一种皮肤精原细胞保护液制造技术

本发明专利技术公开了一种皮肤精原细胞保护液，具体技术方案如下：一种皮肤精原细胞的保护液所述保护液主要是将氨基糖苷类抗生素用DMEM培养基水溶液溶解而成，每毫升所述DMEM培养基水溶液分别溶解所述氨基糖苷类抗生素为50‑200单位，所述DMEM培养基水溶液的浓度为10‑25g/L。优选的，所述氨基糖苷类抗生素选自庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星或妥布霉素中的一种或多种。优选的，所述保护液还包括氧合血红蛋白、吐温80、棕榈酰胺、海藻酸钾、月桂酰肌氨酸、柠檬酸、丙酮酸、延胡索酸和乙酰辅酶A。本发明专利技术的有益效果是提供了皮肤精原细胞的适宜和稳定保存环境，可以显著提高皮肤精原细胞保存后的细胞活力。

A skin spermatogonial protective solution

The invention discloses a spermatogonia skin protection liquid, specific technical proposal as follows: a skin protection liquid fine primary cell of the protective liquid is mainly dissolved in DMEM culture solution based aminoglycoside antibiotics into the DMEM per milliliter medium solution were dissolved by the aminoglycoside antibiotics for 50 200 units, the DMEM concentration in the medium solution for 10 25g/L. Preferably, the aminoglycoside antibiotic gentamicin, card is selected from one or more kanamycin, or tobramycin in Amikacin. Preferably, the protective liquid also includes oxygenated hemoglobin, Twain 80, palmitic amide, potassium alginate, lauryl creatine, citric acid, pyruvic acid, fumaric acid and acetyl coenzyme A. The beneficial effect of the invention is to provide an appropriate and stable storage environment for skin spermatogonia, and significantly improve the viability of skin spermatogonial cells after preservation.

