一种抗CD19抗体及其制备方法和用途技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别是涉及一种抗CD19抗体及其制备方法和用途。本发明专利技术提供一种抗CD19抗体，所述抗CD19抗体的重链可变区的CDR包括氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的CDR‑H1、氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的CDR‑H2和氨基酸序列如SEQ ID No.3所示的CDR‑H3；所述抗CD19抗体的轻链可变区的CDR包括氨基酸序列如SEQ ID No.4所示的CDR‑L1、氨基酸序列如SEQ ID No.5所示的CDR‑L2和氨基酸序列如SEQ ID No.6所示的CDR‑L3。本发明专利技术发明专利技术人利用噬菌体展示技术对FMC63 scFv进行了亲和力成熟筛选，从而获得了高亲和力的对CD19的单链抗体。

An anti CD19 antibody and its preparation methods and uses

【技术实现步骤摘要】
一种抗CD19抗体及其制备方法和用途
本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种抗CD19抗体及其制备方法和用途。
技术介绍
CD19抗原(BlymphocyteantigenCD19，CD19)是特异性表达于人类B细胞表面的一种蛋白。CD19广泛表达在各个发育时期的B细胞表面并起到了重要的作用:CD19作为B细胞受体(Bcellreceptor，BCR)共受体(co-receptor)，可以降低抗原介导的B细胞受体依赖性激活(antigenreceptor-dependentstimulation)所需的信号阈值；B细胞受体激活依赖于CD19胞内区磷酸化继而招募Src激酶和PI3K激酶，从而彻底激活B细胞。完全成熟的B细胞称为浆细胞(plasmacell)，在完全成熟后浆细胞会丢失CD19抗原的表达。B细胞恶性增殖相关的血液肿瘤包括：B细胞急性淋巴细胞白血病(acutelymphoblasticleukemia，B-ALL)、B细胞慢性淋巴细胞白血病(chroniclymphoblasticleukemia，B-CLL)以及B细胞淋巴瘤(Blymphoma)。B细胞急性淋巴细胞白血病和B细胞淋巴瘤是恶性程度很高的癌症，其特征为外周血、骨髓伴随高程度的B细胞恶性增殖以及全身性B细胞实体瘤的形成，严重干扰患者的血液循环系统。现今，对于B细胞肿瘤的治疗主要包括小分子靶向药物比如伊马替尼(BCR-Ablkinaseinhibitor)以及依鲁替尼(brutonkinaseinhibitor)、抗体药物比如利妥昔单抗(CD20antibody)以及骨髓移植(bonemarrowtransplantation)；在临床应用中，小分子药物以及抗体药物可以显著延长病人的生存期，为骨髓移植争取时间，但是部分病人会出现耐药性复发，至今临床上的药物对于耐药性复发的病人很难取得疗效。嵌合抗原受体T细胞疗法(CART)属于新型的治疗方式，以病人T细胞为基础在体外扩增并进行基因工程改造，CART细胞能够识别肿瘤细胞特异性抗原(例如CD19)，激活后可以特异性裂解肿瘤细胞达到杀伤肿瘤目的，其特点为治疗周期短、疗效较快、完全响应率高、能够为病人争取足够的时间等待骨髓移植，甚至彻底治愈。嵌合抗原受体组成为单链抗体(scFv)-铰链区(hingeregion)-跨膜区(transmembranedomain)-共刺激结构域(co-stimulatorydomain)-必要刺激结构域(essentialsignalingdomain)，其中对抗原具有高亲单链抗体为嵌合抗原受体(CAR)的最重要组成部分，scFv对于抗原的亲和力决定了CART细胞能否激活以及杀伤肿瘤细胞，因此对于抗原特异性scFv进行亲和力成熟的筛选尤其重要。FMC63-mIgG2a是上个世纪通过动物免疫获得抗CD19的鼠源抗体。FMC63scFv已经成功被应用于抗CD19CAR构造，比如NorvatisCTL019以及JunoTherapeuticsJCAR015。CTL019以及JCAR015在B细胞急性淋巴细胞白血病的临床试验取得了较好的结果，完全缓解(completeremission)病人比例>70％。
技术实现思路
鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种抗CD19抗体及其制备方法和用途，用于解决现有技术中的问题。为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术一方面提供一种抗CD19抗体，所述抗CD19抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述抗CD19抗体的重链可变区的CDR包括氨基酸序列为GVSLPDYGVS(SEQIDNo.1)的CDR-H1、氨基酸序列为VIWGSETTYYNSALKS(SEQIDNo.2)所示的CDR-H2和氨基酸序列为HWYYGGSMAMDY(SEQIDNo.3)所示的CDR-H3；和/或，所述抗CD19抗体的轻链可变区的CDR包括氨基酸序列为RASQDISKYLN(SEQIDNo.4)所示的CDR-L1、氨基酸序列为HTSRLHS(SEQIDNo.5)所示的CDR-L2和氨基酸序列为QQGNTLPYT(SEQIDNo.6)所示的CDR-L3。CDR(互补决定区，complementaritydeterminingregion)通常指抗体中在空间结构上可以与抗原决定簇形成互补的区域。抗体中的可变性通常并不均匀地分布在整个抗体的可变区中，单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区通常均具有3个超变区(hypervariableregion，HVR)，这些区域在空间结构上通常可以与抗原决定簇形成互补，所以超变区也被称为互补决定区(complementaritydeterminingregion，CDR)，即重链可变区通常包括三个互补决定区，即HCDR1、HCDR2和HCDR3，轻链可变区通常包括三个互补决定区，即LCDR1、LCDR2和LCDR3。在本专利技术某些实施方式中，所述抗CD19抗体为单克隆抗体。单克隆抗体通常指一个抗体的群体，该群体中所包括的抗体是基本相同的(除少数可能存在的天然发生的突变外)。单克隆抗体通常针对抗原上特定的决定簇。在本专利技术某些实施方式中，所述抗CD19抗体为单链抗体(singlechainFv,scFv)。单链抗体通常可以为包含抗体的VH(重链可变区)和VL(轻链可变区)的多肽链。通常来说，单链抗体还可以包括连接肽(linker)，连接肽通常位于VH和VL之间，以使scFv形成能与抗原结合的期望结构。例如，所述抗CD19抗体可以包括VH和VL，VH和VL之间可以设有连接肽，所述单链抗CD19抗体自N段至C端可以依次包括VH、连接肽和VL，所述抗CD19单链抗体自N段至C端也可以依次包括VL、连接肽和VH。所述连接肽可以是本领域中各种适用于形成scFv的连接肽，例如，所述连接肽可以是G4S3linker，所述G4S3linker的选择或设计可以参考文献MichelSadelainetc，ScienceTranslationalMedicine，2013；CarlH.Juneetc,ScienceTranslationalMedicine,2015。在本专利技术某些实施方式中，所述抗CD19抗体衍生自CD19特异性的单克隆抗体FMC63(VH：Y14283.1,VL:Y14284.1)，其核苷酸序列如SEQIDNo.7所示，氨基酸序列如SEQIDNo.8所示。GAGGTGAAACTGCAGGAGTCAGGACCTGGCCTGGTGGCGCCCTCACAGAGCCTGTCCGTCACATGCACTGTCTCAGGGGTCTCATTACCCGACTATGGTGTAAGCTGGATTCGCCAGCCTCCACGAAAGGGTCTGGAGTGGCTGGGAGTAATATGGGGTAGTGAAACCACATACTATAATTCAGCTCTCAAATCCAGACTGACCATCATCAAGGACAACTCCAAGAGCCAAGTTTTCTTAAAAATGAACAGTCTGCAAACTGATGACACAGCCATTTACTACTGTGCCAAACATTATTACTACGGTGGTAGCTATGCTATGGACTACTGGGG本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗CD19抗体，所述抗CD19抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述抗CD19抗体的重链可变区的CDR包括氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的CDR‑H1、氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的CDR‑H2和氨基酸序列如SEQ ID No.3所示的CDR‑H3；和/或，所述抗CD19抗体的轻链可变区的CDR包括氨基酸序列如SEQ ID No.4所示的CDR‑L1、氨基酸序列如SEQ ID No.5所示的CDR‑L2和氨基酸序列如SEQ ID No.6所示的CDR‑L3。

