一种用于分离贴壁细胞的消化液及其分离方法技术

本发明专利技术公开了一种用于分离贴壁细胞的消化液，包括组分A、组分B和组分C；所述组分A包括以下原料：NaCl、KCl、葡萄糖、KH2PO4、Na2HPO4；所述组分B包括以下原料：分散酶、木瓜蛋白酶、NaCl、KCl、葡萄糖、KH2PO4、Na2HPO4；所述组分C包括以下原料：NaCl、KCl、CaCl2、MgCl2、4‑羟乙基哌嗪乙磺酸、葡萄糖。本发明专利技术对贴壁细胞的解离效率高，对细胞的损伤比较小，毒性小，细胞的存活率很高；可以进行多次细胞传代而不影响细胞的活力；可用于无血清培养贴壁细胞的解离实验；操作简单，减少了不同操作者之间的实验结果的差异。

A digestion solution for separation of adherent cells and its separation method

The invention discloses a method for separating digested adherent cells, including component A, component B and component C; the component A comprises the following raw materials: NaCl, KCl, KH2PO4, glucose, Na2HPO4; the component B comprises the following raw materials: disperse enzyme, papain, NaCl, KCl, KH2PO4, glucose, Na2HPO4; the component C comprises the following raw materials: NaCl, KCl, CaCl2, MgCl2, 4 HEPES, glucose. The invention of the dissociation efficiency of adherent cells, damage to the cells is relatively small, low toxicity, cell survival rate is high; can perform multiple cells without affecting cell viability; can be used without dissociation experiment of adherent cells cultured in serum; simple operation, reduces the discrepancy between the experimental results with the operator the.

