用于检测尿液中HIV抗体的样品垫、样品垫处理液及试纸条制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测尿液中HIV抗体的样品垫、样品垫处理液及试纸条，所述样品垫处理液包括pH为8～11的缓冲液、水性流变助剂和封闭剂，其中，相对于每100mL的所述缓冲液，所述水性流变助剂的添加量为0.05～10g，所述封闭剂的添加量为0.05～10g。本发明专利技术的用于检测尿液中HIV抗体的试纸条的样品垫处理液通过选择合适pH的缓冲液以及合适浓度的水性流变助剂和封闭剂，可消除尿液对免疫金稳定性的影响，提高免疫金的溶解释放速度及膜面层析形态。

【技术实现步骤摘要】
用于检测尿液中HIV抗体的样品垫、样品垫处理液及试纸条
本专利技术属于医药
，更具体地，本专利技术涉及一种用于检测尿液中HIV抗体的样品垫、样品垫处理液及试纸条。
技术介绍
人类免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiencyVirus，HIV)是一种感染人类免疫系统细胞的病毒，通过破坏人体免疫细胞，导致免疫系统失去抵抗力，而导致各种疾病。国家疾控中心统计，自2007年起，艾滋病成为中国造成死亡人数最高的传染病并延续至今。值得注意的是，目前中国仍有32.1％感染者未被发现。确定一个人是否感染艾滋病毒的唯一办法是进行艾滋病毒检测。数据显示，2008-2015年间中国HIV检测量快速上升。据统计，仅2015年，全国约有超过1.43亿人接受了HIV检测，占总人口的10％。如此大规模的HIV检测对人力、物力、财力、时间都是一个严峻的挑战，特别是随着艾滋的全球蔓延、医护人员被感染的风险事例对HIV检测技术的开发和创新提出了“精准、快速、无创”的要求。目前有关于艾滋诊断程序是初筛为阳性后再进行westernblot确诊。初筛的主要检测方法有两种：1、血液检测：主要方法有免疫层析法(胶体金法或胶乳法)、化学发光法、时间分辨荧光法，即采集患者血样，用于体外定性或定量检测人血清、血浆和全血中的人类免疫缺陷病毒(HIV-1/HIV-2)抗体。这些方法主要是通过检测可疑者血液的HIV抗体的有无判断是否感染。但是血液检测的方法是一种创伤性血液检测，而血液传播也是艾滋传播的3大途径之一，其中，化学发光和时间分辨荧光需要大型设备，只有县级及以上的医院配备。其次，这2种方法耗时长，需要专门的操作人员和培训。三者的共同缺点是：A、医护人员在抽血过程中被戳伤而感染的风险；B、抽血后的各种医疗器械垃圾及处理(如：针头、针灸针、牙科器械、美容器械等)存在感染的风险；C、采集的血样需要离心，难以进行患者自我检测从而保证患者的隐私。2、口腔粘膜渗出液检测：主要方法有免疫层析法(胶体金法或胶乳法)。即用口腔拭子在牙龈线不断擦拭后的渗出液，检测人口腔粘膜渗出液中的HIV-1/2型人类免疫缺陷病毒抗体。该法是一种微创检测，相比血液传播的风险小很多，但仍存在传播的风险如艾滋接触人群的高危人群。尿液中存在HIV特异性的抗体已经被大量研究和证实。无/极弱传染性的尿液检测方法CFDA批准的目前只有酶联免疫法，但耗时长(3h)，且只能定性检测。同样可进行定性检测的胶体金法由于其操作简便、耗时短而被亲睐和考虑的首选，但由于尿液抗体含量很低存在灵敏度的问题，故现有市场还未发现检测尿液中HIV抗体的试纸条的同类产品，此外，有报道，尿液检测相比于血液，唾液存在较高的假阳性问题。样品垫是检测尿液中HIV抗体的试纸条的一个重要组成部分，样品垫在使用前需要通过样品垫处理液进行处理。由于检测样本及项目的不同，使用现有的样品垫处理液应用于检测尿液中HIV抗体的试纸条时，均存在较大的问题，例如：HIV血液检测试纸条的样品垫处理液、HCV和HBV试纸条的样品垫处理液对于HIV阴性和阳性样本均无法实现显色，而HIV唾液检测试纸条的样品垫处理液对于阴性和阳性样本显色接近，故阴阳样本区分度很差。因此，有必要开发一种可用于检测尿液中HIV抗体的试纸条的样品垫处理液。
技术实现思路
一方面，基于此，为了克服上述现有技术的缺陷，本专利技术提供了一种用于检测尿液中HIV抗体的试纸条的样品垫处理液。为了实现上述专利技术目的，本专利技术采取了以下技术方案：一种用于检测尿液中HIV抗体的试纸条的样品垫处理液，所述样品垫处理液包括pH为8～11的缓冲液、水性流变助剂和封闭剂，其中，相对于每100mL的所述缓冲液，所述水性流变助剂的添加量为0.05～10g，所述封闭剂的添加量为0.05～10g。专利技术人经大量的试验表明，缓冲液的pH为8～11时，可以消除假阳并保持强、中阳样本的检出，而当缓冲液的pH为酸性或中性时，则会出现金颗粒变色、无法流动或假阳消除效果差的问题。水性流变助剂的加入可减慢尿液中水分子的流动，为金颗粒的反应提供一个液体环境，同时在喷涂的金颗粒的过程中提供一个支架，稳定地固定生物原材料不发生漂移均匀分布，保证了生物原材料分布的均一性。