一种检测蚯蚓体腔细胞DNA损伤的方法及其运用技术

本发明专利技术提供一种检测蚯蚓体腔细胞DNA损伤的彗星实验方法，该方法包括简易再胶片的制作以及蚯蚓体腔细胞的制备，只是需要铺一层胶就可以进行彗星实验，简单，准确率高，而且效率高。

【技术实现步骤摘要】
一种检测蚯蚓体腔细胞DNA损伤的方法及其运用
本专利技术属于细胞检测领域,特别的,属于利用彗星电泳技术检测细胞损伤的方法。
技术介绍
单细胞凝胶电泳(singlecellgelelectrophoresisAssay，SCGE)也称彗星实验(CometAssay)，1984年由Ostlingn专利技术，是一种检测真核细胞DNA损伤的技术，目前，在遗传毒性试验、环境污染检测和分子流行病学、生态病理学以及DNA损伤修复的基础研究领域有关广泛的应用。其原理是：把包埋于琼脂糖中的细胞裂解，然后把DNA解旋和电泳。如果细胞DNA断裂成碎片，染色后会在显微镜下看到彗星样的结构。主要实验步骤包括：制备单细胞悬液、制胶与铺胶、裂解、解旋、电泳、中和、染色、镜检以及结果分析等。在彗星实验中，凝胶的载体-载胶片至关重要，决定着实验的成败。铺胶后，载胶片要经过：细胞裂解液浸泡溶解细胞、强洗脱力的强碱性溶液(pH13)的浸泡解旋、在强碱性(pH13)电泳液中电泳，中和液中浸泡和超纯水中洗涤等五个步骤，在这些浸泡过程中，凝胶极易从载胶片上漂移、断裂、脱落。当采用多层凝胶方案时，凝胶厚度往往不易控制，凝胶的厚度本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测蚯蚓体腔细胞DNA损伤的彗星实验方法，其中，该方法包括：（1）、提供一种蚯蚓彗星实验载胶片的制备方法，该方法包括：提供普通载玻片(长宽为25.4mm×75.6mm，厚度为1mm‑1.2mm)和玻璃条(长为3‑4mm，宽为1‑2mm)及胶水；在每个载玻片上，沿长轴方向粘牢4个玻璃条，玻璃条间隔相等且分布在载玻片正中间，玻璃条之间的空间即为胶槽，从而得到用于彗星实验的载胶片；其中，所述的4个玻璃条是从所述载玻片的沿短边切割下来的；（2）、一种蚯蚓体腔细胞的制备方法，该方法包括：(1)每处理取蚯蚓2条，用超纯水清洗体表至无脱落物，用吸水纸除去蚯蚓体表水膜；(2)每个2ml离心管放入1只蚯蚓，...

【技术特征摘要】
1.一种检测蚯蚓体腔细胞DNA损伤的彗星实验方法，其中，该方法包括：（1）、提供一种蚯蚓彗星实验载胶片的制备方法，该方法包括：提供普通载玻片(长宽为25.4mm×75.6mm，厚度为1mm-1.2mm)和玻璃条(长为3-4mm，宽为1-2mm)及胶水；在每个载玻片上，沿长轴方向粘牢4个玻璃条，玻璃条间隔相等且分布在载玻片正中间，玻璃条之间的空间即为胶槽，从而得到用于彗星实验的载胶片；其中，所述的4个玻璃条是从所述载玻片的沿短边切割下来的；（2）、一种蚯蚓体腔细胞的制备方法，该方法包括：(1)每处理取蚯蚓2条，用超纯水清洗体表至无脱落物，用吸水纸除去蚯蚓体表水膜；(2)每个2ml离心管放入1只蚯蚓，再加1ml体腔细胞提取液，室温静置5min弃死蚓，得到蚯蚓体腔细胞的粗提液；(3)对粗提液进行三次离心纯化蚯蚓体腔细胞，前两次离心条件为：转速均为2000RPM，时间为达到所需转速时间；...

【专利技术属性】
技术研发人员：李岗，陈列忠，王彥华，蔡磊明，许振岚，张昌鹏，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：浙江,33