶段反应样品是否包含一扩增内控核酸序列；以及
若该内控测试试纸测得该扩增内控核酸序列，将一第二阶段引子对加至该第一阶段反应样品，进行一第二阶段聚合酶链锁反应，生成一第二阶段反应样品。
2.如权利要求1所述的将速效内控建立于二阶段聚合酶链锁反应中的方法，其特征在于，其中当该第一阶段引子对于该第一阶段聚合酶链锁反应中扩增一第一阶段目标基因核酸序列，该第一阶段反应样品包含一扩增第一阶段目标基因核酸序列。
3.如权利要求2所述的将速效内控建立于二阶段聚合酶链锁反应中的方法，其特征在于，其中当该第二阶段引子对于该第二阶段聚合酶链锁反应中扩增一第二阶段目标基因核酸序列，该第二阶段反应样品包含一扩增第二阶段目标基因核酸序列。
4.如权利要求1所述的将速效内控建立于二阶段聚合酶链锁反应中的方法，其特征在于，其中该内控测试试纸包含一测试...

【专利技术属性】
技术研发人员：周锦生，林欣亿，林品妍，
申请(专利权)人：亚洲基因科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：中国台湾;71