一种免疫原和抗体的复合疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种免疫原和抗体的复合疫苗及其制备方法。该复合疫苗由中心的免疫原、中间包覆免疫原的油相和外部包覆油相的抗体组成，呈水包油包水(W/O/W)型乳液体系。该复合疫苗注射后数小时内，抗体先期且快速释放被机体吸收入血发挥免疫作用；免疫原滞后释放并在抗体免疫效力失能前的4～6天诱导产生有效的主动免疫效力。该复合疫苗具有实现了特异性被动免疫与特异性主动免疫的无缝连接，相加互补、起效快的优势。

A compound vaccine of immunogen and antibody and its preparation method

The invention discloses a compound vaccine of immunogen and antibody and a preparation method of the vaccine. The compound vaccine is composed of the center immunogen, the oil phase covered with the immunogen and the antibody coated with oil outside, and it is an oil in water (W/O/W) emulsion system. Within a few hours after the injection of the compound vaccine, the antibody was released in advance and released rapidly, and was absorbed by the body into the blood to play the role of immunity. The immunogen delayed release and induced effective active immunity on the 4~6 day before the antibody immune failure. The compound vaccine has the advantages of realizing the seamless connection between specific passive immunity and specific active immunity, complementing complementary and fast acting.

【技术实现步骤摘要】
一种免疫原和抗体的复合疫苗及其制备方法
本专利技术属于疫苗
，具体涉及一种免疫原和抗体的复合疫苗及其制备方法。
技术介绍
疫苗和抗体归属于药物中的生物制品类，是防控细菌、病毒等病原引起的疫病及生物毒素(如蛇毒)所致疾病的特异药品。英国詹呐(EdwardJenner)于1798年专利技术了预防人类天花的牛痘疫苗。180年后，即1979年，人类应用该疫苗成功消灭了对其危害极大的天花病。1881年，巴斯德(LouisPasteur)首先发现灭活的禽霍乱巴氏杆菌的免疫效力，同时又研制出炭疽、狂犬病的人工致弱的活疫苗。之后，各种疫苗应运而生。除了广泛知晓的针对病原微生物的疫苗和类毒素外，还有针对蛇等分泌的生物毒素的疫苗、针对过敏原的抗过敏疫苗、针对生物激素研制的去势、避孕及促生长的疫苗。近年来，抗肿瘤的疫苗已是研究热点。疫苗中的有效成分称为免疫原(免疫学称为抗原)。免疫原在递呈细胞的帮助下诱导T、B淋巴细胞产生特异的主动免疫应答，或产生细胞因子，如白介素或干扰素，或产生如细胞毒性T淋巴细胞这样的特异免疫细胞，或分化为浆细胞分泌抗体，发挥特异免疫效力。疫苗中的免疫原可区分为活的和死的两大类。活的免疫原是指能够繁殖的细菌或能够复制的病毒，但必须是对动物无毒力或低毒力，其诱导动物的主动免疫应答所需时间短，通常为数天。活的免疫原存在潜在的生物安全性问题，原因是其需要繁殖或复制才能诱导出免疫力。而在其繁殖和复制时可出现毒力返强引发疫病灾难。因此，危害重大的病原，如口蹄疫病毒、高致病力禽流感病毒等不能制成活疫苗。死的免疫原是无繁殖或复制能力的免疫原的总称。传统的死免疫原是用化学试剂和物理方法杀灭病原制备的。