【技术特征摘要】
2016.09.06 CN 20161080483131.一种抗CD19抗体，所述抗CD19抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述抗CD19抗体的重链可变区的CDR包括氨基酸序列如SEQIDNo.1所示的CDR-H1、氨基酸序列如SEQIDNo.2所示的CDR-H2和氨基酸序列如SEQIDNo.3所示的CDR-H3；和/或，所述抗CD19抗体的轻链可变区的CDR包括氨基酸序列如SEQIDNo.4所示的CDR-L1、氨基酸序列如SEQIDNo.5所示的CDR-L2和氨基酸序列如SEQIDNo.6所示的CDR-L3。2.如权利要求1所述的一种抗CD19抗体，其特征在于，所述抗CD19抗体的重链可变区的氨基酸序列包括：a)如SEQIDNo.9所示的氨基酸序列；或b)与SEQIDNo.9所示的氨基酸序列具有80％以上同源性、且具有a)所限定的氨基酸序列功能的氨基酸序列；和/或，所述抗CD19抗体的轻链可变区的氨基酸序列包括：c)如SEQIDNo.10所示的氨基酸序列；或d)与SEQIDNo.10所示的氨基酸序列具有80％以上同源性、且具有c)所限定的氨基酸序列功能的氨基酸序列；和/或，所述抗CD19抗体为单克隆抗体；和/或，所述抗CD19抗体为单链抗体；和/或，所述抗CD19抗体衍生自CD19特异性的单克隆抗体FMC63；和/或，所述抗CD19抗体的氨基酸序列如SEQIDNo.32所示。3.一种分离的多核苷酸，编码如权利要求1-2任一权利要求所述的抗CD19抗体的重链可变区和/或轻链可变区或全长氨基酸。4.一种构建体，含有如权利要求3所述的分离的多核苷酸。5.一种抗体的表达系统，所述表达系统含有如权利要求4任一权利要求所述的构建体或基因组中整合有外源的如权利要求3所述的多核苷酸。6.如权利要求1-2任一权利要求所述的抗CD19抗体的制备方法，包括如下步骤：在适合表达所述抗体的条件下，培养如权利要求5所述的抗体的表达系统，从而表达出所述的抗体，纯化分离出所述的抗体。7.如权利要求1-2任一权利要求所述的抗CD19抗体在制备或筛选治疗药物中的用途、或制备诊断药物中的用途。8.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述治疗药物为肿...

【专利技术属性】
技术研发人员：牟男，张云，马泽龙，袁纪军，曹跃琼，
申请(专利权)人：上海吉凯基因化学技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31