一种反硝化脱氮复合菌剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种反硝化脱氮复合菌剂，是由以下体积百分比的菌种制得的：副球菌20‑30%、苍白杆菌20‑30%、无色杆菌40‑60%。本发明专利技术还公开了该反硝化脱氮复合菌剂的制备方法及其在含硝酸盐氮污水处理中的应用。本发明专利技术的反硝化脱氮复合菌剂通过副球菌、苍白杆菌和无色杆菌的协同作用，具有适应性强、处理时间短、硝酸盐氮降解率和COD的去除率高的优异性能，应用于污水中，显著提高污水中硝酸盐氮的降解率和COD的去除率，大大节约成本，具有广阔的应用前景。

A denitrification and denitrification compound microbial agent and its preparation and Application

The invention discloses a composite denitrification agent, is composed of the following volume percentage of strains prepared: 20 Paracoccus 30%, 30%, 20 Ochrobactrum Achromobacter 40 60%. The invention also discloses the preparation method of the denitrification and denitrification compound bactericide and its application in the treatment of nitrate containing nitrogen sewage. The invention of denitrification by Compound Bacterium Paracoccus, pale synergy coli and Achromobacter, has strong adaptability, short processing time, nitrate degradation rate and COD removal rate of high performance, used for sewage, significantly improve the removal rate of nitrate nitrogen in wastewater and the degradation rate of COD and greatly save the cost, and has broad application prospects.

【技术实现步骤摘要】
一种反硝化脱氮复合菌剂及其制备方法和应用
本专利技术属于环境生物工程和水处理领域，具体涉及一种反硝化脱氮复合菌剂及其制备方法和应用。
技术介绍
随着中国经济的快速发展，大量的氮、磷等污染物排入水体，造成水体的严重富营养化，已经构成威胁人类生存环境的原因之一。国内水体中氮的污染以硝态氮和亚硝态氮形式氮的污染最为严重，而生物除氮是去除水体中氮污染最有效的方法之一。生物脱氮技术是利用微生物的反硝化作用实现废水中硝态氮和亚硝态氮等污染物的去除，目前存在反硝化速率较低、处理效率较差等问题。为解决这一问题，通常是以降低处理负荷、增加污水处理时间、提升污泥沉降性等方法来提高反硝化处理效果，然而这些措施处理效果很不稳定，还会增加污水处理费用，并且增加经济压力。
技术实现思路
本专利技术提供了一种适应性强、处理时间短、硝酸盐氮降解率和COD的去除率的反硝化脱氮复合菌剂。本专利技术还提供了该反硝化脱氮复合菌剂的制备方法和应用。本专利技术的目的是通过如下技术方案实现的：一种反硝化脱氮复合菌剂，是由以下体积百分比的菌种制得的：副球菌20-30%、苍白杆菌20-30%、无色杆菌40-60%。所述的，副球菌的活菌数为1×107-1×109CFU/g；所述苍白杆菌的活菌数为1×107-1×1010CFU/g；所述无色杆菌的活菌数为1×105-1×109CFU/g。