用于检测NK细胞活性的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测NK细胞活性的试剂盒。目前，NK细胞活性检测方法主要有形态法、酶释法、荧光法、放免法，但这些诊断、检测方法的优点少缺点多。因此临床急需一种检测速度快且灵敏度高的检测技术，更有利于患者的及时诊治。为了解决上述技术问题，本发明专利技术的目的在于提供一种用于检测NK细胞活性的试剂盒，其能节约检测时间和检测成本，且灵敏度高。

【技术实现步骤摘要】
用于检测NK细胞活性的试剂盒
本专利技术型属于生物
，涉及一种用于检测NK细胞活性的试剂盒。
技术介绍
自然杀伤细胞(naturalkillercell，NK)是机体重要的免疫细胞，不仅与抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节有关，而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生，其发育成熟依赖于骨髓和胸腺微环境。NK细胞的功能主要是通过以下方式实现的。NK细胞自然杀伤活性：NK细胞识别靶细胞(某些肿瘤细胞、病毒感染细胞、某些自身组织细胞、寄生虫等)，接着NK细胞释放穿孔素，细胞毒因子，活化的NK细胞释放TNF因子，从而达到裂解和杀伤靶细胞的可能。NK细胞毒作用(ADCC效应)，主要是NK细胞表面具有FcγRⅢA，主要结合人IgG1和IgG3的Fc段(Cγ2、Cγ3功能区)，在针对靶细胞特异性IgG抗体的介导下可杀伤相应靶细胞。活化的NK细胞可合成和分泌多种细胞因子，发挥调节免疫和造血作用以及直接杀伤靶细胞的作用。NK细胞通过自然杀伤和ADCC发挥的细胞毒作用，在机体抗病毒感染、免疫监视中起重要作用。目前，NK细胞活性检测方法主要有形态法、酶释法、荧光法、放免法，这些诊断、检测方法的优本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测NK细胞活性的方法，包括步骤：(1)取3ml肝素钠抗凝的外周血与PBS缓冲液按照1:1稀释，将稀释后的标本缓慢注入具有2ml淋巴细胞分离液的10ml离心管中，以665g转速离心20min，吸取中间白细胞层；采用PBS清洗2次，然后以393g转速离心10min，去上清液；将500μlRPMI1640培养液加入离心得到的沉淀中，混匀，得到单个核细胞PBMNC，浓度调节为1*106/ml备用；取对数期的K562‑EGFP细胞用PBS洗2次，然后以393g转速离心10min，去上清液，加500μlRPMI1640培养液混匀，放室温静置1h，浓度调节为1*105/ml备用；(2)将100μl...

【技术特征摘要】
1.一种用于检测NK细胞活性的方法，包括步骤：(1)取3ml肝素钠抗凝的外周血与PBS缓冲液按照1:1稀释，将稀释后的标本缓慢注入具有2ml淋巴细胞分离液的10ml离心管中，以665g转速离心20min，吸取中间白细胞层；采用PBS清洗2次，然后以393g转速离心10min，去上清液；将500μlRPMI1640培养液加入离心得到的沉淀中，混匀，得到单个核细胞PBMNC，浓度调节为1*106/ml备用；取对数期的K562-EGFP细胞用PBS洗2次，然后以393g转速离心10min，去上清液，加500μlRPMI1640培养液混匀，放室温静置1h，浓度调节为1*105/ml备用；(2)将100μlK562-EGFP加入对照管中；将100μlPBMNC+100μlK562-EGFP加入检测管中；然后将对照管与检测管均放入5％CO2培养箱中孵育2h；(3)将5.520μl抗体7-AAD-percp-cy5.5加入对照管与检测管中，充分混匀，静置1分钟，然后采用流式细胞仪检测细胞活性。2.根据权利要求1所述的一种用于检测NK细胞活性的方法，其特征在于，在采用流式细胞仪检测细胞活性前需要调整其电压，调整电压的步骤为：将100μlPBMNC加入A管中；将100μlPBMNC与100μlK562-EGFP加入B管中，然后将A管与B管均放入5％CO2培养箱中孵育2h；将5.520μl7-AAD-percp-cy5.5加入A管中，充分混匀，静置1分钟。3.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：于修鑑，
申请(专利权)人：广州大年生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44