【技术实现步骤摘要】
一种用于分离贴壁细胞的消化液及其分离方法
本专利技术涉及细胞培养
，具体是一种用于分离贴壁细胞的消化液及其分离方法。
技术介绍
细胞培养是指从体内组织取出细胞模拟体内生存环境，在无菌、适当温度及酸碱度和一定的营养条件下，使其生长繁殖并维持结构何功能的一种培养技术。从体内取出的细胞首次培养即为原代培养，这是细胞培养的最初和必经阶段。当原代培养细胞生长到一定时期，受到群体环境限制，就需要转移到另一个容器才能继续生长，这个过程称为传代或继代培养。目前，用于分离贴壁细胞的消化液及其分离方法仍然存在以下缺点：对贴壁细胞的解离效率低，对细胞的损伤比较大，毒性大，细胞的存活率较低；解离后的贴壁细胞，进行多次细胞传代会影响细胞的活力；操作繁琐，不同操作者之间的实验结果的差异大。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于分离贴壁细胞的消化液及其分离方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种用于分离贴壁细胞的消化液，包括组分A、组分B和组分C；组分A为细胞洗涤液，组分B为细胞解离液，组分C为细胞重悬液；所述组分A包括以下重量份数的原料：NaCl5-11份、KCl0.1-1份、葡萄糖0.1-2份、KH2PO40.01-0.1份、Na2HPO40.02-0.05份；所述组分B包括以下重量份数的原料：分散酶0.01-0.08份、木瓜蛋白酶0.01-0.08份、NaCl500-900份、KCl20-70份、葡萄糖20-200份、KH2PO42-8份、Na2HPO42-8份；所述组分C包括以下重量份数的原料：NaCl4-10份、KCl0.1-1份、CaCl20.2-0.5份、MgCl20.1-0.5份、4-羟乙基哌嗪乙磺酸1-4份、葡萄糖0.5-2份。作为本专利技术进一步的方案：所述组分A包括以下重量份数的原料：NaCl8份、KCl0.4份、葡萄糖1份、KH2PO40.06份、Na2HPO40.0475份。作为本专利技术进一步的方案：所述组分B包括以下重量份数的原料：分散酶0.01-0.05份、木瓜蛋白酶0.02-0.05份、NaCl800份、KCl40份、葡萄糖100份、KH2PO46份、Na2HPO44.75份。作为本专利技术进一步的方案：所述组分C包括以下重量份数的原料：NaCl8.8份、KCl0.224份、CaCl20.44份、MgCl20.19份、4-羟乙基哌嗪乙磺酸2.38份、葡萄糖0.9份。一种用于分离贴壁细胞的消化液的分离方法，包括以下步骤：(1)去除细胞培养基，用组分A洗涤细胞1-3次；(2)然后加入组分B，常温静止孵育细胞2-5分钟，收集解离的细胞到无菌的离心管里；(3)取100-300g解离的细胞，进行离心2-6分钟，去除上清，然后加入组分C，用枪头或者移液管轻轻吹打重悬细胞成单细胞悬液，然后进行细胞计数和细胞接种。作为本专利技术进一步的方案：步骤(1)去除细胞培养基，用组分A洗涤细胞2次。作为本专利技术进一步的方案：步骤(3)取200g解离的细胞，进行离心5分钟，去除上清，然后加入组分C，用枪头或者移液管轻轻吹打重悬细胞成单细胞悬液，然后进行细胞计数和细胞接种。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术对贴壁细胞的解离效率高，解离时间是2-5分钟；对细胞的损伤比较小，毒性小，细胞的存活率很高；本专利技术解离后的贴壁细胞，可以进行多次细胞传代而不影响细胞的活力；本专利技术没有动物源成分，可以用于无血清培养贴壁细胞的解离实验；本专利技术操作简单，减少了不同操作者之间的实验结果的差异。附图说明图1为正常人表皮黑素细胞消化4倍图。图2为正常人表皮黑素细胞消化10倍图。图3为正常人表皮角质形成细胞消化4倍图。图4为正常人表皮角质形成细胞消化10倍图。图5为正常人皮肤成纤维细胞消化4倍图。图6为正常人皮肤成纤维细胞消化10倍图。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。实施例1一种用于分离贴壁细胞的消化液，包括组分A、组分B和组分C；组分A为细胞洗涤液，组分B为细胞解离液，组分C为细胞重悬液；所述组分A包括以下重量份数的原料：NaCl5份、KCl0.1份、葡萄糖0.1份、KH2PO40.01份、Na2HPO40.02份；所述组分B包括以下重量份数的原料：分散酶0.01份、木瓜蛋白酶0.01份、NaCl500份、KCl20份、葡萄糖20份、KH2PO42份、Na2HPO42份；所述组分C包括以下重量份数的原料：NaCl4份、KCl0.1份、CaCl20.2份、MgCl20.1-份、4-羟乙基哌嗪乙磺酸1份、葡萄糖0.5份。一种用于分离贴壁细胞的消化液的分离方法，包括以下步骤：(1)去除细胞培养基，用组分A洗涤细胞1次；(2)然后加入组分B，常温静止孵育细胞2分钟，收集解离的细胞到无菌的离心管里，细胞孵育时间需要灵活把握，不同细胞需要的孵育时间不同，比如293T细胞需要的孵育时间比较短，Hela细胞稍微长些等，判断的标准是细胞全部脱离培养皿或者培养瓶即可；(3)取100g解离的细胞，进行离心2分钟，去除上清，然后加入组分C，用枪头或者移液管轻轻吹打重悬细胞成单细胞悬液，然后进行细胞计数和细胞接种。实施例2一种用于分离贴壁细胞的消化液，包括组分A、组分B和组分C；组分A为细胞洗涤液，组分B为细胞解离液，组分C为细胞重悬液；所述组分A包括以下重量份数的原料：NaCl11份、KCl1份、葡萄糖2份、KH2PO40.1份、Na2HPO40.05份；所述组分B包括以下重量份数的原料：分散酶0.08份、木瓜蛋白酶0.08份、NaCl900份、KCl70份、葡萄糖200份、KH2PO48份、Na2HPO48份；所述组分C包括以下重量份数的原料：NaCl10份、KCl1份、CaCl20.5份、MgCl20.5份、4-羟乙基哌嗪乙磺酸4份、葡萄糖2份。一种用于分离贴壁细胞的消化液的分离方法，包括以下步骤：(1)去除细胞培养基，用组分A洗涤细胞3次；(2)然后加入组分B，常温静止孵育细胞5分钟，收集解离的细胞到无菌的离心管里，细胞孵育时间需要灵活把握，不同细胞需要的孵育时间不同，比如293T细胞需要的孵育时间比较短，Hela细胞稍微长些等，判断的标准是细胞全部脱离培养皿或者培养瓶即可；(3)取300g解离的细胞，进行离心6分钟，去除上清，然后加入组分C，用枪头或者移液管轻轻吹打重悬细胞成单细胞悬液，然后进行细胞计数和细胞接种。实施例3一种用于分离贴壁细胞的消化液，包括组分A、组分B和组分C；组分A为细胞洗涤液，组分B为细胞解离液，组分C为细胞重悬液；所述组分A包括以下重量份数的原料：NaCl8份、KCl0.4份、葡萄糖1份、KH2PO40.06份、Na2HPO40.0475份；所述组分B包括以下重量份数的原料：分散酶0.01-0.05份、木瓜蛋白酶0.02-0.05份、NaCl800份、KCl40份、葡萄糖100份、KH2PO46份、Na2HPO44.75份；所述组分C包括以下重量份数的原料：NaCl8.8份、KCl0.224份、CaCl20.44份、MgCl20.19份、4-羟乙基哌嗪乙磺酸2.38份、葡萄糖0.9份。一种用于分离贴壁细胞的消化液的分离方法，包括以下步骤：(1)去除细胞培养基本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于分离贴壁细胞的消化液，其特征在于，包括组分A、组分B和组分C；组分A为细胞洗涤液，组分B为细胞解离液，组分C为细胞重悬液；所述组分A包括以下重量份数的原料：NaCl 5‑11份、KCl 0.1‑1份、葡萄糖0.1‑2份、KH2PO4 0.01‑0.1份、Na2HPO4 0.02‑0.05份；所述组分B包括以下重量份数的原料：分散酶0.01‑0.08份、木瓜蛋白酶0.01‑0.08份、NaCl 500‑900份、KCl 20‑70份、葡萄糖20‑200份、KH2PO4 2‑8份、Na2HPO4 2‑8份；所述组分C包括以下重量份数的原料：NaCl 4‑10份、KCl 0.1‑1份、CaCl2 0.2‑0.5份、MgCl2 0.1‑0.5份、4‑羟乙基哌嗪乙磺酸1‑4份、葡萄糖0.5‑2份。

