硬脂酸/软脂酸组合作为aGVHD疾病诊断标志物的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种硬脂酸/软脂酸组合作为aGVHD疾病诊断标志物的应用，利用高通量的GC‑MS代谢组学技术，筛选出造血干细胞移植早期受体内硬脂酸/软脂酸比值水平可作为aGVHD的潜在血清代谢标志物，在诊断aGVHD疾病中具有较高的准确度，能够实现aGVHD疾病的早查、早诊、早发现，提高患者生存率、降低死亡率。同时可以使用本发明专利技术的代谢标志物制备成诊断试剂盒，为发展快速、无创、特异、准确、早期预测aGVHD疾病提供了新标志物试剂盒的研发方向，具备广阔的临床应用前景。

Application of stearic acid and palmitic acid as markers in the diagnosis of aGVHD disease

The invention provides an application of stearic acid and palmitic acid as markers in the diagnosis of aGVHD disease, the use of GC MS metabolic high-throughput technology, selected hematopoietic stem cell transplantation in recipients of stearic acid / palmitic acid ratios of aGVHD can be used as a potential serum metabolic markers with high the accuracy of the diagnosis of aGVHD disease, aGVHD disease can achieve early examination, early diagnosis and early detection, improve survival rate and reduce mortality. At the same time, the metabolic markers of the invention can be used as diagnostic kit for developing fast, noninvasive, specific, accurate and early prediction of aGVHD diseases. It provides a new direction for the development of new markers, and has broad clinical application prospects.