一种反硝化脱氮复合菌剂的制备方法，是由以下步骤制备得到的：1）分别取斜面保种的副球菌、苍白杆菌和无色杆菌各两环，分别接种于固体培养基中培养，培养温度25-35℃，培养时间1-3d，分别得副球菌、苍白杆菌和无色杆菌的活化菌种；2）将富集培养基分装至250mL三角瓶中，50-100mL/瓶；将副球菌、苍白杆菌和无色杆菌的活化菌种分别于斜面上接取两环于富集培养基中进行摇床振荡培养，摇床振荡培养转速120-180r/min，摇床振荡培养温度25-35℃，摇床振荡培养时间1-3d，分别得副球菌、苍白杆菌和无色杆菌的种子液；3）将副球菌、苍白杆菌和无色杆菌的种子液按照2-10%的接种量分别接种于液体培养基进行摇床振荡培养，摇床振荡培养转速120-180r/min，摇床振荡培养温度25-35℃，当副球菌培养液中活菌数达到1×107-1×109CFU/g、苍白杆菌培养液中活菌数达到1×107-1×1010CFU/g和无色杆菌培养液中活菌数达到1×105-1×109CFU/g，分别停止培养；4）将步骤3）得到的菌液按照体积百分比：副球菌20-30%、苍白干菌30-40%，和无色杆菌40-60%，混合，得复合菌液；5）取50-100mL复合菌液，6000r/min离心去除上清液，得湿菌体；将湿菌体重悬于50-100mL生理盐水中，离心，重复操作2-3次，得复合菌悬液；所述无菌生理盐水的浓度为0.9%；6）将复合菌悬液和保护剂混合均匀，喷雾干燥，喷雾干燥进风温度120-180℃，进料流量12-17ml/min，得反硝化脱氮复合菌剂。所述的，固体培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，具体组成：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，NaCl5g/L，琼脂15-20g/L，其余为水。所述的，富集培养基的组成：KNO32-5g/L，蛋白胨5-10g/L，牛肉膏5-10g/L，其余为水。所述的，液体培养基的组成：乙酸钠1-20g/L，KNO30.1-5g/L，K2HPO4·3H2O0.1-2g/L，MgSO4·7H2O0.1-1g/L，其余为水。所述的，复合菌悬液和保护剂的质量比为100：5-15；所述保护剂为β-环糊精、麦芽糊精和羧甲基纤维素中的一种。一种反硝化脱氮复合菌剂的应用，所述反硝化脱氮复合菌剂在含硝酸盐氮污水处理中的应用。所述的，反硝化脱氮复合菌剂在每升污水中的接种量为1-15g，处理温度25-35℃；污水的C/N比为4-10，pH为6-10。所述的，污水中硝酸盐氮的最高浓度为700mg/L。所述的副球菌（Paracoccussp.）购自中国普通微生物菌种保藏管理中心（地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所），编号：CGMCCNo.13607。所述的苍白杆菌（ochrobactrumsp.）购自中国普通微生物菌种保藏管理中心（地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所），编号：CGMCCNo.8839。所述的无色杆菌（Achromobactersp.）购自中国普通微生物菌种保藏管理中心（地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所），编号：CGMCCNo.7139。本专利技术的有益效果：1.本专利技术的反硝化脱氮复合菌剂通过副球菌、苍白杆菌和无色杆菌的协同作用，具有适应性强、处理时间短、硝酸盐氮降解率和COD的去除率高的优异性能，应用于污水中，显著提高污水中硝酸盐氮的降解率和COD的去除率，大大节约成本，具有广阔的应用前景。2.本专利技术的制备方法简单，将反硝化脱氮复合菌剂制备成菌粉，减小体积，便于贮存和运输，反硝化脱氮复合菌剂投放至污水中可迅速活化，适应能力强，快速形成优势菌群，显著降低水体中氮素含量，且无亚硝酸盐氮积累，对于大规模利用该反硝化脱氮复合菌剂处理污水具有重要意义。附图说明图1为硝酸盐氮降解率曲线。图2为COD去除率曲线。具体实施方式为进一步了解本专利技术，下面结合实施例对本专利技术做进一步的描述。实施例1一种反硝化脱氮复合菌剂，是由以下体积百分比的菌种制得的：副球菌20%、苍白杆菌20%、无色杆菌60%。