一种防治水稻纹枯病的组合物及其制备方法技术

本发明专利技术涉及生物防治和生物工程技术领域，具体的说是一种防治水稻纹枯病的组合物及其制备方法。组合物为枯草芽孢杆菌的发酵物和壳寡糖；所述枯草芽孢杆菌为中国典型培养物保藏中心的保藏号为CCTCC M 2015385的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)SY‑BA2。本发明专利技术将天然高活性分子壳寡糖与枯草芽孢杆菌SY‑BA2的组合物用于防治水稻纹枯病，其利用壳寡糖能够刺激植物生长和诱导植物产生抗病性的特性与微生物产物相互协同，提高植物抗病性保护植物不受病原菌侵入。两者的进一步的结合是利用壳寡糖刺激植物生长和诱导植物产生抗病性的特性与微生物产物相互协同，提高植物抗病性保护植物不受病原菌侵入，并且对植物病原菌的防效具有明显的增效作用。

A composition and preparation method for prevention and control of rice sheath blight

【技术实现步骤摘要】
一种防治水稻纹枯病的组合物及其制备方法
本专利技术涉及生物防治和生物工程
，具体的说是一种防治水稻纹枯病的组合物及其制备方法。
技术介绍
水稻纹枯病是世界上重要的水稻病害之一，也是我国各大稻区的主要病害之一，其病原菌为立枯丝核菌(RhizoctoniasolaniKuhn)，主要以菌丝体或菌核在土壤中或在病稻草和其它寄主残体上越冬，具有强腐生性和广寄生性，喜高温高湿的特点。水稻纹枯病在水稻整个生育期都可发生，一般从分蘖期开始到抽穗前后发病最重，危害叶鞘和叶片，严重时也能危害穗部和深入到茎秆。该病害导致水稻结实率下降，千粒重降低，水稻减产可达50％。防治水稻纹枯病的化学药剂有很多，主要有井岗霉素、塞呋酰胺、三唑酮等，其中使用最广泛的是井岗霉素，但是长时间使用单一药剂防治病害大大增加了病原菌产生抗性的风险，所以，欧盟颁布的第2076/2002号法令禁止关于禁止使用井岗霉素。化学农药的长期施用带来了农药残留、病原菌抗药性增强和环境污染等严重问题，利用拮抗微生物及其活性物质防治作物病害的优点逐渐显现，绿色生物防治剂的研究已成为热点。目前，生物防治主要是利用生防微生物和农用抗生素等控制植物病害的发生与危害，但多限于使用微生物单剂或不同微生物之间的组合，例如专利申请号为CN201010175797.0公开了“水稻纹枯病生防菌株枯草芽孢杆菌WJ-1及菌剂与应用”，专利申请号为CN201210095319.8公开了“一种真菌发酵产物的制备及在水稻病害防治中的应用”。但是这种微生物单剂或不同微生物之间的组合在使用中受环境影响较大，对水稻纹枯病的防治效果不稳定。进而急需一种能够协同配合防治效果稳定的组合物。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种防治水稻纹枯病的组合物及其制备方法。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：一种防治水稻纹枯病的组合物，组合物为枯草芽孢杆菌的发酵物和壳寡糖；所述枯草芽孢杆菌为中国典型培养物保藏中心的保藏号为CCTCCM2015385的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)SY-BA2。所述枯草芽孢杆菌的发酵物为该菌株的培养物、培养浓缩物、培养菌悬液、发酵液或发酵分离上清液。所述组合物中壳寡糖的浓度为1-100mg/L，优选的壳寡糖浓度为10-100mg/L，更为优选的壳寡糖浓度为60-100mg/L；组合物中枯草芽孢杆菌活菌数不小于1×108cfu/mL。所述壳寡糖是聚合度(DP)为2-10的低聚糖，脱乙酰度在80％以上；进一步说，壳寡糖是聚合度(DP)为3-5的低聚糖，脱乙酰度在90％以上；上述壳聚糖可市购或是制备获得，其中进一步说是壳寡糖是用微波降解技术降解甲壳素的方法制得。一种防治水稻纹枯病的组合物的制备方法，组合物为枯草芽孢杆菌的发酵物和壳寡糖；所述枯草芽孢杆菌为中国典型培养物保藏中心的保藏号为CCTCCM2015385的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)SY-BA2；其中，组合物中壳寡糖的浓度分别为1-100mg/L，组合物中枯草芽孢杆菌活菌数不小于1×108cfu/mL。所述枯草芽孢杆菌的发酵物为该菌株的培养物、培养浓缩物、培养菌悬液、发酵液或发酵分离上清液。一种防治水稻纹枯病的组合物的应用，所述组合物在防治水稻纹枯病中应用。一种防治水稻纹枯病的制剂，含有上述记载的组合物作为制剂的活性组分；其中，制剂中活性组分的重量百分含量为0.1-99％。本专利技术所述枯草芽孢杆菌优选已保藏于中国典型培养物保藏中心的保藏号为CCTCCM2015385的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)SY-BA2，地址：湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山，保藏日期2015年6月17日。