The invention relates to the field of tissue organ regeneration and repair, in particular to a preparation method of tendon repair materials, and provides a new way for repairing tendon defects. Tendon repair material of the invention comprises animal acellular Achilles tendon materials and specific tendon seed cells combined with prepared materials in the elimination of the Achilles tendon and the immunogenicity of the xenogeneic tissue selectively retained all contribute to the tendon regeneration expectations of useful components, and seed cells for exogenous growth in vitro controlled factor induced receptor autophosphorylation of tendon cells, the combination of the two can play a role in the regeneration of tissue engineered tendon, clinical applicability, preferred but not limited to tendon repair.
【技术实现步骤摘要】
一种肌腱修复材料的制备方法
本专利技术涉及组织器官再生与修复领域,尤其涉及一种肌腱修复材料的制备方法。
技术介绍
肌腱是肌肉的延续,主要功能是将肌肉的收缩力传递到骨从而带动关节活动,因此常会承受高强度的机械负荷,而这样的机械负荷常会导致肌腱损伤,但肌腱自身不具备完全再生能力,损伤的肌腱愈合较慢且容易形成瘢痕组织,进而使得肌腱的组织结构和力学性能变差。若不予以及时修复会导致肌腱病的发生,同时可能伴有血管损伤、骨与关节损伤撕裂等,严重者可能给会留下严重的后遗症,对身体以后的健康造成很大的威胁,因而肌腱损伤成为骨科和运动医学中公认的治疗难题。目前,针对肌腱损伤的常规手术处理方式为直接缝合、自体肌腱移植和异体肌腱移植,但直接缝合容易导致肌腱和骨之间的纤维软骨层退化,加速了瘢痕组织的增生,而瘢痕组织限制了肌腱在体内的双向滑动;自体肌腱移植存在自体供区来源有限,供区功能和力学稳定性产生损失,同时增加了新的创伤制约,应用受限;异体肌腱取材方便,来源广泛,但存在不同程度的免疫排斥反应,且修复后的组织和功能特性与正常肌腱无法媲美,也伴随有肌腱粘连、易二次损伤等缺陷。所以,寻找肌腱再生修复新手段具有重要的临床意义。组织工程化肌腱的研究为修复肌腱损伤开辟了一条新途径,但仍面临着两方面挑战,一是如何制备和筛选具有特殊力学强度和性能的修复材料问题,二是种子细胞的来源及如何在体外快速增殖问题。目前,一种新的趋势是采用天然的脱细胞基质材料作为组织修复材料,脱细胞基质具有最接近人体的网架结构、良好的生物相容性及生物力学性能,其表面具备细胞膜受体识别位点,结合特异性的活性因子后能够促进细胞 ...
【技术保护点】
一种肌腱修复材料的制备方法,具体步骤如下:(1)制备脱细胞跟腱:无菌条件下取新鲜的动物跟腱,用手术剪除去跟腱上的脂肪碎片和其他杂质,用PBS缓冲液漂洗血迹等污垢,再用过氧乙酸溶液进行浸泡消毒处理,将处理后的跟腱组织进行冷冻后,再用匀浆机将其粉粹,依次用含胰蛋白酶、EDTA、TBP、核酸酶的PBS缓冲溶液对粉碎后的跟腱材料进行萃取,脱除细胞成分,调节pH至人体体液pH值,并采用PBS缓冲液清洗,经上述处理后的跟腱材料置于PBS缓冲液中进行4℃保存;(2)制备肌腱种子细胞:无菌条件下收集患者自身在清创手术中被清除的残碎肌腱组织,剥离外膜后用Hanks液漂洗血迹等污垢,再用过氧乙酸溶液进行浸泡消毒处理,用手术剪将其剪碎成5‑6mm
【技术特征摘要】
1.一种肌腱修复材料的制备方法,具体步骤如下:(1)制备脱细胞跟腱:无菌条件下取新鲜的动物跟腱,用手术剪除去跟腱上的脂肪碎片和其他杂质,用PBS缓冲液漂洗血迹等污垢,再用过氧乙酸溶液进行浸泡消毒处理,将处理后的跟腱组织进行冷冻后,再用匀浆机将其粉粹,依次用含胰蛋白酶、EDTA、TBP、核酸酶的PBS缓冲溶液对粉碎后的跟腱材料进行萃取,脱除细胞成分,调节pH至人体体液pH值,并采用PBS缓冲液清洗,经上述处理后的跟腱材料置于PBS缓冲液中进行4℃保存;(2)制备肌腱种子细胞:无菌条件下收集患者自身在清创手术中被清除的残碎肌腱组织,剥离外膜后用Hanks液漂洗血迹等污垢,再用过氧乙酸溶液进行浸泡消毒处理,用手术剪将其剪碎成5-6mm3大小的组织块,用胰蛋白酶及胶原酶37℃消化处理,过滤后离心,将组织块均匀悬置于含血小板血浆的DMEM/F12培养液中进行低氧培养,定期更换培养液,当融合成单层细胞后进行传代,将原代细胞消化后置换新的培养液,待80%细胞融合后进行细胞计数,以1×106/ml的细胞浓度接种于培养瓶中进行低氧传代培养;(3)体外构建组织工程肌腱修复材料:将步骤(1)制备的去细胞异种跟腱材料充分浸入到步骤(2)培养扩增的自体肌腱细胞悬液中,置于37℃培养箱中进行低氧培养、融合,然后在含有外源性生长因子的诱导液中进行诱导培养,定期更换一次复合诱导液,经过数天完成诱导过程,即为可用于移植修复肌腱损伤的肌腱修复材料。2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)所述动物指脊椎动物,鉴于低排斥优选的是哺乳动物,鉴于可用性更优选的是来自哺乳动物的家畜或人,鉴于稳定的可用性,来自猪和人的肌腱组织是优选的。3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)所述的冷...
【专利技术属性】
技术研发人员:纪萍,姜红,任孝敏,
申请(专利权)人:山东隽秀生物科技股份有限公司,
类型:发明
国别省市:山东,37
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