一种兽用复方板蓝根注射液的制备方法技术

一种兽用复方板蓝根注射液的制备方法，包括以下步骤：（1）MRS培养基的配制和灭菌；（2）东方醋杆菌的扩大培养；（3）板蓝根、黄芪、党参粗粉的制备；（4）配制发酵培养基；（5）接种和发酵；（6）离心；（7）检测；（8）配制；（9）灌封；（10）灭菌；本发明专利技术提供一种简单、有效、环保、收率高、成本低、效益好的方法，利用东方醋杆菌发酵中草药，提高了多糖的提取率，提纯后的成分多糖可直接作为免疫佐剂，得到的药渣又能够作为益生菌微生态制剂合理利用，整个过程无废物产生，中草药被完全利用，可以完全实现工业化自动化生产。

A method for preparation of Compound Radix Isatidis injection for veterinary use

Preparation method of Compound Radix Isatidis injection for animals, which comprises the following steps: (1) MRS medium preparation and sterilization medium; (2) expand the culture of Oriental Acetobacter; (3) radix, astragalus, Codonopsis coarse powder preparation; (4) preparation of fermentation medium; (5) vaccination and fermentation; centrifugation; (6) (7); (8) preparation; (9) sealing; (10) sterilization; the invention provides a simple and effective method, environmental protection, high yield, low cost and good benefit, Chinese herbal medicine with Oriental Acetobacter fermentation, improve the extraction rate of polysaccharide and after purified components of Polysaccharides can be directly used as adjuvant drug residue and can get reasonable use as probiotics probiotics, the whole process of waste generation, Chinese herbal medicine is fully utilized, can fully industrialized production automation.