由于化学试剂如甲醛溶液不能灭活病毒核酸，而存生物安全隐患，之后用超声波、高压等物理方法及用酶等生物化学方法破碎裂解病原，提取其有效组分制成亚单位疫苗。1980年代后，基因重组技术及利用原核或真核生物表达技术，亚单位疫苗有了新的制备方法。近十年来，利用基因重组技术还创新出生产空壳病毒制作成有效的疫苗。转基因技术将免疫原基因在植物中表达也可生产出亚单位疫苗。随着技术革新，化学合成成本下降，合成肽或多糖类免疫原也已经商品化。死的免疫原在佐剂，尤其是油乳佐剂的帮助下，在动物体内诱导出坚强且长期的免疫效力，维持时间6个月以上，且不存在生物完全性问题，在动物疫苗产业中占有绝对主体地位。所有的疫苗，其免疫原无论是活的还是死的，接种后均需要经过一段时间才能诱导动物产生主动免疫效力。这种免疫效力自疫苗接种后，从无到有，从无效、低效到有效，再到高效，最后消失，呈现出免疫保护的有限性。疫苗接种至动物机体产生出有效免疫力所需要的时间称为疫苗诱导期。此时，动物尽管接种了疫苗，但如遇病原袭来仍会发病。由此，疫苗的诱导期被称为空白期或窗口期。活的免疫原的免疫空白期较短，一般为数天。而死的免疫原的免疫空白期则较长，一般为10～14天，个别的，如禽流感灭活疫苗，超过20余天。抗体是免疫原诱导生物机体针对该免疫原产生的免疫球蛋白。针对病原或生物毒素的抗体具有紧急治疗和短期预防效力。贝林(E.AdolfvonBehring)发现了白喉杆菌的抗体，并藉此获得了生物与医学领域第一块诺贝尔奖。血清、黏液、卵生动物的卵黄和哺乳动物的乳汁中均有抗体存在。依据其来源区分为血清抗体、蛋(卵)黄抗体、乳源抗体。现代生物技术还创新出了单克隆抗体(Milsten，1982)、基因工程抗体等。特异抗体对雏禽疫病防控很有效。利用产蛋鸡作为生物反应器生产特异蛋黄抗体，采取提取技术制造出不含脂类的精制蛋黄抗体注射液。《精制鸡传染性法氏囊病蛋黄抗体》于2000年时获得我国政府批准商品化生产，开启了蛋黄抗体类药品新领域。抗小鹅瘟、鸭肝炎等疫病精制蛋黄抗体相继实现商品化，不仅有注射针剂，还创新了冻干粉针剂。抗体类药品行肌内、皮下或静脉途径注射给药。肌内或皮下注射后可被迅速吸收入血，扩散到全身发挥免疫效力。由于吸收的抗体不属于自己产生，而是被动获得，在体内会被代谢降解。机体被动获得的抗体，其免疫效力维持时间较短。人类的IgG型中的IgG1、IgG2和IgG4亚型半衰期最长，为23天，而IgG3仅为8天，IgM和IgA型抗体的半衰期分别为5.1天和5.8天。因此，被动抗体仅用于紧急防治。在医学上，如狂犬病、破伤风等病预防，视伤口情况将抗体与疫苗联用，依靠抗体快速吸收入血即刻发挥免疫效力，待其效力下降时疫苗诱导出主动免疫。抗体与疫苗的联用，抗体弥补疫苗的免疫空白期。抗体和疫苗作为防治同一病的两种不同的药物，医学实践中不可以混合也不可以在同一局部进行注射，而是采取远离部位的分部位注射，如抗体注射在左臂，疫苗接种到右臂上。但是，医学上对于抗体与疫苗联用的有效技术难以在动物养殖实践中应用，动物数量巨大，且保定困难，两针药在不同部位注射费事费时，对动物应急大，影响其生长，甚至引发其他疾病问题。2000年左右，欧洲国家创新出活的免疫原和抗体反应生成抗原抗体复合物疫苗(Immunocomplexes，IC)。鸡传染性法氏囊病IC疫苗是世界上第一个商品化IC疫苗，但迄今未见第二个IC疫苗商品化生产。鸡传染性法氏囊病IC疫苗需采取自动化机器给鸡胚18胚龄时行胚内注射接种，效果很好。IC疫苗必须是活的病毒为免疫原，与其特异抗体反应的比例要求很苛刻，否则无效。这可能是IC疫苗只有第一而无第二的重要因素。文献记载，1950年代，我国生产的猪瘟结晶紫灭活疫苗因病毒灭活不彻底，在疫苗使用时加入猪瘟病毒的高免血清混合注射接种也有效果。但是，因存在严重生物安全隐患，该疫苗生产批文被我国政府取缔。鸡、鸭、鹅等肉禽，生长期短，规模养殖特别易发疫病。尽管我国批准了禽类疫病防控的疫苗生产，但由于幼小禽类免疫应答反应较差，疫苗即便出壳即接种但也难控疫病发生。死的免疫原免疫诱导期内长，禽类在疫苗免疫诱导期内发病的现象时有发生。抗生素或抗病毒药物就成为疫苗诱导期间预防禽类疫病的重要武器。随着耐药性问题愈来愈严重，肉、蛋中的抗生素、抗病毒药物残留日益被世人重视，上升成为食品安全民生问题，急需解决。