CCL18作为靶点在筛选或制备抑制鼻咽癌转移的药物中的用途制造技术

本发明专利技术提供了CCL18作为靶点在筛选或制备抑制鼻咽癌转移的药物中的用途。本发明专利技术通过靶向CCL18来抑制EBV+鼻咽癌细胞的转移，所述CCL18是肿瘤相关巨噬细胞分泌最多的细胞因子，其受体被鉴定为PITPNM3，通过阻断这一通路，可抑制肿瘤细胞的侵袭、迁移和EMT，在人源化荷瘤小鼠中使用，可抑制鼻咽癌的转移。

The use of CCL18 as a target for screening or preparing drugs to inhibit metastasis of nasopharyngeal carcinoma

The present invention provides the use of CCL18 as a target for screening or preparing drugs to inhibit metastasis of nasopharyngeal carcinoma. The transfer of the invention by targeting CCL18 to inhibit EBV+ in nasopharyngeal carcinoma cells, the CCL18 is a tumor associated macrophage cytokine secretion most, its receptor was identified as PITPNM3 by blocking this pathway can inhibit tumor cell invasion, migration and EMT, in the use of humanized mice, can inhibit metastasis nasopharyngeal carcinoma.

【技术实现步骤摘要】
CCL18作为靶点在筛选或制备抑制鼻咽癌转移的药物中的用途
本专利技术涉及CCL18作为靶点在筛选或制备抑制鼻咽癌转移的药物中的用途。
技术介绍
病毒感染后的恶性肿瘤有炎症细胞的浸润，形成炎症微环境，炎症因子激活肿瘤细胞信号通路的异常激活，促进了肿瘤细胞的转移。鼻咽癌的转移是影响鼻咽癌病人预后的重要因素，鼻咽癌现有的治疗方法包括化疗、放疗、手术治疗等综合治疗，而靶向治疗则仍在起步阶段。Chan等对60例经过多程铂类药物治疗失败的远处转移鼻咽癌患者应用西妥昔单抗(抗表皮生长因子受体单克隆抗体)和卡铂联合化疗，11.7％病例达到PR，48％达到SD，且毒副反应可以耐受。Bonner等报道了放疗联合西妥昔单抗对比单纯放疗治疗局部区域晚期头颈部鳞癌的Ⅲ期临床试验，研究结果证实放疗联合西妥昔单抗可延长局部控制时间，降低死亡率，但不增加放疗相关的常见毒性反应。现有技术尚未有明确有效的方法治疗鼻咽癌的转移，现有报道证明环境压力如吸烟、化学物质刺激等均会引起EB病毒激活复制，成为鼻咽癌发生发展的重要因素，而现今很少针对病毒诱导的炎症微环境的治疗方法。
技术实现思路
本专利技术针对病毒感染导致的鼻咽癌炎症微环境进行靶向治疗，选取炎症微环境中分布最多的肿瘤相关巨噬细胞，所分泌最多的细胞因子CCL18，通过靶向CCL18阻断肿瘤炎症微环境对鼻咽癌的促进作用，抑制鼻咽癌的转移。为实现上述目的，所采取的技术方案：CCL18或者CCL18受体作为靶点在筛选或制备抑制鼻咽癌转移的药物中的用途。本专利技术提供了CCL18中和抗体在制备抑制鼻咽癌转移的药物中的用途。本专利技术提供了GM-CSF作为靶点在筛选或制备抑制鼻咽癌转移的药物中的用途。本专利技术提供了GM-CSF中和抗体在制备抑制鼻咽癌转移的药物中的用途。本专利技术的有益效果在于：本专利技术通过靶向CCL18或其受体抑制EBV+鼻咽癌细胞浸润和转移，本专利技术发现EB病毒感染鼻咽癌细胞，可促进其分泌GM-CSF激活巨噬细胞分化为肿瘤相关巨噬细胞，而肿瘤相关巨噬细胞分泌CCL18使肿瘤细胞发生上皮-间质转换，形成正反馈通路。靶向通路的任一节点，可抑制鼻咽癌细胞的转移。本专利技术提供了靶向CCL18抑制EBV+鼻咽癌细胞的转移的方法及应用。所述CCL18是肿瘤相关巨噬细胞分泌最多的细胞因子，其受体被鉴定为PITPNM3，通过阻断这一通路，可抑制肿瘤细胞的侵袭、迁移和EMT，在人源化荷瘤小鼠中使用，可抑制鼻咽癌的转移。附图说明图1为本专利技术实施例1中肿瘤相关巨噬细胞通过分泌CCL18促进鼻咽癌细胞的侵袭迁移的相关图片；图2为本专利技术实施例2中EBV+鼻咽癌荷瘤小鼠中使用CCL18中和抗体，可明显抑制小鼠肺转移的相关图片；图3为本专利技术实施例3中CCL18的表达与鼻咽癌患者预后差相关，并与EBV感染滴度呈正相关的相关图片；图4为本专利技术实施例4中巨噬细胞通过CCL18诱导鼻咽癌细胞发生EMT的相关图片。