改进的碱裂解法提取基本纯质粒的方法技术

提供一种用碱裂解法提取基本纯质粒的方法，包括用碱性裂解液裂解工程菌、用中和液中和并使杂质凝聚及将含质粒的澄清液经离子交换层析柱或交换膜纯化，其中裂解步骤中直接采用能表达牛胰腺ＲＮＡ酶的重组工程菌匀浆液；杂质凝聚步骤中先加入ｐＨ４．８－５．５的３Ｍ醋酸钾水溶液中和裂解液并凝聚杂质，在即将进行离子交换层析前加入混合有机酸液调节澄清液至酸性；纯化步骤中采用笼格式常压多层层析装置进行快速离子交换层析。本发明专利技术还提供这种笼格式常压多层层析装置。本发明专利技术的方法和装置简化了后续纯化步骤、节约了采用纯化牛胰腺ＲＮＡ酶的成本及避免了传播疯牛病的危险，可快速有效并大量制备质粒。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医药范畴的新型疫苗技术，具体涉及基因治疗和基因疫苗规模化制备中碱裂解法提取基本纯质粒方法的实用性改进。
技术介绍
采用“裸工程质粒”的核酸疫苗是近十年出现的最新一代或第三代疫苗，研究显示其对第一、第二代疫苗基本无效的传染病如龋病、艾滋病、结核病、疟疾等的预防和乙型肝炎的治疗具有独特的优势和应用前景。核酸疫苗诱导机体细胞免疫应答能力的独特优点弥补了第一、第二代疫苗的不足，正是防治这些疾病所必须的，目前国际上已对此获得共识。另外，肿瘤的免疫治疗也主要依赖细胞免疫力，其核酸疫苗的研制也是当今热点之一。质粒除作为基因疫苗外，也可用于基因治疗和(表达)抗体治疗。因而质粒纯化技术的研究目前已从实验室阶段向实用产业化阶段发展。质粒是大肠杆菌细胞内能独立于染色体进行复制和表达的环形超螺旋DNA，工程质粒是将大肠杆菌质粒经基因工程改造，在其中插入了编码病原体的优化抗原蛋白质的基因、优选的免疫增强性细胞因子，如编码白细胞介素12(IL-12)、细胞集落刺激因子(GM-CSF)的基因或CpG佐剂基序，以及适合于人类细胞的启动子等元件，和适当的抗菌素抗性基因等构建的基因重组质粒。将纯化本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种改进的碱裂解法提取基本纯质粒的方法，包括用碱性裂解液裂解工程菌的裂解步骤、用中和液中和并使杂质凝聚的杂质凝聚步骤，和将含质粒的澄清液经离子交换层析柱或交换膜纯化的纯化步骤，其特征在于：（１）裂解步骤中直接采用表达牛胰腺ＲＮＡ酶的 重组大肠杆菌的匀浆液来去除ＲＮＡ杂质；（２）杂质凝聚步骤中先加入ｐＨ４．８－５．５的３Ｍ醋酸钾水溶液中和裂解液并凝聚杂质，在即将进行离子交换层析前加入混合有机酸液调节澄清液至酸性；（３）纯化步骤中采用笼格式常压多层层析装置进 行快速离子交换层析。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘庆良，李忠明，
申请(专利权)人：刘庆良，李忠明，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]