【技术实现步骤摘要】
一种皮肤精原细胞保护液
本专利技术属于皮肤精原细胞保存的
，特别涉及一种皮肤精原细胞保护液。
技术介绍
目前我国的临床和细胞研究实验中，细胞的采集、长期保存和使用是时空分离的，采集的细胞离体后对外部环境的要求非常苛刻，特别是细胞采集与长期保存之间的细胞转运时，由于细胞还没有经过长期保存处理，外部环境不好会降低细胞活力，因此细胞采集后立即加入保护液来保持细胞的活力成了一个很重要的课题。因为采集的细胞无论是培养增殖或者保存最终都会进入人体血液，所以添加的保护液一方面要求可以保持细胞离体后在体外的活力，另一方面，还要求保护液中不能有不适宜静脉注射的成分，特别是致敏成分。常规的细胞保护液是生理盐水，方便安全，缺点是保护效果不好，专利文献CN101919380A报道，用生理盐水保护间充质干细胞，2小时后间充质干细胞活力就会降低10％左右，因此生理盐水只适用于间充质干细胞的即时保存。对于离体皮肤精原细胞的保存可以分为，几天以上几个月甚至几年、几十年的长时间的保存，一般采用液氮超低温保存，细胞需要预处理，加入甘油或者DMSO等防结晶的保护剂；另一种是几小时到几天之内的短时间的临时保存，目前研究的比较少，细胞临时保存的保护液，一般是生理盐水或者培养基中引入生长因子等。专利技术人在采集皮肤精原细胞采集盒转运过程中，还发现一般采集过程都是把25ml的细胞或者更多体积的细胞与保护液混合装在试管中静置保存。一个容易忽视的问题，就是皮肤精原细胞在一个细长的试管中细胞的供氧问题。皮肤精原细胞需要一个低氧的环境，氧气缺乏和供应过量都会对皮肤精原细胞活力产生影响。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术提出了一种皮肤精原细胞保护液，除了对保护液中一般培养基组分和抗生素的筛选、优化，该保护液还可以为皮肤细胞或精原细胞提供低氧环境，同时引入抗氧化剂可起到保持细胞活率的效果。因为保护液所保护的皮肤细胞或精原细胞最终是要用于人的，因此除非必要，尽量选择人体血液中已经存在的组分，尽量避免外源物质的引入。本专利技术公开的皮肤精原细胞保护液，具体技术方案如下：一种皮肤精原细胞保护液，所述保护液主要是将氨基糖苷类抗生素用DMEM培养基水溶液溶解而成，每毫升所述DMEM培养基水溶液溶解所述氨基糖苷类抗生素50-200单位，所述DMEM培养基水溶液的浓度为10-25g/L。优选的，所述氨基糖苷类抗生素选自庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星或妥布霉素中的一种或多种。优选的，所述氨基糖苷类抗生素为重量份数比为10:2:2的庆大霉素、卡那霉素和妥布霉素的混合物，所述DMEM培养基水溶液的浓度为16.9g/L。优选的，所述保护液还包括氧合血红蛋白，每毫升所述DMEM培养基水溶液溶解所述氧合血红蛋白400-1000μg。进一步优选的，每毫升所述DMEM培养基水溶液溶解所述氧合血红蛋白600μg。优选的，所述保护液还包括抗氧化剂，每毫升所述DMEM培养基水溶液溶解所述抗氧化剂0.1-1.0μmol。优选的，所述抗氧化剂为维生素C、维生素E或谷胱甘肽中的一种或多种。进一步优选的，所述抗氧化剂为重量份数比为1：1的维生素E和谷胱甘肽的混合物。优选的，所述保护液还包括吐温80、棕榈酰胺、海藻酸钾和月桂酰肌氨酸，每毫升所述DMEM培养基水溶液分别溶解所述吐温800.1-1.0μg、棕榈酰胺20-80μg、海藻酸钾10-50μg、月桂酰肌氨酸100-200μg。优选的，所述保护液还包括柠檬酸、丙酮酸、延胡索酸和乙酰辅酶A，每毫升所述DMEM培养基水溶液分别溶解柠檬酸1-10μg、丙酮酸50-80μg、延胡索酸10-20μg和乙酰辅酶A80-150μg。DMEM培养基中含有皮肤细胞或精原细胞生长代谢所需的糖类、氨基酸、无机盐和维生素等物质，对于维持细胞渗透压及活力有较好的作用。本专利技术优选了抗菌效果好、性质稳定、适于保护需要注入人体的皮肤细胞或精原细胞的氨基糖苷类抗生素，并优选了四种抗生素庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星或妥布霉素。抗生素的选择不但具有抗菌效果，更重要的是不会对保存的细胞活力产生影响。在保护液内加入氧合血红蛋白可以为保护液提供低氧氧气来源，进而提高皮肤细胞或精原细胞的保存活率。在保护液内加入抗氧化剂可以为保护液提供抗氧化保护。在保护液中加入吐温80、棕榈酰胺、海藻酸钾和月桂酰肌氨酸的混合物可以改善保护液内的氧气传递和物质交换，提高皮肤细胞或精原细胞的活率。在保护液中加入柠檬酸、丙酮酸、延胡索酸和乙酰辅酶A可以为保存的细胞进一步提供能量，可以延长对皮肤细胞或精原细胞的保存时间。不同于一般培养基中添加的血红蛋白作为营养物质，本专利技术的氧合血红蛋白主要作用是作为低浓度的氧气供应物质，皮肤细胞或精原细胞起初消耗的是溶液中物理溶解的氧气，随着氧分压下降和二氧化氮浓度的提高，逐步可以从氧合血红蛋白获得氧气。添加的人血液中天然存在的抗氧化剂不同于一般意义上的保护细胞抗氧化，而是作为一个氧气供应过量的平衡保护。配置保护液时，先配置DMEM培养基水溶液，然后加入氨基糖甙类抗生素，还可以加入氧合血红蛋白、人血液中天然存在的抗氧化剂、吐温80、棕榈酰胺、海藻酸钾、月桂酰肌氨酸、柠檬酸、丙酮酸、延胡索酸和乙酰辅酶A，过滤除菌，存储于4℃冰箱。使用时与刚采集的皮肤细胞或精原细胞按1:1体积比例混合。皮肤精原细胞保护液与皮肤细胞或精原细胞的混合液可以临时存储于4℃冰箱或者转运过程中存储于含有冰盒的、并且保障温度低于4℃的密闭容器内。本专利技术的提供的皮肤精原细胞保护液为皮肤细胞或精原细胞提供了适宜和稳定的保存环境，其更接近体内环境，可以显著提高皮肤细胞或精原细胞保存后的细胞活率。具体实施方式实施例1一种皮肤精原干细胞保护液，该保护液主要是将庆大霉素用DMEM培养基水溶液溶解而成，每毫升所述DMEM培养基水溶液溶解庆大霉素100单位，所述DMEM培养基水溶液的浓度为16.9g/L。实施例2一种皮肤精原干细胞保护液，该保护液主要是将卡那霉素用DMEM培养基水溶液溶解而成，每毫升所述DMEM培养基水溶液溶解卡那霉素100单位，所述DMEM培养基水溶液的浓度为16.9g/L。实施例3一种皮肤精原干细胞保护液，该保护液主要是将阿米卡星用DMEM培养基水溶液溶解而成，每毫升所述DMEM培养基水溶液溶解阿米卡星100单位，所述DMEM培养基水溶液的浓度为16.9g/L。实施例4一种皮肤精原干细胞保护液，该保护液主要是将庆大霉素、卡那霉素和妥布霉素用DMEM培养基水溶液溶解而成，每毫升所述DMEM培养基水溶液分别溶解庆大霉素100单位、卡那霉素20单位、妥布霉素20单位，所述DMEM培养基水溶液的浓度为16.9g/L。实施例5一种皮肤精原干细胞保护液，该保护液主要是将妥布霉素用DMEM培养基水溶液溶解而成，每毫升所述DMEM培养基水溶液溶解妥布霉素100单位，所述DMEM培养基水溶液的浓度为10.0g/L。实施例6一种皮肤精原干细胞保护液，该保护液主要是将庆大霉素用DMEM培养基水溶液溶解而成，每毫升所述DMEM培养基水溶液溶解庆大霉素100单位，所述DMEM培养基水溶液的浓度为25.0g/L。实施例7一种皮肤精原干细胞保护液，该保护液主要是将庆大霉素和氧合血红蛋白用DMEM培养基水溶液溶解而成，每毫升所述DMEM培养基本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种皮肤精原细胞保护液，其特征在于：所述保护液主要是将氨基糖苷类抗生素用DMEM培养基水溶液溶解而成，每毫升所述DMEM培养基水溶液溶解所述氨基糖苷类抗生素50‑200单位，所述DMEM培养基水溶液的浓度为10‑25g/L。

