一种DNA-MarkerI分子量标准及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种制备DNA Marker I分子量标准的方法，包括以下步骤：将9个不同长度的DNA片段分配至三个质粒中；限制性内切酶进行酶切，然后混合酶切片段后即得DNA Marker I分子量标准。本发明专利技术的方法解决了现有技术酶切DNA片段方法制备DNA Marker各条带之间亮度不均一的问题，即通过增加不同DNA片段的拷贝数以及在质粒酶切产物的混合重量比例，达到DNA片段亮度一致，从而解决批次间质量不稳定的问题。

A DNA MarkerI molecular weight standards and preparation method and application thereof

【技术实现步骤摘要】
一种DNA-MarkerI分子量标准及其制备方法与应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种DNAMarkerI分子量标准及其制备方法与应用。
技术介绍
DNA分子量标准又称DNAMarker，是分子生物学电泳实验中经常使用到的一种DNA片段的定性或定量参照物，一般由一系列不同长度的DNA片段组成。在琼脂糖电泳中，通过将DNAMarker与DNA片段一起电泳分析，可以对DNA片段的长度和浓度做出大致估计。DNAMarker的制备一般有两种方法：DNA片段混合法和质粒限制性酶切法。DNA片段混合法，一般由不同长度的单一DNA片段混合而成。PCR扩增方法是获得一定长度单一DNA片段的常规方法，只需要利用已知模板DNA序列，使用引物设计软件设计相应引物，可方便的扩增不同长度单一DNA片段。但以PCR扩增获得DNA片段的方法的有明显的不足，一是生产条件要求高，PCR扩增不但需要专业的PCR仪器，而且还需要相关分子生物学和引物设计知识，同时PCR反应体系中的Taq酶、dNTP等PCR反应试剂也需要额外购置。二是DNA片段的产量容易受到限制，一台PCR仪96孔，每个PCR管上样量100微升，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备DNA Marker I分子量标准的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)9个不同长度的DNA片段分配至三个质粒中；2)将分配后的三个质粒用限制性内切酶进行酶切，然后混合酶切片段后即得DNA Marker I分子量标准；其中所述9个不同长度的DNA片段分别为2400bp，2000bp，1600bp，1200bp，1000bp，800bp，600bp，400bp，200bpDNA片段；所述分配后的三个质粒分别为质粒1基因工程质粒载体pBS‑7.2kb，核苷酸如序列表中SEQ ID NO:4所示；质粒2为基因工程质粒载体pBS‑8kb，核苷酸如序列表中SEQ ID NO:5所示；质粒3为基因...

【技术特征摘要】
1.一种制备DNAMarkerI分子量标准的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)9个不同长度的DNA片段分配至三个质粒中；2)将分配后的三个质粒用限制性内切酶进行酶切，然后混合酶切片段后即得DNAMarkerI分子量标准；其中所述9个不同长度的DNA片段分别为2400bp，2000bp，1600bp，1200bp，1000bp，800bp，600bp，400bp，200bpDNA片段；所述分配后的三个质粒分别为质粒1基因工程质粒载体pBS-7.2kb，核苷酸如序列表中SEQIDNO:4所示；质粒2为基因工程质粒载体pBS-8kb，核苷酸如序列表中SEQIDNO:5所示；质粒3为基因工程质粒载体pBS-4.8kb，核苷酸如序列表中SEQIDNO:6所示。2.根据权利要求1所述制备DNAMarkerI分子量标准的方法，其特征在于，所述步骤1)中9个不同长度的DNA片段分配至三个质粒的拷贝数分别为：质粒1包含2400bp片段、拷贝数1，1200bp片段、拷贝数2，600bp片段、拷贝数4；质粒2包含2000bp片段、拷贝数1，1000bp片段、拷贝数4，200bp片段、拷贝数10；质粒3包含1600bp片...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕新，李玥仁，陈丽华，刘兰英，黄薇，
申请(专利权)人：福建省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，
类型：发明
国别省市：福建,35