一种组合物及其制备方法与在全血游离DNA保存领域的应用技术

本发明专利技术属于核酸保存技术领域，尤其涉及一种组合物及其制备方法与在全血游离DNA保存领域的应用。本发明专利技术提供了一种组合物，组合物的原料包括：渗透性保护剂、稳定剂、离子通道阻断剂以及抗凝剂。本发明专利技术还提供了一种上述组合物的制备方法，本发明专利技术还提供了一种上述组合物或上述制备方法得到的产品在全血游离DNA保存领域的应用。经模拟运输检测以及实验检测可得，本发明专利技术提供的技术方案制得的产品，在模拟运输的实验条件下，可有效的稳定血细胞膜，减少红细胞和白细胞的破裂，同时，对于全血游离的DNA起到良好的保护作用，进一步地，确保了将全血游离DNA用于临床检测时，其检测结果的准确性和可靠性，拓宽了全血游离DNA在临床的应用范围。

A composition and its preparation method and application in the field of free DNA preservation in whole blood

The invention belongs to the field of nucleic acid preservation technology, in particular to a composition and a preparation method and application in the field of free DNA preservation in whole blood. The invention provides a composition, which comprises a permeable protector, a stabilizer, an ion channel blocker, and an anticoagulant. The invention also provides a preparation method for the above compositions. The invention also provides an application of the above composition or the above preparation method in the field of whole blood free DNA preservation. The simulation and experimental testing to transport detection, the invention provides the technical scheme that the products produced in the simulated transport under the experimental conditions, can stabilize the blood cell membrane effectively, reduce the rupture of red blood cells and white blood cells in the blood at the same time, the free DNA play a good protective effect, further. Ensure the whole blood free DNA for clinical detection, the results of the testing accuracy and reliability, broaden the blood free DNA in clinical application.

