16到18度黄酒非糖固形物简便快速测定方法技术

本发明专利技术利用特定双链DNA片段在不同水和乙醇质量体积比的乙醇水体系中变性程度不同导致260nm波长下吸光度有所差异，从而建立起一种全新的16到18度黄酒中非糖固形物测定方法。特定双链DNA片段如SEQ ID NO：1所示，其吸光度x和乙醇水体系中水和乙醇的质量体积比y之间的关系式为y=‑7.2617x+6.2683。本发明专利技术的非糖固形物测定方法适用于16‑18度黄酒的测定，具有良好的准确性和可靠性，无需长时间烘干较为安全，操作简便迅速，所需酒样量很少，且检测成本低廉。

A simple and rapid method for the determination of non sugar solids from 16 to 18 degrees of rice wine

【技术实现步骤摘要】
16到18度黄酒非糖固形物简便快速测定方法
本专利技术涉及非糖固形物检测方法，特别涉及一种16到18度黄酒非糖固形物简便快速测定方法。
技术介绍
黄酒是我国的特色酒种，其色泽明亮、香气浓郁、甘甜味美、风味醇厚，并含有丰富的氨基酸、小分子糖类、有机酸、维生素和微量元素等。黄酒由于其营养丰富、酒精度低且具有独特的风味口感和功效而深受广大人民群众的喜爱。非糖固形物是酒样中除糖外的非挥发性组分的统称，其在黄酒中的占比很小通常不足3%。虽然含量低，非糖固形物作用却很大，它很大程度上决定了黄酒的色泽、滋味、营养和功效，是黄酒品质等级评定的一项重要指标。按照国标GB/T13662-2008《黄酒》中参数，同一类型的黄酒中非糖固形物含量越高，黄酒的品质越好、口味越佳。现行的黄酒国标中采用的是4h烘干法来测定酒样中的非糖固形物含量，这种方法耗时长，而且存在酒样烘干4h后质量未达到恒重的情况，不利于快速测定、精确测量和批量检测。此外，还有基于近红外光谱建立的酒样非糖固形物快速测定方法，但是这种方法需要借助于贵重的设备，而且需要耗费较高的检测成本。因此目前亟需建立准确可靠、简便快速且经济实用的黄酒非糖固形物测定方法。乙醇含量即酒精度和总糖含量是黄酒的必测指标，单位体积的酒样质量可以很容易称定，此时若能测出酒样中乙醇水体系的总质量，则酒样质量减去乙醇水体系质量再减去总糖就可以得到非糖固形物质量。本专利技术利用特定双链DNA片段在不同水和乙醇质量体积比的乙醇水体系中变性程度不同导致260nm波长下吸光度有所差异，从而建立起一种全新的16到18度黄酒中非糖固形物测定方法，具有准确可靠、简便快速且经济实用的特点，适合于酒厂检测实际需求。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供16到18度黄酒非糖固形物简便快速测定方法。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案为，16到18度黄酒非糖固形物简便快速测定方法的主要步骤如下：（1）在黄酒品质检测中，按照现行国标先测定其酒精度v这一必测指标，同时称定1L酒样质量Mo，测定酒样的温度并据此查询乙醇密度ρ。（2）移取320ul室温待测黄酒酒样到空的酶标板中，加入40ul初始变性剂和40ul特定双链DNA片段并充分混匀后静置4min，同时设置对照孔为320ul待测酒样加40ul初始变性剂加40ul蒸馏水，待测酒样和对照均取平行测三次，样本处理好后将酶标板置于酶标仪中。（3）设定好酶标仪程序在260nm波长下测定样品孔和对照孔中的吸光度，则样品的平均吸光度减去对照的平均吸光度即为样品中特定双链DNA片段的实际吸光度x。将x代入关系式y=-7.2617x+6.2683中则可算出酒样中水和乙醇的质量体积比y，则酒样中总固形物含量M=Mo-10×ρ×v-10×y×v也即M=Mo-10×（ρ+y）×v，进而非糖固形物含量m=M-Mt，Mt为总糖含量。其中，步骤（1）中所述的黄酒是指国标法测定酒精度v大于等于16.0且小于等于18.0的黄酒；所述酒精度v是黄酒品质检测的必测指标，原本就有可直接采用；所述1L酒样质量Mo的测定方法为：在按国标法测定酒样酒精度时，量取100ml酒样后称量装有酒样的容量瓶重，则该重量扣除空容量瓶重即为100ml酒样重量，经换算即可得到1L酒样质量Mo，其单位为g/L；所述酒样温度为正常室温即可，优选地，控制在30.0±5.0℃之间。其中，步骤（2）中所述的初始变性剂是10%质量体积分数的尿素和10%体积体积分数的甲酰胺混合水溶液，即每100ml初始变性剂中含有10g的尿素和10ml的甲酰胺；所述的特定双链DNA片段，其序列如SEQIDNO：1所示，浓度为22umol。其中，步骤（3）中所述的平均吸光度是指三个平行的吸光度的算术平均值；所述总固形物含量M=Mo-10×ρ×v-10×y×v，其中10×ρ×v即乙醇密度乘以酒精度也就是100ml酒样的乙醇体积含量再乘以10，就可以得到1L酒样中的乙醇质量；而10×y×v即乙醇体积乘以水和乙醇的质量体积比再乘以10，就可以得到1L酒样中的水质量，则10×（ρ+y）×v实际上就是1L酒样中乙醇水体系的质量之和；因此总固形物含量M=Mo-10×（ρ+y）×v，也即1L酒样总质量减去其中的乙醇水体系质量则为1L酒样中的总固形物含量，其单位为g/L；进而非糖固形物含量等于总固形物含量减去总糖含量也即m=M-Mt，而总糖含量Mt是黄酒品质检测的必测指标，原本就有可直接采用，其单位为g/L。本专利技术筛选到特定的双链DNA片段其序列如SEQIDNO：1所示，并揭示了其在16-18度黄酒中紫外吸光度同体系中的水和乙醇的质量体积比之间的关系，在此基础上构建了16-18度黄酒非糖固形物的简便快速测定方法。本专利技术的非糖固形物测定方法适用于16-18度黄酒的测定，具有良好的准确性和可靠性，无需长时间烘干较为安全，操作简便迅速，所需酒样量很少，且检测成本低廉，适合于酒厂中此类黄酒非糖固形物测定实践。附图说明图1是本专利技术16到18度黄酒非糖固形物测定新方法的标准曲线，涉及特定双链DNA片段在260nm下的吸光度x和乙醇水体系中水和乙醇的质量体积比y的关系。图中的y=-7.2617x+6.2683是SPSS23.0软件拟合的x和y的关系式，R2=0.9979表示的是拟合曲线的决定系数。具体实施方式以下结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。本专利技术在待测酒样和DNA体系中还加入经优化的特定浓度的尿素和甲酰胺混合液，主要是为了使DNA片段处于一个易于变性的环境中，从而使得基于此的乙醇水体系质量测定方法具有更高的灵敏度。本专利技术筛选和优化得到的特定双链DNA片段如SEQIDNO：1所示，经研究发现在16到18酒精度这一窄的范围内其在260nm下的吸光度和体系中的水和乙醇质量比可以实现线性拟合。在本专利技术体系和条件下，16度以下的酒精度尚不足以使特定双链DNA片段变性，18度以上的酒精度已经足以使特定双链DNA片段完全变性，因此本专利技术提供的标准曲线只适用于16-18度之间的黄酒的非糖固形物测定。由于酒中乙醇和水占主体，固形物含量很低因此其对体系在260nm的吸光度影响很小，而且最大紫外吸收波长在260nm的特定双链DNA片段的浓度高达22umol，一方面可以提高检测灵敏度另一方面可以排除背景干扰。此外，设置了只加初始变性剂而不加特定双链DNA片段的酒样做为对照，可尽可能消除背景对吸光度的影响。在酒水产品质量检测中，分光光度法是常用的手段，可以测定包括色度、甲醇和特定氨基酸等，因此分光光度计是常规设备。实施例1实施例1是本专利技术16到18度黄酒非糖固形物简便快速测定方法中水和乙醇质量体积比测定标准曲线的制作。（1）人工乙醇水体系配制用移液器分别量取16.00ml、16.40ml、16.80ml、17.20ml、17.60ml和18.00ml无水乙醇于6个100ml容量瓶中，容量瓶置于分析天平上对应分别加入84.00g、83.60g、83.20g、82.80g、82.40g和82.00g蒸馏水，盖紧容量瓶盖反复颠倒充分混匀，室温静置10min，最终得到了不同水和乙醇质量体积比即水的质量/乙醇体积（对应分别为5.250、5.098、4.952、4.814、4.682和4.556）的人工乙醇水体系。（2本文档来自技高网...

