一种从生物发酵液中同时提取β‑聚苹果酸和普鲁兰多糖的方法技术

本发明专利技术公开了一种从生物发酵液中同时提取β‑聚苹果酸和普鲁兰多糖的方法，工艺步骤为：1）制备β‑聚苹果酸发酵液；2）板框过滤，然后进行活性碳脱色；3）热变性除蛋白；4）将除蛋白后的发酵液通过超滤膜进行超滤，取截留液，旋蒸浓缩，冷冻干燥，得微黄色粉末为普鲁兰多糖；5)向超滤后的透过液中加入1%~3%（v/v）普鲁兰酶，进行酶解；6）酶解后的溶液进行超滤，取超滤所得截留液，通过旋蒸浓缩，冷冻干燥，得白色PMLA粉末。本发明专利技术是利用膜分离技术从PMLA发酵液中同时获得PMLA和副产物普鲁兰多糖的提取工艺。整个过程不再添加有机溶剂进行醇沉，主要是利用物理的方法除去发酵液中的杂质，减少普鲁兰多糖废弃造成的环境污染及β‑聚苹果酸的生产成本。

A method for the simultaneous extraction of beta polymalic acid and pullulan from biological fermentation broth

The invention discloses a method for the simultaneous extraction of beta polymalic acid and pullulan polysaccharide from fermentation broth, the process comprises the following steps: 1) preparing beta polymalic acid fermentation liquid; 2) and discoloring plate filtration, activated carbon; 3) in addition to thermal denaturation of protein; 4) in fermentation after the liquid protein by ultrafiltration of ultrafiltration membrane, take the retentate, rotary evaporation concentration, freeze drying, micro yellow powder for pullulan; 5) to the liquid through adding 1%~3% after ultrafiltration (v/v) pullulanase, enzymolysis; 6) solution after enzymatic hydrolysis were obtained by ultrafiltration, the retentates, through rotary evaporation concentration, freeze drying, white PMLA powder. The present invention is PMLA and the by-product of pullulan polysaccharide extraction technology also obtained from PMLA fermentation liquor by membrane separation technology. The whole process is no longer adding organic solvent of alcohol precipitation, mainly to remove impurities in fermentation liquid using physical method, reduce environmental pollution and waste of pullulan caused by beta polymalic acid production cost.

【技术实现步骤摘要】
一种从生物发酵液中同时提取β-聚苹果酸和普鲁兰多糖的方法
本专利技术属于生物法制备和提取
，尤其是涉及一种从生物发酵液中同时提取β-聚苹果酸和普鲁兰多糖的方法。
技术介绍
β-聚苹果酸（poly(β-)malicacid），简称PMLA，是一种水溶性脂肪族聚酯，是苹果酸的聚合物。作为一种水溶性脂肪族聚酯,PMLA具有高度的水溶性、生物相容性、生物可降解性、生物可吸收性、无免疫原性和可化学衍生性,PMLA可在水溶液中自发或由酶促降解为小分子苹果酸,而苹果酸单体可被人体吸收并无任何毒副作用,这些性质使得β-聚苹果酸可作为药物载体、微胶囊材料、生物医学材料等直接用于人体，还可用于化妆产品、食品包装等材料。普鲁兰多糖是出芽短梗霉(Aureobsidiumpullulan)发酵产β-聚苹果酸时产生的胞外多糖副产物,易溶于水,不溶于乙醇，是一种水溶性的不定形葡聚糖并作为水溶性多糖的模式多糖，分子量在2万-200万，可用作乳化剂、增稠剂、成膜剂、稳定剂等，已广泛应用于生物医药、食品、轻工、化工和石油等领域，是一种很有前景的工业用多糖。目前β-聚苹果酸的生物合成主要方式是微生物发酵。研究发现粘本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从生物发酵液中同时提取β‑聚苹果酸和普鲁兰多糖的方法，其特征在于，包括以下工艺步骤：1）制备β‑聚苹果酸发酵液；2）将步骤1）的β‑聚苹果酸发酵液进行过滤，脱色；3）将步骤2）脱色后的发酵液进行热变性除蛋白，将发酵液调pH至7.5，在90°C下使蛋白质沉淀，时间为30 ~60min，然后通过抽滤将蛋白质去除；4）将除蛋白后的发酵液通过超滤膜进行超滤，取超滤后所得截留液，通过旋蒸浓缩，冷冻干燥，得到微黄色粉末为普鲁兰多糖；5)向步骤4）中的超滤后的透过液中加入1%~3%（v/v）普鲁兰酶，操作温度40~50℃下进行酶解反应2小时；6）将步骤5）酶解后的溶液通过超滤膜进行超滤，取超滤所得截留液...

【技术特征摘要】
1.一种从生物发酵液中同时提取β-聚苹果酸和普鲁兰多糖的方法，其特征在于，包括以下工艺步骤：1）制备β-聚苹果酸发酵液；2）将步骤1）的β-聚苹果酸发酵液进行过滤，脱色；3）将步骤2）脱色后的发酵液进行热变性除蛋白，将发酵液调pH至7.5，在90°C下使蛋白质沉淀，时间为30~60min，然后通过抽滤将蛋白质去除；4）将除蛋白后的发酵液通过超滤膜进行超滤，取超滤后所得截留液，通过旋蒸浓缩，冷冻干燥，得到微黄色粉末为普鲁兰多糖；5)向步骤4）中的超滤后的透过液中加入1%~3%（v/v）普鲁兰酶，操作温度40~50℃下进行酶解反应2小时；6）将步骤5）酶解后的溶液通过超滤膜进行超滤，取超滤所得截留液，通过旋蒸浓缩，冷冻干燥，得白色PMLA粉末。2.根据权利要求1所述的一种从生物发酵液中同时提取β-聚苹果酸和普鲁兰多糖的方法，其特征在于，所述的制备β-聚苹果酸发酵液包括以下步骤：1）菌种活化：将出芽短梗霉A.pullulansCGMCC3337菌株转接到固体斜面培养基上于25℃恒温培养箱中培养4-5天；2）种子培养：取出活化后的斜面种子，用无菌生理盐水将斜面的孢子洗下，制成孢子悬液；然后按照10%（v/v）的接种量，接入到种子培养基中；培养条件：温度25℃，转速200r/min，培养40个小时至对数生长期；3）发酵培养：将种子培养液以10%接种量接入发酵培养基中，在25℃，200r/min条件下培养发酵144h后得β-聚苹果酸的发酵液。3.根据权利要求1所述的一种从生物发酵液中同时提取β-聚苹果酸和普鲁兰多糖的方法，其特征在于，其中步骤2）中板框过滤采用800~1000目滤布预涂硅藻土，硅藻土加入量为1%~2%（m/v）。4.根据权利要求1所述的一种从生物发酵液中同时提取β-聚苹果酸和普鲁兰多糖的方法，其特征在于，其中步骤2）中的脱色是采用活性...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔长晟，王帅，李雪，张卫，孙雨，
申请(专利权)人：天津北洋百川生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12