枯草芽孢杆菌SY-BA2在植物病害防治方面有广泛的应用，可有效防治水稻纹枯病、玉米锈病、小麦白粉病、黄瓜霜霉病、黄瓜炭疽病、黄瓜枯萎病等土传病害。本专利技术用的壳寡糖是用微波降解技术降解甲壳素而得到的聚合度(DP)为2-10的低聚糖，脱乙酰度在80％以上，理化性质稳定，来源易得。本专利技术具有如下的优点及有益效果：本专利技术将天然高活性分子壳寡糖与枯草芽孢杆菌SY-BA2的组合物用于防治水稻纹枯病，其利用壳寡糖能够刺激植物生长和诱导植物产生抗病性的特性与微生物产物相互协同，提高植物抗病性保护植物不受病原菌侵入。所采用的枯草芽孢杆菌SY-BA2分离自渤海湾海边土壤，经活性筛选证明发酵产物具有良好的生防效果及开发价值。壳寡糖是用微波降解技术降解甲壳素而得到的聚合度(DP)为3-5的低聚糖，脱乙酰度在90％以上，理化性质稳定，来源易得。同时壳寡糖还具有广谱的抑菌活性，对人畜无害，对环境友好，无污染。进而将两者进一步的结合利用壳寡糖刺激植物生长和诱导植物产生抗病性的特性与微生物产物相互协同，提高植物抗病性保护植物不受病原菌侵入，并且对植物病原菌的防效具有明显的增效作用。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的保护范围并不限于此。实施例1、菌株SY-BA2的分离筛选及鉴定采集渤海湾海边的土壤，采用梯度稀释、涂布分离的方法，对样品中的细菌进行涂布分离；采用离体平板对峙培养法测试筛选菌株的抑菌活性，将得到的广谱抑菌能力最强，并且易繁殖的菌株命名为SY-BA2。菌株SY-BA2为革兰氏阳性好氧菌，在平板上菌落圆形或近圆形，乳白色，伴随培养时间延长，菌落有褶皱和突起，显微镜下观察菌体杆状，大小为1.2-1.4μm×0.6-0.8μm，内生芽孢。扩增SY-BA2菌株的16SrDNA基因，测出其16SrDNA基因序列，登陆http://www.ncbi.nlm.nih.gov网站，在GenBank中进行核苷酸比对，与登录号为DQ523502.1的BacillussubtilisB432(枯草芽胞杆菌)菌株的同源性达100％。综合分析确定菌株SY-BA2为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。实施例2、菌株SY-BA2的发酵液制备将枯草芽孢杆菌SY-BA2接种于100mL种子培养基(胰蛋白胨10g，酵母粉3g，葡萄糖5g，NaCl5g，pH7.0)，30℃、150rpm下振荡培养48h，得到种子液，将种子液按体积比5％接种量接入扩大发酵培养基(组成与种子培养基相同)，相同条件下培养3d得发酵液，稀释平板法检测菌体浓度达108-1010cfu/mL。同时，将1/2的发酵液于20℃、10000rpm离心10min，收集上清液和菌体，将菌体中加入离心前等量的蒸馏水稀释成菌体液。实施例3、菌株SY-BA2发酵液对水稻纹枯病的防效在PDA固体培养基(土豆200g，葡萄糖20g，琼脂粉18g，1L蒸馏水)平板上接种水稻纹枯病原菌菌饼，25℃恒温培养，待菌丝长满板后备用。将盐丰47水稻种子播种于育苗钵中，待幼苗长至2叶时备用。将上述实施例获得的发酵液、菌体液和离心上清液分别均匀喷施在长势一致的2叶期水稻幼苗叶片上，每个处理3次重复，空白对照组为喷施自来水，24h后，接种水稻纹枯病病原菌，7d后调查发病结果。叶片发病指数和防治效果参考《农药田间药效试验准则(一)杀菌剂防治水稻纹枯病》GB/T17980.20-2000进行统计和计算。表1菌株SY-BA2发酵液对水稻纹枯病的防治效果由表1可知，菌株SY-BA本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种防治水稻纹枯病的组合物，其特征在于：组合物为枯草芽孢杆菌的发酵物和壳寡糖；所述枯草芽孢杆菌为中国典型培养物保藏中心的保藏号为CCTCC M 2015385的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)SY‑BA2。

【技术特征摘要】
1.一种防治水稻纹枯病的组合物，其特征在于：组合物为枯草芽孢杆菌的发酵物和壳寡糖；所述枯草芽孢杆菌为中国典型培养物保藏中心的保藏号为CCTCCM2015385的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)SY-BA2。2.按权利要求1所述的防治水稻纹枯病的组合物，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌的发酵物为该菌株的培养物、培养浓缩物、培养菌悬液、发酵液或发酵分离上清液。3.按权利要求1或2所述的防治水稻纹枯病的组合物，其特征在于：所述组合物中壳寡糖的浓度为1-100mg/L，组合物中枯草芽孢杆菌活菌数不小于1×108cfu/mL。4.一种权利要求1所述的防治水稻纹枯病的组合物的制备方法，其特征在于：将枯草芽孢杆菌的发酵物与壳寡糖混合；所述枯草芽...

【专利技术属性】
技术研发人员：胥维昌，魏婷婷，王芳，周繁，焦姣，辛雪成，樊金哲，李继广，
申请(专利权)人：沈阳化工研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁,21