本发明专利技术公开了具有细胞免疫保护功能的鼠疫菌蛋白及其编码基因与应用。其目的是提供在鼠疫菌感染和免疫过程中能够刺激Ｔ细胞免疫反应，并且能够产生细胞免疫保护功能的蛋白与编码基因及其在制备鼠疫疫苗中的应用。实验证明，本发明专利技术的蛋白在鼠疫菌的感染和免疫过程中能够刺激Ｔ细胞免疫反应，并且能够产生免疫保护作用。可以本发明专利技术的蛋白或基因作为活性成分制备鼠疫疫苗，同时将本发明专利技术的蛋白或基因相互或与现有的具有免疫保护作用的Ｆ１、ＬｃｒＶ抗原或基因联合免疫或制备重组融合多价亚单位疫苗或ＤＮＡ疫苗将能增强现有鼠疫疫苗的免疫保护效果和免疫保护范围。本发明专利技术为寻找鼠疫菌具有细胞免疫保护功能的蛋白提供了一种新手段，将在鼠疫的防治中发挥重要作用，应用前景广阔。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及蛋白及相应编码基因与其应用，特别是涉及在鼠疫菌感染和免疫过程中能够刺激T细胞免疫反应，并且能够产生免疫保护功能的蛋白与相应编码基因以及它们在制备鼠疫疫苗中的应用。
技术介绍
鼠疫是由鼠疫耶尔森氏菌引起的一种A类传染病，在历史上曾引起三次世界性的 大流行。2000年世界卫生组织将鼠疫列为重新抬头的传染病，多重耐药鼠疫菌株的产 生以及鼠疫菌可以用做生物武器和生物恐怖的可能给鼠疫菌的预防、治疗带来了困 难。有效的疫苗接种能够阻断鼠疫的传播，达到最终消灭鼠疫的目的。但是，迄今为 止，还没有一种能够在大范围内使用而且切实有效的鼠疫疫苗。目前已研究的鼠疫疫 苗包括灭活全菌苗、减毒活疫苗、重组蛋白亚单位疫苗与核酸DNA疫苗等。灭活及减 毒活疫苗在20世纪亚洲鼠疫流行地区中的应用十分广泛，免疫原性与反应性的变异 以及短期的保护力意味着通过在整个疫区接种这类疫苗来防御鼠疫并不可行。鼠疫亚 单位疫苗和DNA疫苗的研究主要集中在鼠疫耶尔森氏菌已知的两个主要保护性抗原F1 (荚膜抗原)抗原(Andrews GP, Heath DG, Anderson GW, Jr., Welkos SL， Friedlander AM: Fraction 1 capsular antigen (Fl) purification from _Tej\si/ fa peso's C092 and from an ^sc力er/c力/s co7_z' recombinant strain and efficacy against lethal plague challenge, i/ /ect /層/ 1996， 64(6) :2180-2187)和LcrV(V抗原)(Anderson GW， Jr., Leary SE， Williamson ED， Titball RW， Welkos SL, Worsham PL, Friedlander AM: Recombinant V antigen protects mice against pneumonic and bubonic plague caused by Fl—capsule—positive and -negative strains of rarsy/w.s /"/ecf /層/2 1996， 64(11) :4580-4585)上。Fl抗原由鼠疫耶尔森氏菌pMT 质粒上的Fl操纵子编码，以多聚体的形式在细胞表面形成荚膜，起到抗吞噬细胞吞 噬的功能。Fl抗体通过阻断Fl蛋白的抗吞噬作用从而起到免疫保护作用(Du Y， Rosqvist R， Forsberg A: Role of fraction 1 antigen of yei-si/^'a /jesfis in inhibition of phagocytosis. Zn/e" /厕"2002， 70 (3) : 1453-1460) 。 V抗原是一 种多功能蛋白，与鼠疫耶尔森氏菌的抗吞噬能力有关，具有免疫保护和免疫抑制作用 (Pettersson J， Holmstrom A， Hill J, Leary S， Frithz-Lindsten E， von Euler-Matell A， Carlsson E， Titball R， Forsberg A， Wolf-Watz H: The V-antigen of fersi7w'3 is surface exposed before target cell contact and involved in virulence protein translocation. #cJ #z.c_roZ iW 1999, 32(5) :961-976)。