【技术特征摘要】
1.一种皮肤精原细胞保护液，其特征在于：所述保护液主要是将氨基糖苷类抗生素用DMEM培养基水溶液溶解而成，每毫升所述DMEM培养基水溶液溶解所述氨基糖苷类抗生素50-200单位，所述DMEM培养基水溶液的浓度为10-25g/L。2.如权利要求1所述的皮肤精原细胞的保护液，其特征在于：所述氨基糖苷类抗生素选自庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星或妥布霉素中的一种或多种。3.如权利要求2所述的皮肤精原细胞的保护液，其特征在于：所述氨基糖苷类抗生素为重量份数比为10:2:2的庆大霉素、卡那霉素和妥布霉素的混合物；所述DMEM培养基水溶液的浓度为16.9g/L。4.如权利要求1所述的皮肤精原细胞的保护液，其特征在于：所述保护液还包括氧合血红蛋白，每毫升所述DMEM培养基水溶液溶解所述氧合血红蛋白400-1000μg。5.如权利要求4所述的皮肤精原细胞的保护液，其特征在于：每毫升所述DMEM培养基水溶液溶解所述氧合血红蛋白600μg。6.如权利要求1所述的皮肤精原细...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹毓琳，李霞云，白志惠，潘新，刘世红，卢承前，
申请(专利权)人：北京世纪劲得生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11