一种南非漆树豆乙醇提取物抗菌剂及制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种南非漆树豆乙醇提取物及其在制备抗菌剂中的应用。本发明专利技术通过乙醇浸提法，提取出天然植物南非漆树豆(Elephantorrhiza elephantina)的主要成分。在此基础上，与蛋白酶K、EDTA、ε‑聚赖氨酸及无菌蒸馏水按照一定比例混合，制成新型抗菌剂，安全无毒副作用，应用在水果蔬菜及肉制品等日常食物中，能有效杀死各种食源性病原菌及院内感染病原菌，有效预防细菌性食物中毒，保障食品安全性，延长食品货架期。

An antiseptic and preparation method and application of the ethanol extract of lacquer lacquer bean in South Africa

The invention discloses an ethanol extract of lacquer tree bean in South Africa and its application in preparing antibacterial agent. The present invention by ethanol extraction, extraction of natural plant of South Africa (Elephantorrhiza elephantina sumac bean) the main component. On this basis, with proteinase K, EDTA, epsilon polylysine and sterile distilled water according to a certain proportion, made of new antibacterial agents, no toxic side effect, application in fruits and vegetables and meat products such as food, can effectively kill various pathogenic bacteria and foodborne pathogenic bacteria in the hospital, effectively prevent bacteria food poisoning, ensure food safety, prolong the shelf life of food.

