一种快速质粒抽提纯化试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种快速质粒抽提纯化试剂盒及进行细菌质粒抽提纯化的方法，其试剂盒包括下列独立存在的液体：无碱含酶菌体裂解液，ＤＮＡ结合柱前处理液，ＤＮＡ质粒结合液，清洗液，洗脱液。使用本试剂盒进行细菌质粒抽提纯化的方法包括如下步骤：裂解菌体；前处理ＤＮＡ结合柱；结合质粒ＤＮＡ；清洗；洗脱。使用本发明专利技术试剂盒及质粒抽提纯化方法，可在３－５分钟内快速有效地完成质粒抽提纯化工作，大大缩短抽提时间；所得到的质粒ＤＮＡ，经使用分光光度计检测，Ａ↓［２６０］／Ａ↓［２８０］值达１．７－２．０；还可以用于大批量样品抽提，在紧急情况下抽提纯化质粒；并为质粒抽提的自动化和大规模化奠定了技术基础。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种快速质粒抽提纯化试剂盒及其应用，尤其是涉及一种细菌质粒抽提纯化试剂盒及其应用。
技术介绍
细菌的质粒是DNA重组的重要载体和工具，分离纯化质粒是现代分子生物技术必不可少的手段。现有质粒的分离主要有两个方法一是由Birnbiom和Doly创造的碱裂解法，二是由Holmes和Quigley专利技术的煮沸法，还有一些在此基础上发展而来的其它方法如PEG法、氯化铯密度梯度离心法等。目前普遍使用的质粒抽提方法是以碱裂解方法为基础结合二氧化硅DNA亲和性质，加清洗液用离心或真空抽提的方法得到纯化的质粒，此方法创造性地改进了质粒的抽提纯化过程，它已广泛地应用于当前医学、农学及其它分子生物学研究领域。目前市场上所流行的各种“miniprep”、“midiprep”、“maxiprep”都是商家所提供的各种质粒纯化试剂盒，其中以Qiagen公司的最为经典，其试剂盒包括七种独立存在的不同液体试剂，用它进行质粒纯化，具体包括以下步骤收集菌体、重悬、碱裂解、中性化、长时间离心除杂质、DNA结合、洗净、洗脱等。这一方法缩短了抽提纯化质粒的时间，使质粒纯化的方法相对以往的方法简单而有效，一本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种质粒抽提纯化试剂盒，其特征在于，至少包括下列四种独立存在的液体：菌体裂解液，ＤＮＡ结合柱前处理液，ＤＮＡ质粒结合液，清洗液；所述菌体裂解液配方：葡萄糖１０ｍＭ－１Ｍ，三氨基甲烷盐酸２０ｍＭ－１Ｍ，乙二胺四乙酸１０ｍＭ－５００ｍＭ ，碳酸氢钠１００ｍＭ－５００ｍＭ，曲拉通１％－５０％（体积／体积），十二烷基磺酸钠１％－２５％（重量／体积），溶菌酶２ｍｇ／ｍｌ－１０００ｍｇ／ｍｌ，核糖核酸酶５－５０ｍｇ／ｍｌ；所述ＤＮＡ结合柱前处理液配方：氯化锂或氯化钠１０ｍＭ －５Ｍ，氢氧化钾或氢氧化钠１００ｍＭ－２Ｍ，十二烷基磺酸钠５％－２０％（重量／体积），盐酸０．０１Ｍ－２...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李乐攻，李东屏，黄咏，
申请(专利权)人：李乐攻，李东屏，黄咏，
类型：发明
国别省市：43[中国|湖南]