所述的，副球菌的活菌数为1×107-1×109CFU/g；所述苍白杆菌的活菌数为1×107-1×1010CFU/g；所述无色杆菌的活菌数为1×105-1×109CFU/g。一种反硝化脱氮复合菌剂的制备方法，是由以下步骤制备得到的：1）分别取斜面保种的副球菌、苍白杆菌和无色杆菌各两环，分别接种于固体培养基中培养，培养温度25℃，培养时间3d，分别得副球菌、苍白杆菌和无色杆菌的活化菌种；2）将富集培养基分装至250mL三角瓶中，50mL/瓶；将副球菌、苍白杆菌和无色杆菌的活化菌种分别于斜面上接取两环于富集培养基中进行摇床振荡培养，摇床振荡培养转速180r/min，摇床振荡培养温度25℃，摇床振荡培养时间1d，分别得副球菌、苍白杆菌和无色杆菌的种子液；3）将副球菌、苍白杆菌和无色杆菌的种子液按照2%的接种量分别接种于液体培养基进行摇床振荡培养，摇床振荡培养转速180r/min，摇床振荡培养温度35℃，当副球菌培养液中活菌数达到1×107-1×109CFU/g、苍白杆菌培养液中活菌数达到1×107-1×1010CFU/g和无色杆菌培养液中活菌数达到1×105-1×109CFU/g，分别停止培养；4）将步骤3）得到的菌液按照体积百分比：副球菌20%、苍白杆菌20%、无色杆菌60%，混合，得复合菌液；5）取50mL复合菌液，6000r/min离心去除上清液，得湿菌体；将湿菌体重悬于100mL生理盐水中，离心，重复操作2次，得复合菌悬液；所述无菌生理盐水的浓度为0.9%；6）将复合菌悬液和保护剂混合均匀，喷雾干燥，喷雾干燥进风温度180℃，进料流量12ml/min，得反硝化脱氮复合菌剂。所述的，固体培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，具体组成：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，NaCl5本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种反硝化脱氮复合菌剂，其特征在于，是由以下体积百分比的菌种制得的：副球菌20‑30%、苍白杆菌20‑30%、无色杆菌40‑60%。

【技术特征摘要】
1.一种反硝化脱氮复合菌剂，其特征在于，是由以下体积百分比的菌种制得的：副球菌20-30%、苍白杆菌20-30%、无色杆菌40-60%。2.根据权利要求1所述的反硝化脱氮复合菌剂，其特征在于，所述副球菌的活菌数为1×107-1×109CFU/g；所述苍白杆菌的活菌数为1×107-1×1010CFU/g；所述无色杆菌的活菌数为1×105-1×109CFU/g。3.一种权利要求1或2所述的反硝化脱氮复合菌剂的制备方法，其特征在于，是由以下步骤制备得到的：1）分别取斜面保种的副球菌、苍白杆菌和无色杆菌各两环，分别接种于固体培养基中培养，培养温度25-35℃，培养时间1-3d，分别得副球菌、苍白杆菌和无色杆菌的活化菌种；2）将富集培养基分装至250mL三角瓶中，50-100mL/瓶；将副球菌、苍白杆菌和无色杆菌的活化菌种分别于斜面上接取两环于富集培养基中进行摇床振荡培养，摇床振荡培养转速120-180r/min，摇床振荡培养温度25-35℃，摇床振荡培养时间1-3d，分别得副球菌、苍白杆菌和无色杆菌的种子液；3）将副球菌、苍白杆菌和无色杆菌的种子液按照2-10%的接种量分别接种于液体培养基进行摇床振荡培养，摇床振荡培养转速120-180r/min，摇床振荡培养温度25-35℃，当副球菌培养液中活菌数达到1×107-1×109CFU/g、苍白杆菌培养液中活菌数达到1×107-1×1010CFU/g和无色杆菌培养液中活菌数达到1×105-1×109CFU/g，分别停止培养；4）将步骤3）得到的菌液按照体积百分比：副球菌20-30%、苍白干菌30-40%，和无色杆菌40-60%，混合，得复合菌液；5）取50-100mL复合菌液，600...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨革，刘胜格，车程川，巩志金，刘金锋，安笑迟，
申请(专利权)人：曲阜师范大学，
类型：发明
国别省市：山东,37