【技术实现步骤摘要】
一种兽用复方板蓝根注射液的制备方法
本专利技术属于兽药
，具体涉及一种兽用复方板蓝根注射液的制备方法。
技术介绍
板蓝根为十字花科植物四倍体菘蓝的干燥根，其性寒，味先微甜后苦涩，归心、胃经。具有清热解毒、抗菌抗病毒、预防感冒、利咽之功效；主要用于治疗舌绛紫暗、流行性脑膜炎、肺炎等疾病。板蓝根多糖是板蓝根的主要有效活性成分之一，具有多种生物活性，对特异性免疫和非特异性免疫均有一定的促进作用，是理想的免疫增强剂。它能提高机体免疫系统的功能，不仅能促进T细胞、B细胞、NK细胞、M细胞等免疫细胞的功能，还能促进白间素、干扰素等细胞因子的产生。黄芪来自于豆科植物膜荚黄芪或蒙古黄芪的干燥根，是临床常用的中药，其主要成分黄芪多糖具有提高免疫力、抗病毒、抗菌、抗氧化、调节血糖、保肝护肾等多种药效作用。党参为中国常用的传统补益药，具有补中益气、健脾益肺之功效。研究表明，党参含多种糖类、酚类、甾醇、挥发油、皂甙及微量生物碱，具有增强免疫力、扩张血管、降压、改善微循环、增强造血功能等作用，此外对化疗放疗引起的白细胞下降有提升作用。目前，市场上兽用板蓝根注射液多为单方制剂，而本专利技术选用板蓝根、黄芪、党参共同提取而制备的复方板蓝根注射液。现有技术中常用的提取方法主要有：水提醇沉法、微波提取法、碱浸提法、酶法提取法、超滤法和超声提取等，其中水提醇沉法应用最广，然而这些从药材中直接提取的有效成分的方法存在提取率低、稳定性差、纯化难度大、操作步骤复杂、周期长等问题。近年来利用益生菌发酵的中草药已成为研究的热点领域，目前已有乳酸菌、芽孢菌、酵母菌发酵中草药的报道。研究表明，微生物具有非常丰富的酶系统，具有强大的分解转化物质的能力，中草药被发酵后，其有效成分和活性物质被最大限度的释放出来，同时还可以产生新的活性物质。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供一种兽用复方板蓝根注射液的制备方法。本专利技术采用的技术方案为：一种兽用复方板蓝根注射液的制备方法，包括以下步骤：（1）MRS培养基的配制和灭菌：配制MRS液体培养基，并置于灭菌柜中灭菌；（2）东方醋杆菌的扩大培养：将东方醋杆菌接种到灭菌过的MRS液体培养基中进行扩大培养；（3）板蓝根、黄芪、党参粗粉的制备：取一定量的板蓝根、黄芪和党参置于烘箱中烘干，然后粉碎、过筛；（4）配制发酵培养基：配制含有板蓝根、黄芪和党参粗粉的发酵培养基，并置于灭菌柜中灭菌；（5）接种和发酵：将扩大培养后的东方醋杆菌接种到含有板蓝根、黄芪和党参粗粉的发酵培养基中发酵；（6）离心：将发酵得到的发酵液离心，并用水洗涤沉淀，再次离心，合并两次离心的上清液；（7）检测：将离心后的上清液减压浓缩干燥，得干燥物，检测干燥物中的多糖成分含量；（8）配制：取步骤（7）中的干燥物，添加适量的注射用水，再添加甘露醇，用1%的氢氧化钠溶液调节pH至5.5-6.0，加注射用水至1000ML，用0.22μm的微孔膜过滤器过滤，得兽用复方板蓝根注射液；（9）灌封：将得到的兽用复方板蓝根注射液用拉丝灌封机灌装、封口，灌装入10ML洁净玻璃安瓿瓶中，每支灌装10.0-10.2ML；（10）灭菌：将上述灌装封口后的药支送入蒸汽灭菌柜中于100℃蒸汽灭菌30分钟，得成品。所述的步骤（1）中的MRS液体培养基是由下列重量份的原料制成的：酪蛋白酶消化物10份，牛肉膏粉10份，酵母膏粉4份，柠檬酸三铵2份，乙酸钠5份，七水合硫酸镁0.2份，四水合硫酸锰0.05份，磷酸二氢钾2份，葡萄糖2份，吐温-801份，其余为蒸馏水。所述的步骤（1）中灭菌柜的温度是121℃，灭菌时间是20分钟。所述的步骤（2）中扩大培养的温度是37℃，初始pH为5.7±0.2，生长周期为24-32h。所述的步骤（3）中烘箱的温度为50℃，烘干时间为4小时，粉碎后过40目筛网。所述的步骤（4）中发酵培养基是由下列重量份的原料组成的：胰蛋白胨4-6份，酵母粉4-6份，磷酸氢二钾1-3份，磷酸二氢钾1-3份，硫酸镁0.2-1份，黄芪粉20-30份，板蓝根粉20-30粉，党参粉10-20份，其余为蒸馏水；配制好后分装于500ML的三角瓶中，调整初始pH为6.5，于121℃灭菌15分钟。所述的步骤（5）中东方醋杆菌的接种量为1%-3%。所述的步骤（6）中离心机的转速是3500-5000转/分钟，离心时间是5-15分钟。所述的步骤（7）中的上清液在0.08MPa的真空干燥箱中浓缩干燥5小时，烘箱的温度是50℃，多糖成分含量的测定选用间接碘量法。东方醋杆菌的保藏名称为AcetobacterorientalisT1-1，于2015年7月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:M2015455。本专利技术的有益效果是：本专利技术提供一种简单、有效、环保、收率高、成本低、效益好的方法，利用东方醋杆菌发酵中草药，提高了多糖的提取率，提纯后的成分多糖可直接作为免疫佐剂，得到的药渣又能够作为益生菌微生态制剂合理利用，整个过程无废物产生，中草药被完全利用，可以完全实现工业化自动化生产。具体实施方式一种兽用复方板蓝根注射液的制备方法，包括以下步骤：（1）MRS培养基的配制和灭菌：配制MRS液体培养基，并置于灭菌柜中灭菌；（2）东方醋杆菌的扩大培养：将东方醋杆菌接种到灭菌过的MRS液体培养基中进行扩大培养；（3）板蓝根、黄芪、党参粗粉的制备：取一定量的板蓝根、黄芪和党参置于烘箱中烘干，然后粉碎、过筛；（4）配制发酵培养基：配制含有板蓝根、黄芪和党参粗粉的发酵培养基，并置于灭菌柜中灭菌；（5）接种和发酵：将扩大培养后的东方醋杆菌接种到含有板蓝根、黄芪和党参粗粉的发酵培养基中发酵；（6）离心：将发酵得到的发酵液离心，并用水洗涤沉淀，再次离心，合并两次离心的上清液；（7）检测：将离心后的上清液减压浓缩干燥，得干燥物，检测干燥物中的多糖成分含量；（8）配制：取步骤（7）中的干燥物，添加适量的注射用水，再添加甘露醇，用1%的氢氧化钠溶液调节pH至5.5-6.0，加注射用水至1000ML，用0.22μm的微孔膜过滤器过滤，得兽用复方板蓝根注射液；（9）灌封：将得到的兽用复方板蓝根注射液用拉丝灌封机灌装、封口，灌装入10ML洁净玻璃安瓿瓶中，每支灌装10.0-10.2ML；（10）灭菌：将上述灌装封口后的药支送入蒸汽灭菌柜中于100℃蒸汽灭菌30分钟，得成品。所述的步骤（1）中的MRS液体培养基是由下列重量份的原料制成的：酪蛋白酶消化物10份，牛肉膏粉10份，酵母膏粉4份，柠檬酸三铵2份，乙酸钠5份，七水合硫酸镁0.2份，四水合硫酸锰0.05份，磷酸二氢钾2份，葡萄糖2份，吐温-801份，其余为蒸馏水。所述的步骤（1）中灭菌柜的温度是121℃，灭菌时间是20分钟。所述的步骤（2）中扩大培养的温度是37℃，初始pH为5.7±0.2，生长周期为24-32h。所述的步骤（3）中烘箱的温度为50℃，烘干时间为4小时，粉碎后过40目筛网。所述的步骤（4）中发酵培养基是由下列重量份的原料组成的：胰蛋白胨4-6份，酵母粉4-6份，磷酸氢二钾1-3份，磷酸二氢钾1-3份，硫酸镁0.2-1份，黄芪粉20-30份，板蓝根粉20-30粉，党参粉10-20份，其余为蒸馏水；配制好后分装于500ML的三角瓶中，调整初始pH为本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种兽用复方板蓝根注射液的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）MRS培养基的配制和灭菌：配制MRS液体培养基，并置于灭菌柜中灭菌；（2）东方醋杆菌的扩大培养：将东方醋杆菌接种到灭菌过的MRS液体培养基中进行扩大培养；（3）板蓝根、黄芪、党参粗粉的制备：取一定量的板蓝根、黄芪和党参置于烘箱中烘干，然后粉碎、过筛；（4）配制发酵培养基：配制含有板蓝根、黄芪和党参粗粉的发酵培养基，并置于灭菌柜中灭菌；（5）接种和发酵：将扩大培养后的东方醋杆菌接种到含有板蓝根、黄芪和党参粗粉的发酵培养基中发酵；（6）离心：将发酵得到的发酵液离心，并用水洗涤沉淀，再次离心，合并两次离心的上清液；（7）检测：将离心后的上清液减压浓缩干燥，得干燥物，检测干燥物中的多糖成分含量；（8）配制：取步骤（7）中的干燥物，添加适量的注射用水，再添加甘露醇，用1%的氢氧化钠溶液调节pH至5.5‑6.0，加注射用水至1000ML，用0.22μm的微孔膜过滤器过滤，得兽用复方板蓝根注射液；（9）灌封：将得到的兽用复方板蓝根注射液用拉丝灌封机灌装、封口，灌装入10ML洁净玻璃安瓿瓶中，每支灌装10.0‑10.2ML；（10）灭菌：将上述灌装封口后的药支送入蒸汽灭菌柜中于100℃蒸汽灭菌30分钟，得成品。...