在其中一些实施例中，所述缓冲液为10～200mM的Tris-HCL缓冲液。在其中一些实施例中，所述样品垫处理液还包括0.01～1M的Na2CO3或K2CO3。在其中一些实施例中，所述样品垫处理液中还包括S9。在其中一些实施例中，相对于每100mL的所述缓冲液，所述S9的添加量为0.01～1g。在其中一些实施例中，所述水性流变助剂为羟丙基甲基纤维素、PAA、PEO中的一种或几种。在其中一些实施例中，所述水性流变助剂为羟丙基甲基纤维素和PAA的混合物，所述羟丙基甲基纤维素占所述混合物总重量的45～70％。在其中一些实施例中，所述封闭剂为兔血清。另一方面，本专利技术还提供了一种样品垫，所述样品垫采用上述用于检测尿液中HIV抗体的试纸条的样品垫处理液进行处理。再一方面，本专利技术还提供了一种检测尿液中HIV抗体的试纸条，所述试纸条包括底板，以及设置于底板上的上述样品垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述硝酸纤维素膜的两端分别搭接有样品垫和吸水纸，所述样品垫的近硝酸纤维素膜端喷涂有胶体金标记的HIV重组抗原和胶体金标记的鼠抗人IgG抗体，所述硝酸纤维素膜上设有包被HIV重组抗原的检测线、以及包被羊抗鼠IgG抗体的控制线。在其中一些实施例中，所述胶体金标记的HIV重组抗原包括重组gp160；所述检测线上包被的HIV重组抗原包括重组gp41和gp160。在其中一些实施例中，所述胶体金标记的HIV重组抗原还包括重组gp36，所述检测线上包被的HIV重组抗原还包括重组gp36。在其中一些实施例中，所述胶体金标记重组gp160抗原的浓度为1.5～3.5ug/ml；所述胶体金标记鼠抗人IgG的抗体的浓度为4.5～6.5ug/ml；所述胶体金标记重组gp36抗原的浓度为4.5～6.5ug/ml；胶体金标记原料的用量为2～3.5ul/cm；所述HIV重组抗原gp41的包被浓度为0.5-2.0mg/ml，所述HIV重组抗原gp160的包被浓度为0.2-0.8mg/ml，所述HIV重组抗原gp36的包被浓度为0.5-1.0mg/ml；所述HIV重组抗原的用量均为0.12-0.15ul/mm，所述羊抗鼠IgG抗体的浓度为0.8-1.0mg/ml，所述羊抗鼠IgG抗体的用量为0.09-0.22ul/mm。本专利技术还提供了一种检测尿液中HIV抗体的试纸条的制备方法，包括如下步骤：1)、配制样品垫处理液，涂布于玻璃纤维素膜上，涂布浓度为40ul/cm2，烘干处理制得样品垫；2)、将检测HIV的抗体或抗原与胶体金颗粒结合形成胶体金标记检测HIV的抗体或抗原，用喷金仪均匀喷涂于样品垫上；晾干；3)、将HIV重组抗原用HIV包被稀释液进行稀释至工作浓度，划线于硝酸纤维素膜上形成检测线，将羊抗鼠抗体稀释至工作浓度，划线于硝酸纤维素膜上形成质控线，烘干处理；4)、将样品垫、硝酸纤维素膜和吸水纸搭接在底板上，即得。为了解决尿液检测HIV的灵敏度和特异性的问题，本专利技术的专利技术人实施了多种研究，经确定运用固相免疫层析原理，采用前期本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测尿液中HIV抗体的试纸条的样品垫处理液，其特征在于，所述样品垫处理液包括pH为8～11的缓冲液、水性流变助剂和封闭剂，其中，相对于每100mL的所述缓冲液，所述水性流变助剂的添加量为0.05～10g，所述封闭剂的添加量为0.05～10g。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测尿液中HIV抗体的试纸条的样品垫处理液，其特征在于，所述样品垫处理液包括pH为8～11的缓冲液、水性流变助剂和封闭剂，其中，相对于每100mL的所述缓冲液，所述水性流变助剂的添加量为0.05～10g，所述封闭剂的添加量为0.05～10g。2.根据权利要求1所述的用于检测尿液中HIV抗体的试纸条的样品垫处理液，其特征在于，所述缓冲液为10～200mM的Tris-HCL缓冲液。3.根据权利要求1所述的用于检测尿液中HIV抗体的试纸条的样品垫处理液，其特征在于，所述样品垫处理液还包括0.01～1M的Na2CO3或K2CO3。4.根据权利要求1～3任一项所述的用于检测尿液中HIV抗体的试纸条的样品垫处理液，其特征在于，所述样品垫处理液中还包括S9。5.根据权利要求4所述的用于检测尿液中HIV抗体的试纸条的样品垫处理液，其特征在于，相对于每100mL的所述缓冲液，所述S9的添加量为0.01～1g。6.根据权利要求1或2所述的用于检测尿液中HIV抗体的试纸条...

【专利技术属性】
技术研发人员：张秋平，陈立，李高辉，
申请(专利权)人：广州万孚生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44