一种大豆耐低磷基因Gm100776332的克隆方法和功能验证技术

本发明专利技术公开了一种大豆耐低磷基因Gm100776332及其克隆方法和应用，属于资源与环境技术领域。本发明专利技术通过差异蛋白质组学探索大豆基因组中糖酵解途径的相关基因，在低磷条件处理下，运用qPCR技术测定华春5号和瓦窑黄豆的表达量进行测定。运用差异蛋白组学和q PCR技术最终筛选到了差异明显的Gm100776332基因，克隆了大豆耐逆基因Gm100776332，并通过转化拟南芥对其耐低磷的关键性指标‑可溶性糖含量进行测定。

Cloning and functional verification of a low phosphorus resistant gene Gm100776332 in Soybean

The invention discloses a soybean low phosphorus resistant gene Gm100776332 and its cloning method and application, which belongs to the field of resource and environmental technology. The present invention by differential proteomics to explore related genes in the soybean genome glycolysis pathway, in the treatment of low phosphorus conditions, the expression of the use of qPCR technology for determination of Huachun 5 soybean were determined and wayao. The use of differential proteomics and Q PCR technology eventually screened Gm100776332 gene significantly, the cloned soybean resistance gene Gm100776332, soluble sugar content of key indicators, and through the transformation of Arabidopsis thaliana with low phosphorus tolerance of its determination.

【技术实现步骤摘要】
一种大豆耐低磷基因Gm100776332的克隆方法和功能验证
本专利技术属于资源与环境
，具体涉及一种大豆耐低磷基因Gm100776332克隆方法和功能验证。
技术介绍
大豆起源于我国，是我国的第四大粮食作物之一，富含脂肪和蛋白质。作为传统的粮、油、饲料作物，在农业生产中具有非常重要的地位。磷素是植物生长发育和新陈代谢所必需的营养元素，它以多种方式参与植物体内的各种生物化学过程。但，土壤中大部分磷很难被植物吸收、利用。华南地区多为酸性红壤，pH值低，磷很容易被固定，有效磷更是严重缺乏，导致该地区大豆产量较低、经济效益很难满足人们的生产需求，从而使土壤缺磷成为华南大豆生产的最重要的限制因子之一。通过增施磷肥，可提高土壤中有效磷的含量，但由于磷肥在土壤中扩散速度慢，导致磷素利用率非常低，而且大量施用磷肥也会带来水体和土壤污染。随着分子生物学和分子遗传学的发展，植物耐逆方面的研究取得了长足的进展。在分子水平上逐步地揭示耐逆的本质成为研究者的目标，因此，利用蛋白质组学研究，解析与大豆耐低磷相关的分子机制，发掘耐低磷基因，以实现大豆对磷素的高效利用，这对改善南方的大豆产量具有重要的现实意本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种耐低磷基因Gm100776332的克隆方法，其特征在于：应用引物F如SEQ ID NO：2所示；引物R如SEQ ID NO：3所示，进行反转录PCR，94℃3min预变性，94℃变性30s，56℃退火45s，72℃延伸1min，32个循环后72℃再延伸10min；在栽培大豆华春5号中克隆Gm100776332。

【技术特征摘要】
1.一种耐低磷基因Gm100776332的克隆方法，其特征在于：应用引物F如SEQIDNO：2所示；引物R如SEQIDNO：3所示，进行反转录PCR，94℃3min预变性，94℃变性30s，56℃退火45s，72℃延伸1min，32个循环后72℃再延伸10min；在栽培大豆华春5号中克隆Gm100776332。2.一种耐低磷基因Gm100776332，其特征在于：由权利要求1所述的克隆方法获得，所述的大豆耐低磷基因Gm100776332的核苷酸基因序列如SEQIDNO：1所示。3.如权利要求2所述的大豆耐低磷基因Gm100776332，其附加技术特征在于：在参与耐逆途径中的应用。4.根据权利要求3所述的大豆耐低磷基因Gm100776332在参与耐低磷途径中的应用，其特征在于：通过采用转基因拟南芥来实现大豆耐低磷基Gm100776332调节的应用。5.根据权利要求4所述的大豆耐低磷基因Gm100776332在参与调控糖酵解途径中的应用，其特征在于：所述的采用转基因拟南芥为采用花药侵染法转化拟南芥来实现。6.如权利要求5所述的大豆耐低磷基因Gm100776332在参与调控糖酵解途径中的应用，其具体包括以下步骤：(1)大豆耐逆基因的发掘：华春5号大豆种子表面消毒，将消毒过的种子种于石英砂中，发芽后待幼苗长出真叶(真叶展开)时，选择长势一致的幼苗移至含不同磷浓度1/2Hoagland营养液中继续培养。然后将植株转至无磷的液体培养液中处理48h时，取2cm左右的大豆根尖。提取蛋白质，通过iTRAQ检测及数据分析，以及利用qPCR方法进一步...

【专利技术属性】
技术研发人员：张秀香，年海，唐平，孟醒，闵祖辉，宋瑞凤，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东,44