一种基于铂/石墨烯复合材料进行基因检测的比色方法技术
A colorimetric method based on platinum / graphene composite for gene detection
A colorimetric method based on platinum / graphene composite for gene detection, which belongs to the field of biological detection. The invention includes: synthesis of platinum / graphene nanocomposites, asymmetric PCR amplification of template DNA molecules, and construction of colorimetric detection method. The template DNA asymmetric PCR amplification of single strand DNA products, with the help of Pt / graphene catalysis of nano composite materials and the adsorption capacity of single stranded DNA, DNA molecules with different contents of the nano composite material of different salinity, and the stability and catalytic ability changing, catalyzed the color difference according to DNA, the quantitative relationship between concentration and UV absorption value of light can achieve the detection of DNA. This method is simple, low cost, high sensitivity and specificity. Colorimetric results can be directly observed by the naked eye, without professional data analysis, and has a wider application in the field of gene detection.
【技术实现步骤摘要】
一种基于铂/石墨烯复合材料进行基因检测的比色方法
本专利技术属于生物检测领域，具体涉及一种基于铂/石墨烯复合材料进行基因检测的比色方法。
技术介绍
DNA是遗传信息的承担者，是生物遗传的主要物质基础，每一种生物体都具有独一无二的核酸序列，因此可以通过对目标物的DNA检测以达到检测目标物的目的。DNA检测在许多领域都有广泛的应用，在临床诊断方面，可以通过检测细菌病毒病原体的DNA进行致病菌疾病的检测，目前，很多疾病的序列信息已被人们掌握，可以通过及早和准确地探测DNA序列来有效抗击这些疾病。在食品安全和环境保护领域，可以通过对DNA的检测来实现对有害微生物、转基因产品等物质的检测。因此，不断开发新型的简单、快速、超灵敏的DNA检测技术以满足各领域的检测需求显得尤为重要。荧光定量PCR是对DNA进行检测与定量的一种传统的有效方法，然而通过PCR得到的实验数据需要精细而专业的分析过程，增加了时间消耗，并且基于染料法的实时荧光定量PCR，由于染料和任意双链DNA的非特异性结合，以及染料易发生光漂白而失去荧光特性的缺陷，会影响最终定量的准确性。近年来，随着纳米技术的不断发展...
【技术保护点】
一种基于铂/石墨烯复合材料进行基因检测的比色方法，其特征在于包括如下步骤：（1）铂/石墨烯纳米复合材料的合成以六水合氯铂酸和氧化石墨烯为原料进行铂/石墨烯纳米复合材料的合成，将六水合氯铂酸和氧化石墨烯水溶液以8:1的质量比混合，使得体系的总体积为500μL，用1M NaOH将溶液调整到pH=10，然后将其孵育3h，并且每隔30min超声一次，每次超声时间为1min；孵育完成后，在搅拌的状态下将浓度为50mM的NaBH4 500μL逐滴加入到反应体系中，将其在缓慢振荡的状态下过夜孵育得到黑色的产物；将产物在离心转速10000r/min的条件下离心10min，用超纯水重悬并过0...
【技术特征摘要】
1.一种基于铂/石墨烯复合材料进行基因检测的比色方法，其特征在于包括如下步骤：（1）铂/石墨烯纳米复合材料的合成以六水合氯铂酸和氧化石墨烯为原料进行铂/石墨烯纳米复合材料的合成，将六水合氯铂酸和氧化石墨烯水溶液以8:1的质量比混合，使得体系的总体积为500μL，用1MNaOH将溶液调整到pH=10，然后将其孵育3h，并且每隔30min超声一次，每次超声时间为1min；孵育完成后，在搅拌的状态下将浓度为50mM的NaBH4500μL逐滴加入到反应体系中，将其在缓慢振荡的状态下过夜孵育得到黑色的产物；将产物在离心转速10000r/min的条件下离心10min，用超纯水重悬并过0.22μm孔径的无菌过滤膜进行过滤洗涤，洗涤3次后将得到的纯化产物重悬到超纯水中，经过超声分散后置于室温保存；（2）模板DNA分子进行不对称PCR扩增将模板DNA分子配置成1×10-9M的起始浓度，将其10倍梯度稀释10个浓度，以每种浓度的DNA分子为模板进行不对称PCR扩增，其中还包括一个不加DNA模板的空白对照；扩增体系组成为：2×PCRTaqMix10μL，1mM前引物0.5μL，10μM的后引物0.5μL，模板DNA分子2μL，超纯水7μL，总的反应体系为20μL；扩增条件为：95℃预变性30s，95℃变性5s、60℃退火和延伸30s，总共为15~30个循环；（3）比色检测方法的构建将步骤（1）合成的铂/石墨烯纳米复合材料用孵育缓冲液稀释1000倍，分装到1.5mL离心管中每管200μL，然后分别在每管中加入步骤（2）的扩增产物，在37℃孵育1~2h后，以5000r/min的转...
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