【技术实现步骤摘要】
一种南非漆树豆乙醇提取物抗菌剂及制备方法和应用
本专利技术属于抗菌剂制备领域，涉及一种天然植物南非漆树豆，添加南非漆树豆乙醇提取物为主要抗菌成分，再添加其他天然抗菌成分辅助制备而成的抗菌剂。
技术介绍
目前市场上流通的抗菌剂种类很多，但是大部分都添加了具有一定毒性的化学试剂。在应用于食品抗菌时，存在一定的安全性问题。在这样的背景下，食品安全领域需要一种安全天然无毒副作用，并且具有广谱抗菌性的抗菌剂。南非漆树豆(Elephantorrhizaelephantina)，又名块茎含羞草，生长于津巴布韦、博茨瓦纳、莫桑比克、南非等地。其外形根茎粗壮，叶子细长如含羞草，但没有类似的叶片闭合的功能。喜爱阳光充足、温暖湿润的环境，夏季需半遮荫，冬季抗寒能力极强。南非当地居民称其植物(包括根)为“人类和牲畜的天然和传统愈合植物”，可作为治疗痢疾或腹泻的良药，防止出血，治疗肠道疾病；对于山羊等牲畜，蠕虫、绦虫、钩虫等寄生虫易于寄生其上，引起一系列感染，南非漆树豆可有效治疗蠕虫病、绦虫病、钩虫病等。目前国内还没有关于南非漆树豆的相关专利申请。因此开发南非漆树豆乙醇提取物抗菌剂，将会具有广阔的应用前景。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种南非漆树豆乙醇提取物及其在制备抗菌剂中的应用。所述的一种南非漆树豆乙醇提取物，制备方法如下：将南非漆树豆根部清洗干净，剪切、烘干，用无水乙醇浸泡提取，其中南非漆树豆根部与无水乙醇质量之比为1：9，于25℃水浴摇床中振摇浸提48h，过滤，得滤液，滤液中南非漆树豆乙醇提取物的质量分数为10％(w/w)。将此南非漆树豆乙醇提取物滤液作为储备液，接下来的实验都是取自储备液。本专利技术的抗菌剂的有效成分为南非漆树豆乙醇提取物，其质量分数范围为1.0％--2.0％。这里南非漆树豆乙醇提取物质量分数是相对于抗菌剂总体积来说的，例如1.0mL储备液添加到9.0mL蒸馏水中，最终南非漆树豆乙醇提取物的质量分数为1.0％(w/v)。抗菌剂的辅助组分有以下三个，蛋白酶K、EDTA及ε-聚赖氨酸。蛋白酶K浓度为10.0mg/mL；EDTA和ε-聚赖氨酸均为粉末，可先配制成浓度10.0mg/mL的储备液，在进行抗菌剂配制的时候，三个组分按照以下体积分数添加。抗菌剂各成分的质量分数及体积分数如下所示：具体实施方式本专利技术实施例采用如下所示的各成分分数进行实验及结果展示，但不仅局限于此。附图说明表1南非漆树豆乙醇提取物对食源性病菌及院内感染病原菌的抑菌效果及杀菌效果。图1南非漆树豆乙醇提取物抗菌剂对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的抗菌效果。图2南非漆树豆乙醇提取物抗菌剂在小番茄中的应用。具体实施方式通过下面实例说明本专利技术的具体实施方式，但本专利技术的保护内容，不仅局限于此。实施例1南非漆树豆乙醇提取物的抗菌实验(1)实验菌株(菌种名为斜体)a.食源性病原菌：大肠杆菌：EscherichiacoliIFO；金黄色葡萄球菌：Staphyloccocusaureus；肠炎沙门氏菌：SalmonellaEnteritidis；枯草芽孢杆菌：Bacilluscereus；枯草杆菌：Bacillussubtilis；单核细胞增生李斯特菌：Listeriamonocytogenes；肉毒梭状芽孢杆菌：Clostridiumbotulinum；b.院内感染病原菌：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌：MRSA(Methicillin-resistantStaphylococcusaureus)。(2)实验方法向无菌NB培养液中添加储备液(南非漆树豆乙醇提取物滤液)，使其质量分数分别为0.0625％，0.125％，0.25％，0.5％，1.0％(w/v)。这里南非漆树豆乙醇提取物质量分数是相对于NB培养液来说的，例如1.0mL储备液(质量分数为10％(w/w))添加到9.0mLNB培养液中，通过培养液的稀释作用，最终南非漆树豆乙醇提取物的质量分数为1.0％(w/v)，其他浓度以此类推。用微量移液器加入培养至对数期的菌液，初始浓度为105-6CFU/mL。接种的培养液置于37℃培养箱中培养24-48h，其中单核细胞增生李斯特菌置于25℃培养箱中培养48h。最小抑菌浓度(MinimumInhibitoryConcentration，MIC)指在特定环境下孵育后，用肉眼辨别不出细菌繁殖的最小浓度。将大于等于最小抑菌浓度的培养液分别用接种环蘸取一环，在无菌NA培养基上划线，同样置于37℃及25℃培养箱中培养24-48h。在NA培养基上完全看不到菌落生长的浓度定为最小杀菌浓度(MinimumBactericidalConcentration，MBC)。(3)实验结果本专利技术样品为抗菌剂，对于以上病原菌均有很好的抗菌性，对于大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、枯草芽孢杆菌、枯草杆菌、单核细胞增生李斯特菌、肉毒梭状芽孢杆菌等食源性病原菌及院内感染病原菌耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为0.125％--0.25％，最小杀菌浓度为0.125％--0.5％。本专利技术的抗菌剂对于各种食源性病原菌及院内感染病原菌的抗菌效果良好。表1南非漆树豆提取物对食源性病菌及院内感染病原菌的抑菌效果及杀菌效果实施例2南非漆树豆乙醇提取物抗菌剂的抗菌实验(1)实验菌株(菌种名为斜体)大肠杆菌：Escherichiacoli；金黄色葡萄球菌：Staphyloccocusaureus；(2)实验方法采用平板菌落计数法，以大肠杆菌(Escherichiacoli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)为模式菌种，测定南非漆树豆乙醇提取物抗菌剂的抗菌性能。将磷酸缓冲液(PBS)溶液等体积分装试管，高压灭菌备用。将南非漆树豆乙醇提取物抗菌剂以最终体积分数为0.25％(v/v)的浓度添加到试管中，并接入培养至对数期的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌，初始浓度为105CFU/mL，以不添加抗菌剂的试管为空白对照组，混合均匀，放置在37℃的摇床培养。在0h，24h，48h时，取出试管，逐级稀释涂布于NA培养基上，测定残存菌数。测定方法按照GB4789.2—2010食品卫生微生物学检测菌落总数进行。(3)实验结果从图1可以看出，南非漆树豆乙醇提取物抗菌剂对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均具有良好的杀菌效果。在48h时，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的残存菌数分别下降了93.0％，96.5％。实施例3南非漆树豆乙醇提取物抗菌剂在小番茄中的应用(1)实验菌株(菌种名为斜体)大肠杆菌：Escherichiacoli；金黄色葡萄球菌：Staphyloccocusaureus；(2)实验方法采用平板菌落计数法，以大肠杆菌(Escherichiacoli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)为模式菌种，测定南非漆树豆乙醇提取物抗菌剂在番茄中的应用。购买新鲜小番茄，洗净，对半切开。将小番茄与磷酸缓冲液(PBS)以质量比1：9混合，转移至无菌均质袋，均质5min，过滤，吸取上清液，即得质量分数10％(w/w)的小番茄培养液，等体积分装试管，高压灭菌后备用。将南非漆树豆天然抗菌剂以最终体积分数为0.25％(v/v)的浓度添加到试管中，并接入培养至对数期的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌，初始浓度为102-3CF本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种南非漆树豆乙醇提取物，其特征在于，将南非漆树豆根部清洗干净，剪切、烘干，用无水乙醇浸泡提取，其中南非漆树豆根部与无水乙醇质量之比为1：9，于25℃水浴摇床中振摇浸提48h，过滤，得含有南非漆树豆乙醇提取物的滤液。

【技术特征摘要】
1.一种南非漆树豆乙醇提取物，其特征在于，将南非漆树豆根部清洗干净，剪切、烘干，用无水乙醇浸泡提取，其中南非漆树豆根部与无水乙醇质量之比为1：9，于25℃水浴摇床中振摇浸提48h，过滤，得含有南非漆树豆乙醇提取物的滤液。2.如权利要求1所述的一种南非漆树豆乙醇提取物，其特征在于，滤液中，南非漆树豆乙醇提取物的质量分数为10％(w/w)。3.如权利要求1所述的一种南非漆树豆乙醇提取物，其特征在于，对食源性病菌及院内感染病原菌有良好的抑菌效果及杀菌效果，食源性病原菌及院内感染病原菌的最小抑菌浓度为0.125％--0.25％，最小杀菌浓度为0.125％--0.5％。4.如权利要求3所述的一种南非漆树豆乙醇提取物，其特征在于，所述食源性病原菌为大肠杆菌：EscherichiacoliIFO；金黄色葡萄球菌：Staphyloccocusaureus；肠炎沙门氏菌：SalmonellaEnter...

【专利技术属性】
技术研发人员：林琳，顾玉磊，崔海英，符楠，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32