【技术特征摘要】
1.一种兽用复方板蓝根注射液的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）MRS培养基的配制和灭菌：配制MRS液体培养基，并置于灭菌柜中灭菌；（2）东方醋杆菌的扩大培养：将东方醋杆菌接种到灭菌过的MRS液体培养基中进行扩大培养；（3）板蓝根、黄芪、党参粗粉的制备：取一定量的板蓝根、黄芪和党参置于烘箱中烘干，然后粉碎、过筛；（4）配制发酵培养基：配制含有板蓝根、黄芪和党参粗粉的发酵培养基，并置于灭菌柜中灭菌；（5）接种和发酵：将扩大培养后的东方醋杆菌接种到含有板蓝根、黄芪和党参粗粉的发酵培养基中发酵；（6）离心：将发酵得到的发酵液离心，并用水洗涤沉淀，再次离心，合并两次离心的上清液；（7）检测：将离心后的上清液减压浓缩干燥，得干燥物，检测干燥物中的多糖成分含量；（8）配制：取步骤（7）中的干燥物，添加适量的注射用水，再添加甘露醇，用1%的氢氧化钠溶液调节pH至5.5-6.0，加注射用水至1000ML，用0.22μm的微孔膜过滤器过滤，得兽用复方板蓝根注射液；（9）灌封：将得到的兽用复方板蓝根注射液用拉丝灌封机灌装、封口，灌装入10ML洁净玻璃安瓿瓶中，每支灌装10.0-10.2ML；（10）灭菌：将上述灌装封口后的药支送入蒸汽灭菌柜中于100℃蒸汽灭菌30分钟，得成品。2.根据权利要求1所述的一种兽用复方板蓝根注射液的制备方法，其特征在于：所述的步骤（1）中的MRS液体培养基是由下列重量份的原料制成的：酪蛋白酶消化物10份，牛肉膏粉10份，酵母膏粉4份，柠檬酸三铵2份，乙酸钠5份，七水合硫酸镁0.2份，四水合硫酸锰0.05份，磷酸二...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭建钊，李春慧，
申请(专利权)人：河南黑马动物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：河南,41