一种大黄鱼精子遗传物质完全失活的方法技术

本发明专利技术公开一种适用于大黄鱼精子遗传物质完全失活的方法，可以用于大黄鱼雌核发育和其全雌苗种诱导的研究和生产。方法为：采用预冷的含有营养成分的稀释液将大黄鱼成熟精液稀释２０～１００倍后放于平底培养皿中，用紫外光源照射后，与大黄鱼卵子受精并孵育，而后对精子遗传灭活的效果进行鉴定。本发明专利技术具有方法简单，所需设备少，便于操作，精子遗传物质灭活率能够达到１００％，且精子仍具有活力可以正常启动卵子发育等优点。为实现大规模雌核发育和全雌大黄鱼诱导奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及海水鱼类染色体操作技术，具体地说是一种我国重要海水养殖对象-大黄鱼精子遗传物质完全灭活的方法。
技术介绍
精子遗传物质的完全灭活是与受精卵第二极体和第一次卵裂抑制技术结合产生同质和异质雌核发育二倍体的关键技术。虽然目前已经具有海水鱼类精子紫外遗传失活的方法，但主要是针对牙鲆鱼的，而大黄鱼精子的特点与牙鲆鱼精子的完全不同，其精液浓度、pH适合范围以及精子内部超微结构与后者的有较大差别，使得大黄鱼精子对紫外照射的敏感性和耐受力也存在很大差异。将牙鲆等鲆鲽鱼类精子遗传失活条件直接应用于大黄鱼精子的遗传失活中一直未获得成功，其遗传失活率只有88-92％；而有关于大黄鱼精子完全遗传失活的方法实验的报道也尚未见到。
技术实现思路
为了克服现有技术对大黄鱼精子遗传物质灭活中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种灭活效果完全的适用于大黄鱼精子遗传物质失活的紫外照射方法和优化参数、以避免大黄鱼雌核发育二倍体诱导可能带来分析结果混乱情形的大黄鱼精子遗传物质失活的方法。 为了实现上述目的，本专利技术的技术方案如下灭活步骤为①精液保存将人工挤出的未激活的大黄鱼成熟情液避光保存于2～4℃低本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种大黄鱼精子遗传物质完全灭活的方法，包括：精液保存、精液稀释、精子遗传物质失活，其特征在于：①精液保存：将人工挤出的未激活的大黄鱼成熟精液避光保存于２～４℃低温条件下备用；②精液稀释：采用预冷的稀释液稀释所述大黄鱼成熟精液，稀释倍数为２０～１００倍，然后将稀释后的大黄鱼成熟精液放入已预冷到０～５℃的培养皿中，其培养皿中稀释后的大黄鱼成熟精液液体厚度为０．１～０．３ｃｍ；其中：按重量体积百分比计所述预冷的稀释液成份为ＮａＣｌ０．６０～０．８０％，ＫＣｌ０．０３～０．０５％，ＣａＣｌ↓［２］，０．０１～０．０３％，葡萄糖０．０５～０．１０％；ｐＨ，７．０～７．３；稀释液预冷到０～５℃；③精子遗传...

【技术特征摘要】
1.一种大黄鱼精子遗传物质完全灭活的方法，包括精液保存、精液稀释、精子遗传物质失活，其特征在于①精液保存将人工挤出的未激活的大黄鱼成熟精液避光保存于2～4℃低温条件下备用；②精液稀释采用预冷的稀释液稀释所述大黄鱼成熟精液，稀释倍数为20～100倍，然后将稀释后的大黄鱼成熟精液放入已预冷到0～5℃的培养皿中，其培养皿中稀释后的大黄鱼成熟精液液体厚度为0.1～0.3cm；其中按重量体积百分比计所述预冷的稀释液成份为NaCl 0.60～0.80％，KCl 0.03～0.05％，CaCl2，0.01～0.03％，葡萄糖0.05～0.10％；pH，7.0～7.3；稀释液预冷到0～5℃；③精子遗传物质失活紫外光...

【专利技术属性】
技术研发人员：许建和，尤锋，张培军，吴雄飞，徐永立，蒋宏雷，
申请(专利权)人：中国科学院海洋研究所，
类型：发明
国别省市：95[中国|青岛]