【技术特征摘要】
1.一种用于分离贴壁细胞的消化液，其特征在于，包括组分A、组分B和组分C；组分A为细胞洗涤液，组分B为细胞解离液，组分C为细胞重悬液；所述组分A包括以下重量份数的原料：NaCl5-11份、KCl0.1-1份、葡萄糖0.1-2份、KH2PO40.01-0.1份、Na2HPO40.02-0.05份；所述组分B包括以下重量份数的原料：分散酶0.01-0.08份、木瓜蛋白酶0.01-0.08份、NaCl500-900份、KCl20-70份、葡萄糖20-200份、KH2PO42-8份、Na2HPO42-8份；所述组分C包括以下重量份数的原料：NaCl4-10份、KCl0.1-1份、CaCl20.2-0.5份、MgCl20.1-0.5份、4-羟乙基哌嗪乙磺酸1-4份、葡萄糖0.5-2份。2.根据权利要求1所述的用于分离贴壁细胞的消化液，其特征在于，所述组分A包括以下重量份数的原料：NaCl8份、KCl0.4份、葡萄糖1份、KH2PO40.06份、Na2HPO40.0475份。3.根据权利要求1所述的用于分离贴壁细胞的消化液，其特征在于，所述组分B包括以下重量份数的原料：分散酶0.01-0.05份、木瓜蛋白酶0.02-0.05份、Na...

【专利技术属性】
技术研发人员：张彬，张金保，陈燕，
申请(专利权)人：妙顺上海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31