检测尿液中HIV抗体的试纸条、检测线包被液及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种检测尿液中HIV抗体的试纸条、检测线包被液及其制备方法，所述检测线包被液包括HIV重组抗原、pH为7～8、1‑50mM的Tris‑HCl缓冲液、S9和脲。本发明专利技术的用于检测尿液中HIV抗体的试纸条的检测线包被液通过在gp160抗原溶解试剂中添加表面活性剂助溶，并在包被缓冲液中添加S9和脲，解决了gp160溶解性差，难以包被到硝酸纤维素膜上，也难以标记至胶体金上，发生金颗粒的沉淀和死金的缺陷；本发明专利技术的检测尿液中HIV抗体的试纸条高灵敏度的尿检保证了数据的真实可靠性，可用于艾滋病大规模的初筛。

【技术实现步骤摘要】
检测尿液中HIV抗体的试纸条、检测线包被液及其制备方法
本专利技术属于医药
，更具体地，本专利技术涉及一种检测尿液中HIV抗体的试纸条、包被缓冲液、检测线包被液及其制备方法。
技术介绍
人类免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiencyVirus，HIV)是一种感染人类免疫系统细胞的病毒，通过破坏人体免疫细胞，导致免疫系统失去抵抗力，而导致各种疾病。国家疾控中心统计，自2007年起，艾滋病成为中国造成死亡人数最高的传染病并延续至今。值得注意的是，目前中国仍有32.1％感染者未被发现。确定一个人是否感染艾滋病毒的唯一办法是进行艾滋病毒检测。数据显示，2008-2015年间中国HIV检测量快速上升。据统计，仅2015年，全国约有超过1.43亿人接受了HIV检测，占总人口的10％。如此大规模的HIV检测对人力、物力、财力、时间都是一个严峻的挑战，特别是随着艾滋的全球蔓延、医护人员被感染的风险事例对HIV检测技术的开发和创新提出了“精准、快速、无创”的要求。目前有关于艾滋诊断程序是初筛为阳性后再进行westernblot确诊。初筛的主要检测方法有两种：1、血液检测：主要方法有免疫层析法(胶体金法或胶乳法)、化学发光法、时间分辨荧光法，即采集患者血样，用于体外定性或定量检测人血清、血浆和全血中的人类免疫缺陷病毒(HIV-1/HIV-2)抗体。这些方法主要是通过检测可疑者血液的HIV抗体的有无判断是否感染。但是血液检测的方法是一种创伤性血液检测，而血液传播也是艾滋传播的3大途径之一，其中，化学发光和时间分辨荧光需要大型设备，只有县级及以上的医院配备。其次，这2种方法耗时长，需要专门的操作人员和培训。三者的共同缺点是：A、医护人员在抽血过程中被戳伤而感染的风险；B、抽血后的各种医疗器械垃圾及处理(如：针头、针灸针、牙科器械、美容器械等)存在感染的风险；C、采集的血样需要离心，难以进行患者自我检测从而保证患者的隐私。2、口腔粘膜渗出液检测：主要方法有免疫层析法(胶体金法或胶乳法)。即用口腔拭子在牙龈线不断擦拭后的渗出液，检测人口腔粘膜渗出液中的HIV-1/2型人类免疫缺陷病毒抗体。该法是一种微创检测，相比血液传播的风险小很多，但仍存在传播的风险如艾滋接触人群的高危人群。尿液中存在HIV特异性的抗体已经被大量研究和证实。无/极弱传染性的尿液检测方法CFDA批准的目前只有酶联免疫法，耗时长(3h)，且只能定性检测。同样可进行定性检测的胶体金法由于其操作简便、耗时短而被亲睐和考虑的首选，但由于尿液抗体含量很低存在灵敏度的问题，故现有市场还未发现同类产品，此外，有报道，尿液检测相比于血液，唾液存在较高的假阳性问题。gp160是HIV-1的表面包膜糖蛋白，由gp120和gp41以非共价键连接组成，常常以多聚体(多以三聚体)形式存在。HIV感染中最早出现的抗体是gp160和P24，然后是gp120，之后是gp41。gp160经宿主细胞的蛋白酶修饰和加工被剪切成结构成熟的HIV囊膜上的外膜蛋白gp120和跨膜蛋白gp41。在制备用于检测尿液中HIV抗体的试纸条的过程中，包被缓冲液用于将HIV重组抗原包被在硝酸纤维素膜上，提高试纸条的稳定性和分辨率。然而现有的包被缓冲液不能较好地分散HIV重组抗原gp160，不能够使其以最低的能量状态粘附在硝酸纤维素膜上。
技术实现思路
基于此，为了克服上述现有技术的缺陷，本专利技术提供了一种检测尿液中HIV抗体的试纸条、包被缓冲液、检测线包被液及其制备方法。为了实现上述专利技术目的，本专利技术采取了以下技术方案：一种用于检测尿液中HIV抗体的试纸条的包被缓冲液，所述包被缓冲液包括pH为7～8、1-50mM的Tris-HCl缓冲液、S9和脲；其中，相对于每100mL的Tris-HCl缓冲液，所述S9的添加量为0.01～1g，所述脲的添加量为2～10g。在其中一些实施例中，所述Tris-HCl缓冲液为pH为7.4、20mM的Tris-HCl缓冲液。在其中一些实施例中，相对于每100mL的Tris-HCl缓冲液，所述S9的添加量为0.1g，所述脲的添加量为5g。本专利技术还提供了一种用于检测尿液中HIV抗体的试纸条的检测线包被液，包括HIV重组抗原和上述用于检测尿液中HIV抗体的试纸条的包被缓冲液，所述HIV重组抗原包括gp160。