一种抗体亲和层析纯化溶葡萄球菌酶的方法技术

本发明专利技术公开了一种抗体亲和层析纯化溶葡萄球菌酶的方法，包括如下步骤：（１）将含有溶葡萄球菌酶抗体样品通过用缓冲液Ａ平衡好的装有ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ树脂的层析柱，清洗，洗脱，收集洗脱峰冻干；（２）将冻干产物与亲和层析介质混合，制得免疫亲和层析介质；（３）将溶葡萄球菌酶样品通过预先用缓冲液Ａ平衡好的装有免疫亲和层析介质的层析柱；然后用缓冲液Ａ清洗上样后的免疫亲和层析柱；再用缓冲液Ｃ将溶葡萄球菌酶从层析柱上洗脱，收集洗脱峰。本发明专利技术的方法，活性蛋白回收率为８５～９５％，比活性大于１０００Ｕ／ｍｇ，蛋白纯化倍数为３－５以上，纯度可达到９５－９８％，处理速度快、回收率高及重复性好、柱效长且结合效率基本不变。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种酶的纯化方法，具体的说涉及溶葡萄球菌酶的层析纯化方法。技术背景溶葡萄球菌酶(Lysostaphin)是Staphylococus Simulans葡萄球菌分泌于胞外的蛋白产物，分子量为27kDa，含246个氨基酸，是一种肽链内切酶。该酶可切断葡萄球菌细胞壁肽聚糖中的五甘氨酸肽键桥结构，从而达到迅速溶解并杀死细菌的目的。即使是耐药性金黄色葡萄球菌，MRSA及“超级细菌”，溶葡萄球菌酶也同样有很强的杀菌作用，而且不容易诱导产生耐药菌株，有望成为治疗耐药性细菌感染的新型生物制剂。1987年复旦大学在球形芽孢杆菌中表达溶葡萄球菌酶获得成功，并建立了该酶的分离纯化方法，该方法包括使用DEAE纤维素的阴离子层析以及CM纤维素的阳离子层析，由于层析介质刚性弱、蛋白载量低，导致层析过程流速不能太快、只能处理小体积样品，处理 10升样品需要4天的时间，而且在得率、纯度等方面都不理想。申请人:构建了一种从含溶葡萄球菌酶基因的球形芽孢杆菌培养上清中纯化溶葡萄球菌酶的技术(专利公开号CN1743453 ；公开日2006. 3. 8)，该方法包括离子交换和疏水层析，处理45升样品只需2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗体亲和层析纯化溶葡萄球菌酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：　　　　（１）溶葡萄球菌酶抗体的处理：　　　　将含有溶葡萄球菌酶抗体的样品通过预先用缓冲液Ａ平衡好的装有ｐｒｏｔｅｉｎＡ树脂的层析柱，然后用缓冲液Ａ清洗上样后的ｐｒｏｔｅｉｎＡ层析柱；再用ｐＨ２．０～４．０的缓冲液Ｂ将溶葡萄球菌酶抗体从层析柱上洗脱，并收集洗脱峰，冻干；　　　　（２）免疫亲和层析介质的制备　　　　将步骤（１）收集的冻干产物与亲和层析介质混合，偶联反应，制得免疫亲和层析介质；　　　　（３）溶葡萄球菌酶用免疫亲和层析介质进行纯化　　　　将溶葡萄球菌酶样品通过预先用缓冲液Ａ平衡好的装有步骤（２）的免疫亲和层析介质的层析...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：黄晋江，张继恩，黄青山，
申请(专利权)人：上海高科联合生物技术研发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]