一种运用电化学发光成像识别技术的生物标志物检测方法技术

本发明专利技术公开一种运用电化学发光成像识别技术的生物标志物检测方法，首先构建电化学发光放大探针，往提取样品中加入所述电化学发光放大探针，使生物标志物与电化学发光信号放大探针连接，得到体系1；往体系1中加入捕捉探针，使生物标志物与捕捉探针连接，得到体系2；往体系2中加入链霉亲和素磁珠，充分涡旋混匀后使生物标志物与链霉亲和素磁珠连接，然后用磁分离器分离，用PBS 1X缓冲液冲洗；用超纯水混匀步骤一所得产物，然后置于电化学发光成像系统中检测发光信号。本发明专利技术优点在于：1)信号采集灵敏度高、形象化且可定量化统计分析；(2)样品兼容性好；(3)操作简单快速、无需进行样品扩增；本发明专利技术检测过程简单，经过简单的样品提取过程即可进行生物标志物监测，耗时短，省去了扩增步骤，检测快速。

A biomarker detection method using electrochemiluminescence imaging recognition technology

【技术实现步骤摘要】
一种运用电化学发光成像识别技术的生物标志物检测方法
本专利技术属于生物标志物检测
，特别涉及一种基于单分子电化学发光识别系统的生物标志物检测方法及其应用。
技术介绍
随着生命科学技术的日新月异，越来越多的生物标志物在相关
发挥着日益重要的作用。其中microRNA、端粒酶、CEA蛋白及相关编码RNA等重大标志物已成为生命科学、医学等学科中的明星分子。然而，这些分子标志物现有的检测技术存在技术路线不统一、仪器设备兼容性差、技术体系间协作无法实现等缺点。因此，开发通用的、高灵敏度、兼容性好且仪器试剂可共用的多功能检测平台，对于现有生物标志物的检测具有重要意义。本专利技术以microRNA、端粒酶、CEA蛋白及相关编码RNA等重大生物标志物为研究对象，以高效的电化学发光放大方法作为技术支撑，开发了新型的单分子电化学发光成像识别方法，实现了灵敏度高、操作简单、快速且成本低廉的生物标志物检测方法。本专利技术提出的基于聚合物电化学发光信号放大方法，能够为单分子识别技术提供有力的技术支持，通过构建特异的生物标志物识别、捕捉及信号放大探针等体系，该系统能为研究者提供精确、客观、系统的监测本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种运用电化学发光成像识别技术的生物标志物检测方法，其特征在于：步骤一：首先构建电化学发光放大探针，往提取样品中加入所述电化学发光放大探针，使生物标志物与电化学发光信号放大探针连接，得到体系1；往体系1中加入捕捉探针，使生物标志物与捕捉探针连接，得到体系2；往体系2中加入链霉亲和素磁珠，充分涡旋混匀后使生物标志物与链霉亲和素磁珠连接，然后用磁分离器分离，用PBS 1X缓冲液冲洗；步骤二：用超纯水混匀步骤一所得产物，然后置于电化学发光成像系统中检测发光信号。

【技术特征摘要】
1.一种运用电化学发光成像识别技术的生物标志物检测方法，其特征在于：步骤一：首先构建电化学发光放大探针，往提取样品中加入所述电化学发光放大探针，使生物标志物与电化学发光信号放大探针连接，得到体系1；往体系1中加入捕捉探针，使生物标志物与捕捉探针连接，得到体系2；往体系2中加入链霉亲和素磁珠，充分涡旋混匀后使生物标志物与链霉亲和素磁珠连接，然后用磁分离器分离，用PBS1X缓冲液冲洗；步骤二：用超纯水混匀步骤一所得产物，然后置于电化学发光成像系统中检测发光信号。2.根据权利要求1所述的一种运用电化学发光成像识别技术的生物标志物检测方法，其特征在于：所述生物标志物包括microRNA、端粒酶、CEA蛋白及其编码RNA。3.根据权利要求2所述的一种运用电化学发光成像识别技术的生物标志物检测方法，其特征在于：microRNA表达水平检测步骤如下：①分别取10μM的线性或树状三联吡啶钌-赖氨酸聚合物，加入等量的DNA识别域，浓度为100μM，并在37℃环境下孵育过夜即12小时，完成信号放大基团即线性或树状三联吡啶钌-赖氨酸聚合物与DNA识别域的连接；②取50K道尔顿Da的超滤管，将步骤①所得的初产物移至超滤管，5000转/分钟冷冻离心5分钟，直至超滤管中液体离心至下层；③向步骤②中超滤管加入500μLPBS缓冲液1X，5000转/分钟冷冻离心5分钟，直至超滤管中液体离心至下层。重复操作3次，将游离的DNA识别域离心至下层；④用200μL的超纯水溶解步骤③所得产物上层中的电化学发光信号放大探针，反复冲洗上层管底部，充分溶解电化学发光信号放大探针；⑤取步骤④所得产物置于-20℃冰箱，并经过冷冻干燥6小时，得到固体产物，并储存于-20℃冰箱备用；⑥取microRNA提取样品1μL，加入44.5μL超纯水中，并加入2.5μL磷酸盐缓冲液(PBS，20X)，涡旋震荡；⑦向步骤⑥所得混合物中加入电化学发光信号放大探针即标记电化学发光聚合物1μL，浓度为0.25μM，涡旋震荡，并在37℃情况下孵育15分钟，使电化学发光信号放大探针与目标microRNA充分杂交；⑧向步骤⑦体系中加入1μL捕捉探针即标记生物素，浓度为0.25μM，涡旋震荡，并在37℃情况下孵育15分钟，使捕捉探针与目标microRNA充分杂交；⑨向步骤⑧体系中加入过量10μL的链霉亲和素磁珠，浓度1mg/mL，充分涡旋混匀后，在37℃情况下孵育10分钟；⑩将步骤⑨所得产物用磁分离器分离，并用PBS缓冲液1X清洗，重复三次；所得产物用超纯水混匀，并用最终用电化学发光成像识别系统检测信号。4.根据权利要求2所述的一种运用电化学发光成像识别技术的生物标志物检测方法，其特征在于：所述端粒酶活性检测步骤如下：Ⅰ端粒酶提取步骤采用商...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄曦，廖玉辉，赵钊艳，谭青琴，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东,44