一种离体诱导冬枣花药愈伤组织的方法技术

一种离体诱导冬枣花药愈伤组织的方法，即通过冬枣花药的组织培养获得其愈伤组织，愈伤组织诱导率达８６．２３％，包括外植体采集、消毒、初始诱导、增殖培养。在５～６月选取田间直径为０．３～０．６ｃｍ、花萼尚未张开的冬枣未成熟花蕾，４℃冰箱预处理１～３ｄ。流水冲洗１～２ｈ，超净工作台上将花蕾放入７０％乙醇３０ｓ，再转入０．１％ＨｇＣｌ↓［２］溶液中８ｍｉｎ，无菌水冲洗３～４次后剥取花药，启动培养时将无菌花药接种在ＭＳ＋麦芽糖１５～２０ｇ／Ｌ＋ＴＤＺ↓［０．５－１．０ｍｇ／Ｌ］＋ＮＡＡ↓［０－０．５ｍｇ／Ｌ］的培养基上进行暗培养三周，然后转至弱光下（８００～１０００Ｌｕｘ）培养。花药逐渐产生黄绿色的、松散颗粒状的愈伤组织，且随培养时间的延长逐渐增多。增殖培养时将获得的初始愈伤组织转接到ＭＳ＋麦芽糖１５～２０ｇ／Ｌ＋ＴＤＺ↓［０．１－０．５ｍｇ／Ｌ］＋ＮＡＡ↓［０－０．５ｍｇ／Ｌ］的培养基中进行增殖培养，愈伤组织可快速增殖。以上培养基基本培养基为ＭＳ培养基，麦芽糖１５～２０ｇ／Ｌ，琼脂３．５ｇ／Ｌ，培养基灭菌前ｐＨ为５．８～６．０。光照周期为１５小时光照、９小时黑暗。光照强度８００～１０００Ｌｕｘ。温度控制在２７±１℃。该方法可在７０ｄ左右获得大量冬枣花药愈伤组织。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。
技术介绍
单倍体育种，主要是指通过花药培养或游离小孢子培养(以下简称小孢子培养)的方式得到单倍体植株，然后经秋水仙素等处理加倍为双单倍体，从而直接获得纯合的品系。无论是花药培养还是小孢子培养，从开始培养到获得完全纯合的品系一般只需要1年左右的时间。对果树来说，单倍体育种有可能使某些原来无性繁殖的果树也能用种子繁殖，并为基因型高度杂合的果树遗传性研究提供纯系材料，从而促进果树遗传理论工作的研究。因此，该项技术若应用于育种实践，必将大大加快育种的速度，节省大量的人力物力，是一项对育种工作极其有用的生物技术。 1953年，Tuleck用银杏花粉在人工培养基上第一次成功地诱导形成单倍体愈伤组织Guha和Maheshwari(1964)首次成功地从毛叶曼陀罗(Datura inoxia)花药培养中获得单倍体植株，随后证实是由胚状体途径获得的单倍体花粉植株，从此开创了利用花粉培育单倍体的新途径，近30年来，利用花药培养产生单倍体植株的技术已被广泛应用到10个科，24个属，34个种的250多种植物上。果树花药培养单倍体的研究起步较晚，20世纪70年代末到80年代初先后本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种离体诱导冬枣花药愈伤组织的方法，其特征在于通过对冬枣花药进行组织培养，获得其愈伤组织，愈伤组织诱导率达８６．２３％。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘孟军，王娜，赵锦，秦子禹，
申请(专利权)人：河北农业大学，
类型：发明
国别省市：13[中国|河北]