【技术保护点】
16到18度黄酒非糖固形物简便快速测定方法，其特征在于所述黄酒非糖固形物简便快速测定方法的主要步骤为：（1）在黄酒品质检测中，按照现行国标先测定其酒精度v这一必测指标，并且v需要满足16.0≤v≤18.0，同时称定1L酒样质量Mo，测定酒样的温度并据此查询乙醇密度ρ；（2）移取320ul室温待测黄酒酒样到空的酶标板中，加入40ul初始变性剂和40ul特定双链DNA片段并充分混匀后静置4min，同时设置对照孔为320ul待测酒样加40ul初始变性剂加40ul蒸馏水，待测酒样和对照均取平行测三次，样本处理好后将酶标板置于酶标仪中；（3）设定好酶标仪程序在260nm波长下测定样品孔和对照孔中的吸光度，则样品的平均吸光度减去对照的平均吸光度即为样品中特定双链DNA片段的实际吸光度x，将x代入关系式y=‑7.2617x+6.2683中则可算出酒样中水和乙醇的质量体积比y，则酒样中总固形物含量M=Mo‑10×（ρ+y）×v，进而非糖固形物含量m=M‑Mt，Mt为总糖含量。

【技术特征摘要】
1.16到18度黄酒非糖固形物简便快速测定方法，其特征在于所述黄酒非糖固形物简便快速测定方法的主要步骤为：（1）在黄酒品质检测中，按照现行国标先测定其酒精度v这一必测指标，并且v需要满足16.0≤v≤18.0，同时称定1L酒样质量Mo，测定酒样的温度并据此查询乙醇密度ρ；（2）移取320ul室温待测黄酒酒样到空的酶标板中，加入40ul初始变性剂和40ul特定双链DNA片段并充分混匀后静置4min，同时设置对照孔为320ul待测酒样加40ul初始变性剂加40ul蒸馏水，待测酒样和对照均取平行测三次，样本处理好后将酶标板置于酶标仪中；（3）设定好酶标仪程序在260nm波长下测定样品孔和对照孔中的吸光度，则...

【专利技术属性】
技术研发人员：洪佳欣，陈如凯，
申请(专利权)人：洪佳欣，
类型：发明
国别省市：福建,35