基于 鼠疫菌已知的具有免疫保护性的蛋白亚单位Fl与LcrV抗原基础上的疫苗对腺型鼠疫 具有理想的保护效果，由USAMRIID研制的Fl、 V融合亚单位疫苗已经在鼠和部分非人类灵长动物体内被证明对鼠疫有效；在英国，重组F1、 V蛋白联合亚单位疫苗己经 完成在人类的一期安全性试验，正在进行二期试验(Williamson, E. D., Flick-Smith， H. C. ， Lebutt, C. et a丄 Human immune response to a plague vaccine comprising recombinant Fl and V antigens, /"/e" /顺朋2005， 73(6) :3598-3608)。但是 这类疫苗对肺型鼠疫的免疫保护效果还有待进一步提高(M. L. Pitt, Animal Models and Correlates of Protection for Plague Vaccines Workshop, Gaithersburg, MD， 13 to 14 October 2004， http://www.fda.gov/cber/minutes /workshop-min. htm)，而且，Fr鼠疫菌株同样能在人类引起感染，LcrV抗原存在血 清学变异。除体液免疫外，细胞免疫是鼠疫免疫的一个重要的组成部分。同时能够刺激机体 产生体液免疫和细胞免疫的疫苗将能更有效地预防鼠疫。目前，关于鼠疫感染后细胞 免疫的研究还很少，最近的研究发现，鼠疫菌在感染过程中产生的T细胞免疫不仅仅 只针对Fl和LcrV蛋白，其它蛋白在鼠疫菌的细胞免疫保护过程中可能起到作用(Philipovskiy AV, Smiley ST， Vaccination with live Fersim'a pe边.s primes CD4 and CD8 T cells that synergistically protect against lethal pulmonary _K 戸"s infection. T) /"e" /應"2007， 75(2) :878-885)。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供在鼠疫菌感染和免疫过程中能够刺激T细胞免疫反应，并且 能够产生免疫保护功能的蛋白。本专利技术所提供的具有免疫保护功能的鼠疫菌蛋白，是下述氨基酸残基序列之一 (氨基酸残基序列来源于鼠疫耶尔森氏菌C092株)1)序列表中的SEQIDNO:1 (YP00606);2)序列表中的SEQIDNO:2 (YP00612);3)序列表中的SEQID NO:3 (YP01914);4)序列表中的SEQIDNO:4 (YP03119);5)序列表中的SEQIDNO:5 (YP03047);6)序列表中的SEQIDNO:6 (YP00420);7)序列表中的SEQIDNO:7 (YPCD1.05c);8)序列表中的SEQIDNO:8 (YP01377);9)序列表中的SEQID NO:9 (YP03720);10)将序列表中SEQ ID NO: 1-9的氨基酸残基序列经过一至十个氨基酸残基的 取代、缺失或添加且仍具有免疫保护功能的蛋白。序列表中的SEQ ID NO: 1由480个氨基酸残基组成；序列表中的SEQ ID NO: 2 由381个氨基酸残基组成；序列表中的SEQ ID NO: 3由234个氨基酸残基组本文档来自技高网...
【技术保护点】
具有免疫保护功能的鼠疫菌蛋白，是下述氨基酸残基序列之一：１）序列表中的ＳＥＱＩＤＮＯ：１；２）序列表中的ＳＥＱＩＤＮＯ：２；３）序列表中的ＳＥＱＩＤＮＯ：３；４）序列表中的ＳＥＱＩ ＤＮＯ：４；５）序列表中的ＳＥＱＩＤＮＯ：５；６）序列表中的ＳＥＱＩＤＮＯ：６；７）序列表中的ＳＥＱＩＤＮＯ：７；８）序列表中的ＳＥＱＩＤＮＯ：８；９）序列表中的Ｓ ＥＱＩＤＮＯ：９；１０）将序列表中ＳＥＱＩＤＮＯ：１－９的氨基酸残基序列经过一至十个氨基酸残基的取代、缺失或添加且仍具有免疫保护功能的蛋白。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李蓓，郭景玉，王效义，杨瑞馥，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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