新型人死亡抵抗蛋白，其编码序列及用途制造技术

本发明专利技术提供了一种新型人死亡抵抗蛋白（ｄｅａｔｈ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔｐｒｏｔｅｉｎ，ＤＲＰ）。本发明专利技术还提供编码此蛋白分子的多核苷酸和经重组技术产生这种蛋白分子的方法。本发明专利技术还公开了这种新型死亡抵抗蛋白分子及其多核苷酸编码序列的用途。本发明专利技术证实了ＤＲＰ的高表达具有抵抗ＴＮＦ－α诱导细胞死亡的功能。本发明专利技术还公开了抗此蛋白分子用于疾病的诊断及治疗的策略，特别是可用于恶性肿瘤的诊断和治疗。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物技术和医学领域，具体地说，本专利技术涉及新的编码新型人死亡抵抗蛋白DRP多肽的多核苷酸，以及此多核苷酸编码的多肽。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的用途和制备。本专利技术的DRP多肽是一种新的与细胞死亡或肿瘤生成密切相关的细胞内分子，DRP的高表达具有抵抗TNF-α诱导细胞死亡的功能。
技术介绍
肿瘤坏死因子α(TNF-α)是由多种细胞分泌的炎性细胞因子，能够诱导多种恶性肿瘤细胞死亡，包括凋亡和坏死。但是正常细胞和某些肿瘤细胞系并不受TNF的影响。这种抵抗作用依赖于某些TNF诱导的保护蛋白的表达。TNF诱导细胞凋亡的作用是通过许多信号分子共同参与完成的一个网络工程，其中TRAFs(TNF receptor-associated factor)家族蛋白，尤其是TRAF2，是这一信号调节网络的中心环节。TNFR在与TNF结合后发生聚集，并募集TRAF2直接与TNFR2胞内段结合，或通过结合其他接头分子与TNFR1间接相连，TRAF2主要通过激活NIK和JNK/SAPK两个独立的信号转导途径对细胞发挥凋亡调节作用，具有凋亡保护功能。L929细胞是小鼠成纤维细胞，一般被用来作为检测TNF细胞毒性的细胞模型。TNF既可以诱导L929细胞发生坏死，也可以诱导其发生凋亡。以往的研究发现，介导细胞发生坏死和凋亡的信号转导途径有某些不同。caspases家族主要与凋亡信号转导有关，而磷脂酶D、C、A2的活化及线粒体活性氧类的产生主要与坏死有关。因此推测，两种不同细胞死亡方式可能也是分别由不同的死亡抵抗蛋白进行调节的。鉴于细胞死亡相关蛋白的重要作用，本领域迫切需要开发新的细胞死亡相关蛋白。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种新的新型人死亡抵抗蛋白DRP蛋白以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。本专利技术的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。本专利技术的DRP蛋白是一种TRAF2同源分子。在本专利技术的第一方面，提供新颖的分离出的DRP多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。较佳地，该多肽选自下组(a)具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽；(b)将SEQ ID NO2氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有抵抗TNF-α诱导细胞死亡功能的由(a)衍生的多肽。在本专利技术的第二方面，提供编码分离的这些多肽的多核苷酸，该多核苷酸包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少70％相同性(a)编码上述人DRP的多核苷酸；和(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码具有SEQ ID NO2所示氨基酸序列的多肽。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中214-1164位的序列；(b)具有SEQ ID NO1中1-3128位的序列。在本专利技术的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。在本专利技术的第四方面，提供了制备具有人DRP蛋白活性的多肽的方法，该方法包含(a)在适合表达人DRP蛋白的条件下，培养上述被转化或转导的宿主细胞；(b)从培养物中分离出具有人DRP蛋白活性的多肽。在本专利技术的第五方面，提供了与上述的人DRP多肽特异性结合的抗体。还提供了可用于检测的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中连续的10-3128个核苷酸。在本专利技术的第六方面，提供了模拟、促进、拮抗人DRP多肽活性的化合物，以及抑制人DRP多肽的表达的化合物。还提供了筛选和/或制备这些化合物的方法。较佳地，该化合物是人DRP多肽的编码序列或其片段的反义序列。在本专利技术的第七方面，提供了检测样品中是否存在DRP蛋白的方法，它包括将样品与DRP蛋白的特异性抗体接触，观察是否形成抗体复合物，形成了抗体复合物就表示样品中存在DRP蛋白。在本专利技术的第八方面，提供了一种检测与人DRP多肽异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，该方法包括检测编码所述多肽的核酸序列中是否存在突变。在本专利技术的第九方面，提供了本专利技术多肽和编码序列的用途。例如本专利技术多肽可被用于筛选促进人DRP多肽活性的激动剂，或者筛选抑制人DRP多肽活性的拮抗剂、或者被用于肽指纹图谱鉴定。本专利技术的人DRP蛋白的编码序列或其片段，可被作为引物用于PCR扩增反应，或者作为探针用于杂交反应，或者用于制造基因芯片或微阵列。在本专利技术的第十方面，提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本专利技术的人DRP多肽或其激动剂、拮抗剂以及药学上可接受的载体。这些药物组合物可治疗原发性心肌病、肝功能衰竭等病症。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。附图说明图1显示了本专利技术的人PHDP RT-PCR表达分析结果。各泳道如下1.HUT；2.Jurkat；3.Molt-4；4.Ramos；5.Raji；6.Daudi；7.NB4；8.HL-60；9.U937；10.DC；11.单核细胞；12.T-淋巴细胞；13.B-淋巴细胞. 图2显示了本专利技术的人DRP Northern印迹杂交所显示的分布。左图为DRP的正常组织分布；右图为DRP在多种细胞系内的分布。PBL代表人外周血白细胞。结果提示DRP是一种广泛分布的细胞内分子。图3显示了本专利技术的人DRP分子抵抗TNF-α对L929细胞的杀伤作用。图3A是不同时间的细胞存活曲线；图3B是不同TNF剂量的细胞存活曲线。具体实施例方式本专利技术人经过广泛而深入的研究，首次分离了新型人死亡抵抗蛋白(death-resistant protein，DRP)。DRP与已知的TRAF2分子具有较高的同源性，将DRP在L929细胞中稳定表达，可以显著抑制TRAF2诱导的细胞死亡，Northern杂交显示DRP在正常人体组织内广泛分布，在肿瘤组织中有较高水平的表达，尤其有意义的是，正常人体T、B淋巴细胞及单核细胞并不表达该基因，而在T、B或单核细胞来源的肿瘤细胞，如Jurkat、Molt-4、Raji、Daudi、NB4、HL-60、U937，中却有较高的表达，这提示该新分子可能在正常组织细胞的恶变和肿瘤形成中发挥了重要作用。因此，可以确定DRP是一种新的在TNF诱导细胞凋亡的信号转导中发挥重要作用的细胞内分子。DRP可能在肿瘤的诊断、治疗等多个领域具有重要的开发和应用价值。研究已表明，DRP恶性肿瘤的发生密切相关。因此，为治疗肿瘤目的研究和开发新的人死亡抵抗蛋白有重要意义。在本专利技术中，术语“DRP蛋白”、“DRP多肽”或“死亡抵抗蛋白DRP”可互换使用，都指具有人死亡抵抗蛋白DRP氨基酸序列(SEQ ID NO2)的蛋白或多肽。如本文所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。如本文所用，“分离的DRP蛋白或多肽”是指DRP多肽基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的人蛋白激酶ＤＲＰ多肽，其特征在于，它包含：具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张嘉，李楠，曹雪涛，
申请(专利权)人：第二军医大学免疫学研究所，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]