针对目前免疫原免疫诱导期内长，禽类在疫苗免疫诱导期内发病的现象时有发生的问题，采用即注射疫苗又注射抗体双重免疫即可解决上述问题。但仍存一些技术问题需要解决，技术问题如下：1.抗体为水溶性蛋白，注射后迅速被吸收入血，形成免疫效力，但效力维持时间短，长者十余天。疫苗注射接种后诱导动物自身产生出坚强而长时间的免疫效力，但其存在免疫空白期问题，长者十余天，甚至二十余天。出壳或出生后三周龄内，畜禽极其容易感染疫病，依靠常规疫苗预防时有疫病发生。免疫原和其抗体优点、缺点均非常突出。如何将免疫原和其抗体的优点相加，优势互补，同时避开两者的缺点，是本专利技术人所要解决的技术问题，为此，本专利技术提供一种免疫原和抗体的复合疫苗，并实现核心技术目标。2.免疫原和其抗体是一对矛盾体，两者相遇即会发生反应，生成抗原抗体复合物，各自的免疫效力均会下降，甚至消失。因此，本专利技术的一种免疫原和抗体的复合疫苗中免疫原和其抗体同时存在，尽显优点而避缺陷，其核心技术是将两者隔离，程序释放，即抗体先释放且快速，免疫原后释放且缓慢，实现抗体对免疫原诱导主动免疫不会造成不良影响，抗体的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫原和抗体的复合疫苗，由中心层的免疫原相、中间层的包覆免疫原相的油相和外周层的包覆油相的抗体相组成,其特征在于：1)所述中心层的免疫原相，主要由免疫原溶液占96～99％v/v和乳化剂占1.0～4.0％v/v混合制成；2)所述中间层的油相，主要由矿物质油或植物油占92～96％v/v、乳化剂占4.0～8.0％v/v和稳定剂占0.5～4％w/v配制而成，或所述油相为矿物油佐剂MONTANIDE

【技术特征摘要】
1.一种免疫原和抗体的复合疫苗，由中心层的免疫原相、中间层的包覆免疫原相的油相和外周层的包覆油相的抗体相组成,其特征在于：1)所述中心层的免疫原相，主要由免疫原溶液占96～99％v/v和乳化剂占1.0～4.0％v/v混合制成；2)所述中间层的油相，主要由矿物质油或植物油占92～96％v/v、乳化剂占4.0～8.0％v/v和稳定剂占0.5～4％w/v配制而成，或所述油相为矿物油佐剂MONTANIDETMISA71VG。3)所述外周层的抗体相，主要由抗体溶液占96.2～99.7％v/v和乳化剂占0.3～3.8％v/v配制而成；4)所述复合疫苗为水包油包水型乳液体系，其中，免疫原相占比为15-32％v/v，油相占比为40-72％v/v和抗体相占比为5.0-39％。2.如权利要求1所述的复合疫苗，所述的免疫原选自以下任何一种来源的免疫原:1)采用化学试剂或温度等物理方法灭活的细菌、枝原体、衣原体、立克次氏体、病毒微生物而获得的免疫原；2)采用化学试剂或温度等物理方法将细菌、真菌等微生物代谢产物、毒素及蛇等生物毒素而获得的类毒素免疫原；3)采取超声波、高压、冻融等技术将细菌、病毒等微生物破碎裂解获得的亚单位免疫原；4)采取基因重组并在原核或真核细胞表达制备的蛋白质、肽、脂多糖、核酸及空衣壳病毒或假病毒获得的免疫原；5)采取化学合成法制备的肽类、寡糖获得的免疫原。3.如权利要求1所述的复合疫苗，所述抗体选自以下任何一种来源的抗体：1)用动物或实验动物制备的血清抗体；2)用鸡、鸭、鹅等禽类制备的蛋(卵)黄抗体；3)用奶牛和奶山羊的动物乳制备的乳源抗体；4)用动物血清、蛋(卵)黄抗体、乳源抗体提取纯化获得的免疫球蛋白；5)用杂交瘤技术制备的单克隆抗体；6)用基因重组及原核、真核细胞表达技术制备的单链抗体或嵌合抗体。4.如权利要求1所述的复合疫苗，所述外周层的抗体或免疫球蛋白和中心层的免疫原被中间层的油相隔离，使所述外周层的抗体或免疫球蛋白与中心层的免疫原不相遇和不发生抗原抗体反应。5.如权利要求1所述的复合疫苗，皮下或肌内注射接种后，所含有的抗体迅速释放，30min～2h内被吸收入血发挥免疫效力，诱导期后免疫原诱导机体产生有效的主动免疫效力，所述抗体免疫效力的维持时间与免疫原的诱导期相同或相近。6.如权利要求1所述的复合疫苗，所含有的免疫原能在所含有的抗体的免疫效力下降...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄伟，黎容红，洪晓萍，
申请(专利权)人：重庆更尚科技有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆,50