家蚕生产重组犬α干扰素的方法技术

本发明专利技术公开了一种家蚕表达重组犬α干扰素的方法。利用家蚕杆状病毒作为载体，构建了重组含有犬α干扰素基因的重组病毒。利用家蚕作为重组杆状病毒的宿主，表达了具有生物活性的重组犬α干扰素。解决了犬α干扰素在大肠杆菌中表达需要复杂的复性操作、酵母表达中质粒转化体不稳定和在哺乳动物培养细胞生产的成本太高的缺点，家蚕幼虫表达的重组犬α干扰素大部分被分泌进血淋巴中，非常有利于蛋白质的快速提取。实验结果证明利用重组杆状病毒以家蚕生产重组犬α干扰素方法可行。重组犬α干扰素的大量表达为α干扰素在医学和治疗领域上的应用开辟前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及DNA重组技术、蛋白质的纯化与活性分析，尤其涉及一种家蚕 生产重组犬a干扰素的方法。
技术介绍
干扰素(Interferon， IFN)是由脊椎动物细胞产生的一类分泌型糖蛋白，它具 有广谱抗病毒和增强免疫应答的作用，其主要活性是抗病毒。犬的a干扰素全基 因为561个碱基，编码187个氨基酸，其中前23个氨基酸为信号肽，后164个氨基 酸为成熟蛋白，蛋白分子量约为19kDa。 Hiummler等于1987年首先开始了犬a干 扰素基因的研究。报道了犬a干扰素基因序列并专利控制了该基因的使用，而国 内这方面研究较少。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种家蚕生产重组犬a干扰素的方法。利用基因工程 表达技术，构建含有犬a干扰素基因的重组病毒，并利用家蚕作为宿主，表达生 产具有生物活性的重组犬a干扰素。为了达到上述目的，本专利技术采用的技术方案其步骤如下1、 一种家蚕生产重组犬a干扰素的方法(1) a干扰素基因的克隆以浙江省当地家犬的血细胞抽提的基因组DNA为 模板，利用PCR技术扩增得到犬a干扰素基因；引物设计如下正向引物5 ，ggatcctgccacctgcccgac本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种家蚕生产重组犬α干扰素的方法，其特征在于：　（１）α干扰素基因的克隆：以浙江省当地家犬的血细胞抽提的基因组ＤＮＡ为模板，利用ＰＣＲ技术扩增得到犬α干扰素基因；引物设计如下：正向引物：５’ｇｇａｔｃｃｔｇｃｃａｃｃｔｇｃｃｃｇａｃ３’，含有ＢａｍＨⅠ酶切位点，反向引物：５’ａａｇｃｔｔｔｃａｔｔｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｇ３’，含有ＨｉｎｄⅢ酶切位点；ＰＣＲ反应的循环数、温度和时间的设计如下：一个循环，９４℃模板变性３分钟；以下３０个循环，９４℃变性５０秒，５５℃退火３０秒，７２℃延伸２分钟；最后１个循环，７２℃延伸１０分钟；利用１％琼脂糖凝胶电泳进行ＰＣＲ产物分析，并用Ｑｉａｇｅｎｅ的ＰＣＲ纯化...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：相兴伟，吴小锋，陈琳，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]