筛选过氧化物酶体增殖物的DNA芯片制造技术

本发明专利技术涉及ＤＮＡ芯片，其包括一种探针，该探针可与个体服药过氧化物酶体增殖物后表达的基因特异性杂交，并涉及筛选包括ＤＮＡ芯片的过氧化物酶体增殖物的试剂盒，制备该试剂盒的方法，和使用该试剂盒筛选过氧化物酶体增殖物的方法。本发明专利技术筛选过氧化物酶体增殖物的ＤＮＡ芯片包括：由１２１ｂｐ到５８７ｂｐ核苷酸组成的探针，其特异性结合到被过氧化物酶体增殖物诱导表达的基因；由寡聚（ｄＴ）１５ｒ（ＣＨ２）６－和胺基以相继次序组成的接头，寡聚（ｄＴ）１５的３′末端可以结合到探针的５′末端；和表面包被与接头的胺基通过Ｓｃｈｉｆｆ碱作用连接的醛基的固体基材。根据本发明专利技术，过氧化物酶体增殖物诱导体内异常细胞反应可以通过使用筛选过氧化物酶体增殖物的试剂盒容易地筛选，这使得在各种化学品的安全试验方面广泛的应用变成可能。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及筛选过氧化物酶体增殖物的DNA芯片，更具体而言，涉及一种DNA芯片，其包括一种探针，该探针可与个体服药过氧化物酶体增殖物后表达的基因特异性杂交，并涉及包括DNA芯片的用于筛选过氧化物酶体增殖物的试剂盒，制备该试剂盒地方法，和使用该试剂盒筛选过氧化物酶体增殖物的方法。现有技术的描述众所周知，过氧化物酶体增殖物在体内产生过量的自由基以诱发异常的细胞反应和活化促进体内甘油三酯分解的PPARs(过氧化物酶体增殖物激活的受体)。当动物服药过氧化物酶体增殖物，体内产生过量的自由基，因此过氧化物酶体在细胞中异常增殖并除去过量产生的自由基。异常增殖的过氧化物酶体吸收并除去存在于细胞的大多数自由基，而允许少量自由基保留在细胞中。因此，所述剩余的自由基，即使它们是在数量上是小的，能够导致细胞异常的氧化。在这方面，考虑到安全问题，验证一种待给药到动物的化学品是否可以作为过氧化物酶体增殖物是非常重要的。直到现在，为验证一种待给药到动物体的化学品是否可以作为过氧化物酶体增殖物，筛选具有过氧化物酶体增殖活性的化学品的下列方法已经在本领域中使用，其包含步骤对动物给药化学品；从动物切除肝以获得用于光学显微镜检查的组织样品；和用光学显微镜检查该组织并将其大小与原样样品比较，以验证异常增殖的过氧化物酶体的存在。然而，常规方法已经显示对于低的过氧化物酶体增殖活性的化学品具有时间消耗长和分辨率低的缺点。也就是说，从化学品服药的动物获得组织样品需要超过一天。此外，对于低过氧化物酶体增殖活性的化学品它不是相关的，产生可能不导致过度的过氧化物酶体增殖的相对小量的自由基，因此增殖的过氧化物酶体的大小与原样相比差别不明显。为了克服所述问题，本领域已经尝试了多种方法，然而还没有得到可以替换的方法。在这种条件下，开发筛选具有过氧化物酶体增殖活性的化学品有着强烈的理由。专利技术概述本专利技术人致力于建立筛选具有过氧化物酶体增殖活性的方法，并发现过氧化物酶体增殖物的筛选可以使用包含特异性与个体服药过氧化物酶体增殖物时表达的基因杂交的探针的DNA芯片，和使用包含荧光标记的核苷酸以标记从分离自样品的RNA合成的cDNA的用于筛选过氧化物酶体增殖物的试剂盒。因此本专利技术的第一个目的是提供筛选过氧化物酶体增殖物的DNA芯片，包含可以特异性与个体服药过氧化物酶体增殖物时表达的基因杂交的探针。本专利技术的第二个目的是提供制备该DNA芯片的方法。本专利技术的第三个目的是提供筛选过氧化物酶体增殖物的试剂盒，其包含DNA芯片。本专利技术的第四个目的是提供使用筛选试剂盒筛选过氧化物酶体增殖物的方法。专利技术详述本专利技术筛选过氧化物酶体增殖物的DNA芯片包括由121bp到587bp核苷酸组成的探针，该探针特异性结合到被过氧化物酶体增殖物诱导表达的基因；由寡聚(dT)15，(CH2)6-和胺基以相继次序组成的接头，寡聚(dT)15的3′末端可以结合到探针的5′末端；和表面包被与接头的胺基通过Schiff碱作用连接的醛基的固体基材。在本专利技术优选的实施方案中，探针，不限于此，选自以下SEQ ID Nos1到12的ESTs。