【技术实现步骤摘要】
硬脂酸/软脂酸组合作为aGVHD疾病诊断标志物的应用
本专利技术属于代谢组学、临床检测
，具体涉及利用气相色谱-质谱联用（GC-MS）的代谢组学技术筛选出造血干细胞移植后早期受体血清的硬脂酸/软脂酸比值水平可作为aGVHD的潜在标志物。
技术介绍
异基因造血干细胞移植(allogeneichematopoieticstemcelltransplantation,allo-HSCT)是目前治疗恶性血液病的有效手段。急性移植物抗宿主病(acutegraft-versus-hostdisease,aGVHD)是影响其预后的重要并发症，在同胞全相合异基因移植中发生率为30%-50%，而在无关全相合供体异基因移植中发生率高达50-70%。目前aGVHD的诊断主要依靠临床症状和活检病理等，这些传统检测手段往往比较滞后，一般都在aGVHD发生后才能确诊，从而延误治疗，致感染、出血等并发症，移植死亡率增加。因此我们急需一种简单、无创的方法对aGVHD进行预测，以尽早诊断，及时治疗，改善移植后患者的生存质量，提高生存率，同时对aGVHD的治疗转归进行评估。寻找和aGVHD发生相关的体液标志物已成为研究的热点，目前比较公认的有三大类:微小RNA标志物，免疫细胞标志物和蛋白标志物，这些研究方向主要集中在基因组学和蛋白质组学。而随着基因组学、蛋白组学研究的发展，学者们逐步认识到基因组发生变化不一定会在蛋白水平得到表达，从而并不对系统产生影响。而某中蛋白质的体液浓度在外部条件的影响下会升高，但由于其本身没有活性，对系统也不产生影响。同时，由于基因或蛋白的功能补偿作用，某个基因或蛋白的缺失引起的功能变化会由于其它基因或蛋白的存在而得到补偿，最后反应的净结果为零。小分子的产生和代谢才是以上一系列事件的最终结果，它能够更准确的反应机体的状态。实际上细胞内许多生命活动是发生在代谢层面的，如细胞信号释放、能量传递、细胞间通信等都是受代谢物调控的。代谢物是基因表达的最终产物，是蛋白质在酶的作用下形成的，处于生物系统生化活动调控的末端，包含更全面的生物标记物信息，能够准确反映生物体系的状态。许多代谢物反映了病人在疾病不同时期的生化改变，为临床判断和治疗提供了有参考价值的资料。这个新出现的概念称为代谢组(metabolomics)，关于其研究的相关学科被称为代谢组学。代谢组学是是系统生物学的重要组成部分，它处于基因组和蛋白质组的下游，是基因组和蛋白质组的补充，是生物体系整体功能或状态最终结果的表现，能够更灵敏地鉴定出基因改变、疾病发生和环境刺激等因素作用时的特定代谢表(metabotype)。代谢组学研究可能成为未来预测和评估aGVHD预后的一种全新有效的方法。造血干细胞移植后早期aGVHD的代谢表型目前研究非常少。饱和脂肪酸与体内炎性反应具有密切关系，它可能作为TLR2和TLR4体内配体参与体内免疫，也可能激活JNY而参与体内的众多免疫应答。目前研究集中在糖尿病的发病治疗方法，我们利用代谢组学方法进行了小样本代谢物筛选和大样本验证，发现造血干细胞患者体内软脂酸/硬脂酸水平具有成为aGVHD特定代谢表型的潜力。
技术实现思路
本专利技术的目的在于以aGVHD患者为研究对象，利用代谢组学方法，采用气相色谱-质谱（GC-MS）联用技术，结合多种统计分析方法，筛选出造血干细胞移植早期受体血清硬脂酸/软脂酸比值水平是aGVHD的潜在代谢标志物，为临床诊治aGVHD提供新的血清代谢标志物。为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：硬脂酸/软脂酸组合作为aGVHD疾病诊断标志物的应用中。进一步的，本专利技术所述的硬脂酸/软脂酸组合作为aGVHD疾病诊断标志物的应用中，所述硬脂酸和软脂酸来源于血清。进一步的，本专利技术所述的硬脂酸/软脂酸组合作为aGVHD疾病诊断标志物的应用中，以常规的方法检测血清中的硬脂酸和软脂酸。进一步的，本专利技术所述的硬脂酸/软脂酸组合作为aGVHD疾病诊断标志物的应用中，所述的常规检测方法为气相色谱-质谱联用法。进一步的，本专利技术所述的硬脂酸/软脂酸组合作为aGVHD疾病诊断标志物的应用中，气相色谱分析条件为：进样1μL，分流比为10:1，初始温度80℃保持5min，以10℃/min的速度匀速上升至170℃，再以5℃/min升至250℃，最后以10℃/min升至300℃维持5min，整个程序共计46min，载气为氦气，恒流，流速：1.0mL/min；质谱分析条件为：进样口温度300℃，离子化电压为70eV；离子源温度为230℃；检测器电压为1.2kV，电离方式为：电子轰击离子源（EI），离子化电压为70eV，质量扫描范围为30-600m/z，溶剂切割时间为5min。本专利技术所述的硬脂酸/软脂酸组合在制备治疗或缓解aGVHD疾病的药物中的应用。一种用于诊断aGVHD疾病的检测试剂盒，所述检测试剂盒包括本专利技术所述硬脂酸/软脂酸组合的标准品，所述标准品为硬脂酸和软脂酸的化学单体或两者的混合物。进一步的，所述检测试剂盒还包括缓冲液及显色剂。进一步的，所述检测试剂盒还包括溶解所述标准品的溶剂和提取所述代谢组合物的溶剂。本专利技术所述的检测试剂盒在筛选治疗或缓解aGVHD疾病的药物中的应用。有益效果：本专利技术提供了一种硬脂酸/软脂酸组合作为aGVHD疾病诊断标志物的应用，利用高通量的GC-MS代谢组学技术，筛选出造血干细胞移植早期受体内硬脂酸/软脂酸比值水平可做为aGVHD的潜在血清代谢标志物，在诊断aGVHD疾病中具有较高的准确度，能够实现aGVHD疾病的早查、早诊、早发现，提高患者生存率、降低死亡率。可以使用本专利技术的代谢标志物制备成诊断试剂盒，为发展快速、无创、特异、准确、早期预测aGVHD疾病提供了新标志物试剂盒的研发方向，具备广阔的临床应用前景。附图说明图1患者在移植后7天血清的GC-MS总离子流图，A为aGVHD阳性组，B为aGVHD阴性组。图2偏最小二乘判别法(OSC-PLSDA)按不同组别进行模式识别分析，得到的移植不同时间点aGVHD阳性组和aGVHD阴性组的不同代谢轮廓图，其中图A代表-9天，图B代表0天，图C代表+7天，图D代表+14天，图C显示的+7天两组可以明显区分，1是aGVHD阴性组，2是aGVHD阳性组。图3软脂酸（图A）、硬脂酸（图B）、硬脂酸/软脂酸的比值（图C）在发现阶段样本中的统计结果图。小样本物质筛选中发现硬脂酸、软脂酸在aGVHD阳性组和阴性组中有差异，并且趋势相反，两者的比值在两组患者中差异更加明显。图4软脂酸（图A）、硬脂酸（图B）、硬脂酸/软脂酸的比值（图C）在小样本物质ROC检验验证图，硬脂酸/软脂酸的AUC面积最大。图5硬脂酸/软脂酸比值在另一批大样本验证的t检验（A）和ROC检验（B）结果图，两种统计学方法均提示在验证样本中差异存在统计学意义。图6建立aGVHD预测的基础模型，A为加入硬脂酸、软脂酸及其比值与基础模型比较的综合模型图，B为软脂酸与基础模型的比较图，C为硬脂酸与基础模型的比较图，D为硬脂酸/软脂酸比值与基础模型的比较图，D图显示两者比值的AUC面积最大，统计学上具有更好的预测效果。具体实施方式下面结合具体实施例来进一步描述本专利技术，但实施例仅是范例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领本文档来自技高网...

【技术保护点】
硬脂酸/软脂酸组合作为aGVHD疾病诊断标志物的应用。

【技术特征摘要】
1.硬脂酸/软脂酸组合作为aGVHD疾病诊断标志物的应用。2.根据权利要求1所述的硬脂酸/软脂酸组合作为aGVHD疾病诊断标志物的应用，其特征在于，所述硬脂酸和软脂酸来源于血清。3.根据权利要求1所述的硬脂酸/软脂酸组合作为aGVHD疾病诊断标志物的应用，其特征在于，以常规的方法检测硬脂酸和软脂酸。4.根据权利要求3所述的硬脂酸/软脂酸组合作为aGVHD疾病诊断标志物的应用，其特征在于，所述的常规检测方法为气相色谱-质谱联用法。5.根据权利要求4所述的硬脂酸/软脂酸组合作为aGVHD疾病诊断标志物的应用，其特征在于，气相色谱分析条件为：进样1μL，分流比为10:1，初始温度80℃保持5min，以10℃/min的速度匀速上升至170℃，再以5℃/min升至250℃，最后以10℃/min升至300℃维持5min，整个程序共计46min，载气为氦气，恒流，流速：1.0mL/min；质谱分析条件为：...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴小津，吴德沛，王畅，谢伊瑜，韩悦，马骁，刘跃均，顾斌，
申请(专利权)人：苏州大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：江苏,32