【技术实现步骤摘要】
一种组合物及其制备方法与在全血游离DNA保存领域的应用
本专利技术属于核酸保存
，尤其涉及一种组合物及其制备方法与在全血游离DNA保存领域的应用。
技术介绍
自从1948年游离DNA被首次发现以来，随着分子检测技术的发展，人们发现游离DNA的水平和组成与多种疾病密切有关。游离DNA作为一种生物标志物，逐步应用于疾病的早期诊断、预后以及监测各领域，尤其在肿瘤诊断与无创产前筛查领域最为成熟。离体血液中的游离DNA受到巨噬细胞清除、酶降解、有核细胞的释放等多种因素的影响，无论是数量和种类，都会在样本储存过程中发生变化，影响检测结果的准确性。为了最大程度的减少游离DNA的离体变异，降低储存和运输成本，在应用过程中需要特殊的保存液，发挥下述三种作用：1、抑制DNA酶的活性，保护游离DNA不降解；2、抑制巨噬细胞活性，防止巨噬细胞对游离DNA的清除；3、维持细胞完整性，减少细胞的凋亡和坏死，防止基因组DNA释放，造成的背景污染。现有技术中，目前常采用的EDTA抗凝血血浆提取游离DNA，对温度和储存时间都有严格的贮存条件，极大的限制了临床的使用。因此，研发出一种组合物及其制备方法与在全血游离DNA保存领域的应用，用于解决现有技术中，游离DNA对于温度和储存时间都有严格的贮存条件，极大的限制了临床应用的技术缺陷，成为了本领域技术人员亟待解决的问题。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种组合物及其制备方法与在全血游离DNA保存领域的应用，用于解决现有技术中，游离DNA对于温度和储存时间都有严格的贮存条件，极大的限制了临床应用的技术缺陷。本专利技术提供了一种组合物，所述组合物的原料包括：渗透性保护剂、稳定剂、离子通道阻断剂以及抗凝剂。优选地，以质量份计，所述组合物的原料包括：渗透性保护剂0.05～1份、稳定剂5～50份、离子通道阻断剂1～10份以及抗凝剂8～16份。优选地，以质量份计，所述组合物的原料包括：渗透性保护剂0.1份、稳定剂20份、离子通道阻断剂5份以及抗凝剂10份优选地，所述渗透性保护剂为DMSO和/或甘油。优选地，所述稳定剂为肌醇和/或海藻糖。优选地，所述离子通道阻断剂选自：四乙胺、4-氨基吡啶、奎尼丁、奎宁、氯化钡、DIDS以及NPPB中的一种或多种。优选地，所述抗凝剂为乙二胺四乙酸二钾和/或乙二胺四乙酸三钾。本专利技术还提供了一种包括以上任意一项所述组合物的制备方法，所述制备方法为：步骤一、稳定剂、离子通道阻断剂以及抗凝剂混合得第一混合物，加水搅拌得第一产物；步骤二、所述第一产物与渗透性保护剂混合得第二混合物，加水搅拌，通过滤膜过滤后得产品。优选地，步骤一中，所述第一混合物与水的质量投料比为(17～64)：(60～90)；步骤二中，所述第二混合物与水的体积投料比为(4～12)：(1～4)。本专利技术还提供了一种包括以上任意一项所述的组合物或以上任意一项所述的制备方法得到的产品在全血游离DNA保存领域的应用。综上所述，本专利技术提供了一种组合物，所述组合物的原料包括：渗透性保护剂、稳定剂、离子通道阻断剂以及抗凝剂。本专利技术还提供了一种上述组合物的制备方法及上述制备方法得到的产品在全血游离DNA保存领域的应用。经模拟运输检测以及实验检测可得，本专利技术提供的技术方案制得的产品，在模拟运输的实验条件下，可有效的稳定血细胞膜，减少红细胞和白细胞的破裂，同时，对于全血游离的DNA起到良好的保护作用，进一步地，确保了将全血游离DNA用于临床检测时，其检测结果的准确性和可靠性。本专利技术提供的一种组合物及其制备方法与在全血游离DNA保存领域的应用，解决了现有技术中，游离DNA对于温度和储存时间都有严格的贮存条件，极大的限制了临床应用的技术缺陷。具体实施方式本专利技术实施例提供了一种组合物及其制备方法与在全血游离DNA保存领域的应用，用于解决现有技术中，游离DNA对于温度和储存时间都有严格的贮存条件，极大的限制了临床应用的技术缺陷。下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。为了更详细说明本专利技术，下面结合实施例对本专利技术提供的一种组合物及其制备方法与在全血游离DNA保存领域的应用，进行具体地描述。实施例1本实施例为制备保存剂产品的具体实施例。称取稳定剂10g、离子通道阻断剂2g、抗凝剂10g混合后，加入80mL水搅拌均匀，得第一产物1；其中，稳定剂为肌醇，离子通道阻断剂为四乙胺，抗凝剂为乙二胺四乙酸二钾。第一产物1与0.1g渗透性保护剂混合，加水定容至100mL，搅拌均匀，用孔径为0.22μm的滤膜过滤，得产品1；其中，渗透性保护剂为DMSO。称取稳定剂5g、离子通道阻断剂2g、抗凝剂10g混合后，加入60mL水搅拌均匀，得第一产物2；其中，稳定剂为海藻糖，离子通道阻断剂为4—氨基吡啶，抗凝剂为乙二胺四乙酸二钾。第一产物1与0.1g渗透性保护剂混合，加水定容至100mL，搅拌均匀，用孔径为0.22μm的滤膜过滤，得产品2；其中，渗透性保护剂为甘油。称取稳定剂肌醇20g，海藻糖2g、离子通道阻断剂1g、抗凝剂8g混合后，加入90mL水搅拌均匀，得第一产物1；其中，稳定剂为肌醇和海藻糖的混合物，离子通道阻断剂为奎尼丁，抗凝剂为乙二胺四乙酸二钾。第一产物3与0.05g渗透性保护剂混合，加水定容至100mL，搅拌均匀，用孔径为0.22μm的滤膜过滤，得产品3；其中，渗透性保护剂为DMSO。称取稳定剂20g、离子通道阻断剂5g、抗凝剂10g混合后，加入80mL水搅拌均匀，得第一产物4；其中，稳定剂为肌醇，离子通道阻断剂为奎宁，抗凝剂为乙二胺四乙酸二钾。第一产物1与0.1g渗透性保护剂混合，加水定容至100mL，搅拌均匀，用孔径为0.22μm的滤膜过滤，得产品4；其中，渗透性保护剂为甘油。称取稳定剂50g、离子通道阻断剂2g、抗凝剂12g混合后，加入80mL水搅拌均匀，得第一产物5；其中，稳定剂为肌醇，离子通道阻断剂为氯化钡，抗凝剂为乙二胺四乙酸三钾。第一产物1与0.1g渗透性保护剂混合，加水定容至100mL，搅拌均匀，用孔径为0.22μm的滤膜过滤，得产品5；其中，渗透性保护剂为甘油。称取稳定剂30g、离子通道阻断剂3g，抗凝剂16g混合后，加入80mL水搅拌均匀，得第一产物6；其中，稳定剂为肌醇，离子通道阻断剂为DIDS，抗凝剂为乙二胺四乙酸三钾。第一产物1与1g渗透性保护剂混合，加水定容至100mL，搅拌均匀，用孔径为0.22μm的滤膜过滤，得产品6；其中，渗透性保护剂为甘油。称取稳定剂5g、离子通道阻断剂10g、抗凝剂12g混合后，加入80mL水搅拌均匀，得第一产物7；其中，稳定剂为海藻糖，离子通道阻断剂为NPPB，抗凝剂为乙二胺四乙酸三钾。第一产物1与1g渗透性保护剂混合，加水定容至100mL，搅拌均匀，用孔径为0.22μm的滤膜过滤，得产品7；其中，渗透性保护剂为DMSO。实施例2本实施例为利用实施例1制得的产品1～7用于模拟运输的情况下，产品对于全血游离DNA保存效果的具体实施例。将产品1～7作为添加剂分别加入到7个真空采血管中，采集同一血液样本本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物，其特征在于，所述组合物的原料包括：渗透性保护剂、稳定剂、离子通道阻断剂以及抗凝剂。

【技术特征摘要】
1.一种组合物，其特征在于，所述组合物的原料包括：渗透性保护剂、稳定剂、离子通道阻断剂以及抗凝剂。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，以质量份计，所述组合物的原料包括：渗透性保护剂0.05～1份、稳定剂5～50份、离子通道阻断剂1～10份以及抗凝剂8～16份。3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，以质量份计，所述组合物的原料包括：渗透性保护剂0.1份、稳定剂20份、离子通道阻断剂5份以及抗凝剂10份。4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述渗透性保护剂为DMSO和/或甘油。5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述稳定剂为肌醇和/或海藻糖。6.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述离子通道阻断剂选自：四乙胺、4-氨基吡啶、奎尼丁、奎宁、氯化...

【专利技术属性】
技术研发人员：王思娜，李思韵，
申请(专利权)人：广州阳普医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44