在其中一些实施例中，所述HIV重组抗原还包括gp41。在其中一些实施例中，所述gp160的浓度为0.2-0.8mg/ml，所述gp41的浓度为0.5-2.0mg/ml。在其中一些实施例中，所述gp160和gp41的质量比为1：0.5。本专利技术还提供了一种用于检测尿液中HIV抗体的试纸条，所述试纸条包括底板，以及设置于底板上的样品垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述硝酸纤维素膜的两端分别搭接所述样品垫和吸水纸，所述样品垫的近硝酸纤维素膜端喷涂有胶体金标记的gp160抗原和胶体金标记的鼠抗人IgG抗体，所述硝酸纤维素膜上设有由上述检测线包被液包被的检测线、以及包被羊抗鼠IgG抗体的控制线。在其中一些实施例中，所述胶体金标记的gp160抗原浓度为1.5～3.5ug/ml；所述胶体金标记的鼠抗人IgG抗体的浓度为4.5～6.5ug/ml。在其中一些实施例中，所述样品垫的近硝酸纤维素膜端还喷涂有胶体金标记的gp36抗原，所述硝酸纤维素膜上还设有由HIV重组抗原gp36包被的另一条检测线。在其中一些实施例中，所述胶体金标记的gp36抗原的浓度为4.5～6.5ug/ml；所述另一条检测线上包被的HIV重组抗原gp36的浓度为0.5～1.0mg/ml。在其中一些实施例中，所述羊抗鼠IgG抗体的浓度为0.8-1.0mg/ml，所述羊抗鼠IgG抗体的用量为0.09-0.22ul/mm。在其中一些实施例中，所述胶体金标记gp160抗原的制备方法包括：利用包被缓冲液将gp160抗原溶解，其后加入胶体金颗粒，形成所述胶体金标记gp160抗原；所述包被缓冲液包括pH为7-8、1-50mM的Tris-HCl缓冲液、S9和脲；其中，相对于每100mL的Tris-HCl缓冲液，所述S9的添加量为0.01～1g，所述脲的添加量为2～10g。在其中一些实施例中，所述样品垫采用样品垫处理液进行处理，所述样品垫处理液包括pH为8～11的缓冲液、水性流变助剂和封闭剂，其中，相对于每100mL的所述缓冲液，所述水性流变助剂的添加量为0.05～10g，所述封闭剂的添加量为0.05～10g。专利技术人经大量的试验表明，缓冲液的pH为8～11时，可以消除假阳并保持强、中阳样本的检出，而当缓冲液的pH为酸性或中性时，则会出现金颗粒变色、无法流动或假阳消除效果差的问题。水性流变助剂的加入可减慢尿液中水分子的流动，为金颗粒的反应提供一个液体环境，同时在喷涂的金颗粒的过程中提供一个支架，稳定地固定生物原材料不发生漂移均匀分布，保证了生物原材料分布的均一性。在其中一些实施例中，所述缓冲液为10～200mM的Tris-HCL缓冲液。在其中一些实施例中，所述样品垫处理液还包括0.01～1M的Na2CO3或K2CO3。在其中一些实施例中，所述样品垫处理液中还包括S9；相对于每100mL的所述缓冲液，所述S9的添加量为0.01～1g。在其中一些实施例中，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测尿液中HIV抗体的试纸条的包被缓冲液，其特征在于，所述包被缓冲液包括pH为7～8、1‑50mM的Tris‑HCl缓冲液、S9和脲；其中，相对于每100mL的Tris‑HCl缓冲液，所述S9的添加量为0.01～1g，所述脲的添加量为2～10g。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测尿液中HIV抗体的试纸条的包被缓冲液，其特征在于，所述包被缓冲液包括pH为7～8、1-50mM的Tris-HCl缓冲液、S9和脲；其中，相对于每100mL的Tris-HCl缓冲液，所述S9的添加量为0.01～1g，所述脲的添加量为2～10g。2.根据权利要求1所述的用于检测尿液中HIV抗体的试纸条的包被缓冲液，其特征在于，所述Tris-HCl缓冲液为pH为7.4、20mM的Tris-HCl缓冲液。3.根据权利要求2所述的用于检测尿液中HIV抗体的试纸条的包被缓冲液，其特征在于，相对于每100mL的Tris-HCl缓冲液，所述S9的添加量为0.1g，所述脲的添加量为5g。4.一种用于检测尿液中HIV抗体的试纸条的检测线包被液，其特征在于，包括HIV重组抗原和权利要求1～3任一项所述的用于检测尿液中HIV抗体的试纸条的包被缓冲液，所述HIV重组抗原包括gp160。5.根据权利要求4所述的用于检测尿液中HIV抗体的试纸条的检测线包被液，其特征在于，所述HIV重组抗原还包括gp41。6.根据权利要求5所述的用于检测尿液中HIV抗体的试纸条的检测线包被液，其特征在于，所述gp160的浓度为0.2-0.8mg/ml，所述gp41的浓度为0.5-2.0mg/ml。7.根据权利要求5所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：张秋平，陈立，李高辉，
申请(专利权)人：广州万孚生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44