具体实施方式为更好的说明本专利技术的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本专利技术作进一步说明。实施例1：巨噬细胞通过CCL18促进鼻咽癌细胞迁移与侵袭通过transwell梯度血清浓度的迁移实验，我们发现在相同的时间内，与被激活的巨噬细胞共培养后的肿瘤细胞以及加入CCL18处理过的肿瘤细胞都更快更多地穿过transwell，获得了更强的迁移能力；而在共培养体系中加入CCL18中和抗体(Cat.No.ab9849,ab9849,abCAM,Cambridge,MA)的肿瘤细胞的迁移能力较弱。这提示巨噬细胞通过分泌CCL18促进了鼻咽癌细胞的迁移能力。侵袭实验得到了同样的结果。如图1所示，图1中A：侵袭、迁移实验的代表图显示肿瘤相关巨噬细胞通过分泌CCL18促进鼻咽癌细胞的侵袭迁移；B.侵袭、迁移实验的统计数据。实施例2：EBV+鼻咽癌荷瘤小鼠中使用CCL18中和抗体，可明显抑制小鼠肺转移。为了更好的模拟人真实的肿瘤微环境，我们构建了人源化荷瘤小鼠模型。与体外实验的发现相一致的是，与注射了EBV(-)细胞的人源化小鼠相比，注射了EBV(+)细胞的人源化小鼠，肺转移也显著增加。通过CCL18中和抗体(Cat.No.ab9849,ab9849,abCAM,Cambridge,MA)治疗或GM-CSF中和抗体(Cat.No.MAB215,R&DSystems,Minneapolis,MN)治疗，抑制了鼻咽癌的肺转移(图2A-C)，如图2所示，图2中A：HE染色(上图)及肺应用人角蛋白抗体表明不同处理的小鼠内人癌细胞转移(下图)。比例尺，50μm；B：肺中转移灶结节数的统计值；C：人HPRTmRNA的表达与荷瘤小鼠肺和肝18SrRNA相比。数据以非人源化小鼠组进行标准化(mean±s.e.m,n＝8每组；**,p<0.01,***,p<0.001,p值以双向S检验得到)。从图2的实验结果表明GM-CSF-CCL18环路可作为一种抑制鼻咽癌转移的治疗靶点。实施例3：鼻咽癌标本巨噬细胞的浸润与病人预后差相关由于既往的报道肿瘤相关巨噬细胞的表型类似M2型巨噬细胞，其表面标记、所分泌的细胞因子谱都与M2型相似。其中，CCL18是肿瘤相关巨噬细胞分泌较多且功能较完善的细胞因子。为了分析鼻咽癌标本中巨噬细胞的浸润与病人的临床病理特征及预后之后的关系，我们在鼻咽癌石蜡切片中用免疫组化检测CCL18的表达。我们将CCL18阳性细胞的多少与鼻咽癌病人的临床病理资料进行分析。CCL18表达丰富与病人的临床分期高、复发转移几率高相关，而与肿瘤大小、病人发病年龄等没有明显相关性。无病生存率的分析显示CCL18高表达的病人复发转移的可能性明显高于CCL18低表达的病人。由于EBV感染是鼻咽癌发生发展的重要影响因素，有研究报道EB病毒的激活状态影响了鼻咽癌的预后，通过比较鼻咽癌病人血清中EBV抗体浓度与切片中CCL18的浸润程度，我们发现EBV抗体浓度与CCL18的浸润呈正相关关系，如图3所示，图3中A.：鼻咽癌切片中CCL18的表达情况；B.：CCL18与预后差相关；C：CCL18的表达与EBV感染呈正相关。实施例4：巨噬细胞通过CCL18诱导鼻咽癌细胞发生EMT为了研究巨噬细胞对肿瘤细胞的作用，我们将未处理及被激活的巨噬细胞分别与鼻咽癌细胞共培养，我们发现与未处理的巨噬细胞共培养的肿瘤细胞形态上没有发现明显改变，而与被激活的巨噬细胞共培养后的肿瘤细胞形态上有所改变，从原来的类圆形的上皮样细胞长成了长梭形的间质样细胞，上皮样标记E-cadherin表达下调，而间质样标记vimentin表达上升，也就是肿瘤细胞发生了上皮-间质转换。而单独在肿瘤细胞培养过程中直接加入CCL18重组蛋白也出现了相似的现象，可以令肿瘤细胞发生EMT。为了进一步阐明是CCL18的作用，我们在共培养体系中加入CCL18中和抗体(Cat.No.ab9849,ab9849,abCAM,Cambridge,MA)，肿瘤细胞并没有发生EMT，而加入同型对照的IgG抗体的一组，细胞则发生了EMT，如图4所示。由此可说明巨噬细胞通过分泌CCL18可以诱导鼻咽癌细胞发生上皮-间质转换。最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本专利技术的技术方案而非对本专利技术保护范围的本文档来自技高网...

【技术保护点】
CCL18或者CCL18受体作为靶点在筛选或制备抑制鼻咽癌转移的药物中的用途。

【技术特征摘要】
1.CCL18或者CCL18受体作为靶点在筛选或制备抑制鼻咽癌转移的药物中的用途。2.CCL18中和抗体在制备抑制鼻咽癌转移的药物中...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏士成，宋世键，黄迪，胡正勇，
申请(专利权)人：中山大学孙逸仙纪念医院，广东实验中学，
类型：发明
国别省市：广东,44