AA8189105′-ACAAAAAAAAGAAAAAAAAAAAACACTTTTATTTTCCACAAGGAAGAGCAATAGGAAAAGTCAAATCATTTCCCACATGGTTTTCTTAAAACAGAGCCTACAAGGACATATTCAGCACCAAATAAAAGATTACAACAGCCATAGAATATAATCTATAAAGCAAACATTTAATATTGCACTTTGTTTCGCAAACATTTTGGATTTTACTTTTCCTAAATGAAAAATTAGGAATTCAAGATAGCTTGAATACTAGAGCGCAACTGTGACCCTCAGATGTTATGTCAGGAATTGACCAATATTTAGAATAGTGTAATGCCTCAAAAGAGTAAAGAAATACTTAATGGGAAAAATAAAACTTTACTTCACCAACTCTTAAAATAATTTTGTCACCAATGCCAATTATCAGAATATTGGTCATTCTTGCTTAATAAAGTATTTTGTAGAACATGGTAGTGAGCGCCCCGAGGCCATGCACACCAACAATTGTTCCCTAGTCAGACATAACACAGAGTCAGGTGTTTTTACACAATCCCTCCCAACAAAAACAAATCCACCAAATGCCCTTTATGCCAAATATCCCATCAGCT-3′(SEQ ID No1)AI0458275′-TTTATTGTGGGGCCACATGAAAAGGGCTGGGGTAGGGGATGTGGGGCCAGCCCCCGAGGCCTGGGGATGAGGAAAAAGTTAATACACAGTACATATAGAAGGCACAAGTGGGGAATTGGAG-3′(SEQ ID No2)AI0458145′-CATCTCAGTTCTAAGATAGACCAATGCTCAAAGTTTTATTAATTTTCCTGAAGTGTATCTGGGACGCATGCTCCTCTAAAGAGGAGGCACTTTATTTGTTTACCCCAGAGTCCACTGTTGGCAAACAGATACTTTTTTTTCTGCACCTACCAATTTTAAATGTTCTAAATAAAACAGAAAATGTAGAAATTCTATTAACACAAGTAATGTATAATAGGAGCTAGGATCAGCATTATTATCAGTGAATGTGCTATGAGGTCTGAGGAAGCATTTGATGCCCAGTCCCCT-3′(SEQ ID No3)AA8194085′-TGCACTATCACTCCCCAACCTACAGCCATCTGATACGCCGTGTACTGTTGCCTAGACTACAGTGAAAGGAAATGGAACTTTGTTACTTGGCTGTAGAGGACCTGATGGAAACCCTCTGTAAATGCTGGTGTTCTGAGAGAGTGCTTGTTCTGTCAAAGACCACAACCCAGAGCATTGCAGCAGTGCTGGGGAGACCAGTGAAGGCACTAGGGTAGAGAGCATTGGCATGGGTCACTGGCCCAGTAGACTTAATTCCCCTCGTGCCG-3′(SEQ ID No4)AA8194265′-GAGGTGCGAAGGACCACATCTCCAGTCGGAACACGTTCCGTTAGTTAATTAAAAAAAAAAAAAAAGACTTGGGTTTTTGAAAACCCAAACCAGCTTTCTTCAAAGATGTCACCCTCATTTGTACCCCTGGGCTTAGCAGCGTTAAGAGGGCTCTTGGCTCATGGATGTTCCTCTCTGGACTGACTGGTGAGCAGGTCCAGGCAGGGCGGCCTCCGGGCAGGCTCCTCCCTAGCTCCATCCAGCAGCGACGCTCCCAGCAGGCTCCAGATGGCGCTCCTCCCAGAAGGAGTGGCACTGGGGGCAGCAGGTGAACTGAGGATCCTCGCCCCACAGAC本文档来自技高网...

【技术保护点】
筛选过氧化物酶体增殖物的ＤＮＡ芯片，其包括：（ｉ）由１２１ｂｐ到５８７ｂｐ核苷酸组成的探针，其特异性结合到被过氧化物酶体增殖物诱导表达的基因；（ｉｉ）由寡聚（ｄＴ）↓［１５］，－（ＣＨ↓［２］）↓［６］－和胺基以相继次序组成 的接头，寡聚（ｄＴ）↓［１５］的３′末端可以结合到探针的５′末端；和（ｉｉｉ）表面包被有与接头的胺基通过Ｓｃｈｉｆｆ碱作用连接的醛基的固体基材。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄丞镛，郑真旭，吴文珠，金升俊，延钟泌，金俊燮，金容贤，李昌弦，尹贤圭，廉惠晶，康景宣，李荣纯，朴埈奭，黄载雄，金良石，李婉先，全起善，严赞辉，姜宗秀，李炅宰，宋福洙，金锦珍，吕灿东，
申请(专利权)人：株式会社格诺切克，财团法人SEOUL大学校产学协力财团，株式会社艾斯泰克，株式会社新元科学，
类型：发明
国别省市：KR[韩国]